陳雅鑫，何裊裊，蔡樹蕓，楊 婷，陳 暉，張 怡，洪 專, ，張怡評,

（1.福建農(nóng)林大學食品科學學院，福建福州 350001；2.自然資源部第三海洋研究所，海洋生物資源開發(fā)利用工程技術(shù)創(chuàng)新中心，福建廈門 361005）

銅藻（）又名丁香屋、草茜、竹茜菜，屬褐藻門（Phaeophyta）馬尾藻科（Sargassaceae），是北太平洋西部特有的暖溫帶海藻，主要分布于我國沿海省份如遼寧、浙江、福建及廣東等地。銅藻作為一種常見經(jīng)濟褐藻，是海藻場構(gòu)建的主要褐藻之一，具有較高生態(tài)價值，常被稱為“海中森林”、“海洋牧場”。目前，銅藻主要作為藻膠工業(yè)的重要原料，被廣泛應(yīng)用到醫(yī)學、食品、飼料和有機肥料方面?，F(xiàn)如今我國關(guān)于銅藻的研究仍局限于多糖類如褐藻酸、褐藻淀粉和褐藻糖膠等成分，而對于其他具有生物活性的化學成分的研究還較少，造成銅藻資源未能得到充分利用。

巖藻黃質(zhì)（Fucoxanthin，F(xiàn)X）亦被稱為褐藻黃素、巖藻黃素，是海洋中第二大類胡蘿卜素，主要分布在褐藻中，具有抗腫瘤、抗炎、抗氧化、減肥、降血糖等作用，在保健食品、醫(yī)藥等領(lǐng)域有廣泛的應(yīng)用前景，具有較高經(jīng)濟價值?，F(xiàn)已有報道稱銅藻中巖藻黃質(zhì)含量較高，可作為提取巖藻黃質(zhì)的優(yōu)良原料。目前，國內(nèi)大多關(guān)注于海帶（）、裙帶菜（）、羊棲菜（）中巖藻黃質(zhì)的提取工藝，對銅藻中巖藻黃質(zhì)的提取純化工藝的報道很少，以銅藻鮮藻作為原料進行提取更為少見，且傳統(tǒng)有機溶劑浸提方法提取時間長、溶劑消耗多、提取成本高；超聲輔助提取法常應(yīng)用于植物中活性成分的提取，其原理是利用超聲波產(chǎn)生空化效應(yīng)來加速植物細胞中活性成分的溶出，具有提取時間短、溫度低、安全性高等優(yōu)點。此外，大孔吸附樹脂層析法是初步純化最常用的方法，但尚無其對巖藻黃質(zhì)吸附與解析的動力學研究，缺乏大孔吸附樹脂應(yīng)用在巖藻黃質(zhì)分離純化的相關(guān)理論依據(jù)。

基于此，本研究以新鮮銅藻為原料，采用超聲輔助有機溶劑萃取法提取，并對巖藻黃質(zhì)的提取工藝進行單因素與響應(yīng)面優(yōu)化，隨后采用6 種不同大孔吸附樹脂純化巖藻黃質(zhì)，通過靜態(tài)吸附與解析動力學研究，以及動態(tài)吸附與解析研究篩選出最優(yōu)性能的大孔吸附樹脂，建立巖藻黃質(zhì)大孔吸附柱層析最佳分離工藝。本研究可為銅藻資源的進一步開發(fā)利用提供重要的理論基礎(chǔ)，也為巖藻黃質(zhì)的提取純化提供技術(shù)支撐。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

新鮮銅藻 福建泉州海域，經(jīng)自然資源部第三海洋研究所王初生鑒定為銅藻；大孔吸附樹脂D101、AB-8 安徽三星樹脂科技有限公司；KP20、HPD750、KP670 廈門科譜儀器設(shè)備有限公司；PS30 北京德易科技有限責任公司；甲醇（色譜純）、乙醇（分析純） 西隴化工有限公司；巖藻黃素標品純度99.53%，本實驗室自制。

FS400 多功能粉碎機 江蘇常州機械設(shè)備有限公司；KQ-500E 超聲波清洗器 昆山市超聲儀器有限公司；LC-2010AD 高效液相色譜儀 日本島津公司；HZ-9212SB 水浴恒溫振蕩器 太倉市華利達設(shè)備有限公司；Hei-VAP Expert 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 德國Heidolph公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 銅藻巖藻黃質(zhì)提取工藝 新鮮的銅藻用自來水清洗，紗布過濾去除多余的水分，瀝干后的銅藻首先用藥用鍘刀進行初步剪碎，再用多功能粉碎機粉碎至長度約5～8 mm。參照王樂等的方法并做適當調(diào)整：精確稱取一定量的絞碎銅藻，按照一定濃度的乙醇溶液與一定液料比均勻混合，在超聲功率為500 W 下超聲一定時間，重復提取一定次數(shù)。提取結(jié)束后，使用離心機在8000 r/min 轉(zhuǎn)速下離心5 min。取上清液，得到巖藻黃質(zhì)粗提取液。吸取1 mL 粗提取液過0.22 μm 濾膜，通過HPLC 測定其峰面積，計算銅藻提取液中巖藻黃質(zhì)得率。

1.2.2 單因素實驗

1.2.2.1 不同乙醇濃度的影響 取5 g 處理過的銅藻各5 份，分別加入150 mL 不同乙醇濃度（v/v：60%、70%、80%、90%及100%）的水溶液，在超聲功率為500 W 下提取20 min，過濾，測定?？疾觳煌掖紳舛葘r藻黃質(zhì)提取得率的影響。

1.2.2.2 超聲時間的影響 取5 g 處理過的銅藻各5 份，各加入90%乙醇水溶液150 mL，在超聲功率為500 W 下超聲分別提取10、20、30、40、50 min，過濾，測定?？疾觳煌崛r間對巖藻黃質(zhì)提取得率的影響。

1.2.2.3 液料比的影響 取5 g 處理過的銅藻各5 份，分別加入10、20、30、40、50 倍量的90%乙醇水溶液進行超聲提取20 min（超聲功率為500 W），過濾，測定?？疾觳煌毫媳葘r藻黃質(zhì)提取得率的影響。

1.2.2.4 提取次數(shù)的影響 取5 g 處理過的銅藻各3 份，加入150 mL 90%乙醇水溶液，在超聲功率為500 W 下超聲提取20 min，過濾，測定，同法提取第二、三次?？疾觳煌崛〈螖?shù)對巖藻黃質(zhì)提取得率的影響。

1.2.3 巖藻黃質(zhì)提取工藝響應(yīng)面優(yōu)化 在單因素實驗的基礎(chǔ)上，綜合考慮各因素影響，選取乙醇濃度（A）、料液比（B）、超聲時間（C）為自變量，以巖藻黃質(zhì)提取得率為響應(yīng)值，采用響應(yīng)面分析軟件DesignExpert 8.0 所提供的Box-Behnken 模型對巖藻黃質(zhì)提取條件進行優(yōu)化。試驗因素與水平的取值見表1。

表1 響應(yīng)面因素水平設(shè)計Table 1 Factors and levels of response surface test

1.2.4 高效液相色譜（HPLC）檢測與巖藻黃質(zhì)提取得率計算 用HPLC 檢測巖藻黃質(zhì)含量。色譜條件：色譜柱Shim－pack VP－ODS C（5 μm，250 mm×4.6 mm）；流動相為甲醇-水溶液（92:8）；流速設(shè)定1.0 mL·min；檢測波長取450 nm，進樣量為10 μL。將不同質(zhì)量濃度的巖藻黃質(zhì)標準溶液過0.22 μm 濾膜后進樣，以質(zhì)量濃度和峰面積分別為橫、縱坐標作標準曲線，標準曲線方程為Y=46.84X+259.71（=0.9998），將樣品在保留時間相同的峰面積代入標準曲線計算巖藻黃質(zhì)含量，之后按照以下公式計算樣品中巖藻黃質(zhì)提取得率：

1.2.5 巖藻黃質(zhì)分離純化工藝 考慮到適合工廠化生產(chǎn)，本實驗考慮采用大孔吸附樹脂吸附-乙醇洗脫體系。

1.2.5.1 大孔吸附樹脂及粗提液的預(yù)處理 取大孔吸附樹脂（KP20、D101、AB-8、HPD750、KP670、PS30）用乙醇室溫下密封浸泡24 h，用水洗至中性備用（長時間不用的話，用乙醇密封浸泡）。取一定體積的銅藻粗提液置于旋蒸瓶中，在38 ℃下減壓濃縮，除去部分乙醇（約占70%）后停止?jié)饪s，測定其巖藻黃質(zhì)含量為84 μg/mL，將巖藻黃質(zhì)提取濃縮液置于4 ℃密封避光保存。

1.2.5.2 大孔吸附樹脂的靜態(tài)吸附與解析動力學稱取經(jīng)過預(yù)處理的上述6 種吸附樹脂各5 g 置于100 mL 三角瓶中，各加25 mL 巖藻黃質(zhì)提取濃縮溶液（84 μg/mL），加入25 mL 的水，水浴搖床（轉(zhuǎn)速為200 r/min）在25 ℃下振搖吸附，每隔一段時間后，測定濾液中的巖藻黃質(zhì)濃度。吸附2 h 后，取吸附巖藻黃質(zhì)后的樹脂用超純水清洗后，置于100 mL 的三角瓶中，加入95%的乙醇溶液50 mL，置于水浴搖床25 ℃下振搖解析，每隔一段時間后測定解析液中巖藻黃質(zhì)濃度。根據(jù)樹脂的吸附能力和解析率對其進行預(yù)選。根據(jù)以下公式計算樹脂的吸附容量、吸附率和解析率：

其中Q代表吸附平衡時的吸附容量（mg/g 濕樹脂），A 代表吸附率（%），D 代表解析率（%），C和C是溶液中巖藻黃質(zhì)的初始濃度和平衡濃度（mg/L），V為初始樣品溶液的體積（L），W 是測試的濕樹脂的重量（g），V是解析溶液的體積（L），C代表解析溶液中巖藻黃質(zhì)的濃度（mg/L）。

分別采用兩種經(jīng)典吸附動力學方程對大孔樹脂吸附動力學進行擬合，公式如下：

擬一階動力學方程：

擬二階動力學方程：

式中k為準一級動力學方程常數(shù)（min）；k為準二級動力學方程常數(shù)（mg/（g·min））；Q為吸附平衡時樹脂吸附量（mg/g 濕樹脂）；Q為t 時刻樹脂吸附量（mg/g 濕樹脂）；t 為吸附時間（min）。

1.2.5.3 大孔吸附樹脂的動態(tài)吸附與解析 取2.5 cm×30 cm 的樹脂層析柱，分別裝上KP670、KP20 樹脂各40 g，用2 倍柱體積乙醇洗脫，后用水洗凈，將乙醇濃度為25%的提取濃縮液（88.03 μg/mL），以1.0 mL/min 加入樹脂柱中，流出液每20 mL 收集一份，按“1.2.4”項下方法測定巖藻黃質(zhì)含量。當流出液濃度為上樣液濃度的5%時，到達最大上樣量（泄露點），停止上樣吸附，此時為最佳上樣容積。并分別繪制KP670 和KP20 樹脂的泄露曲線。依次采用3 倍柱體積的水，30%乙醇，60%乙醇除雜，然后95%乙醇洗脫，主要收集該部分洗脫液（橙紅色色帶），進行巖藻黃質(zhì)含量檢測。

1.3 數(shù)據(jù)處理

試驗所得數(shù)據(jù)，利用Design-Expert 8.0.6 軟件對各影響因素進行ANOVA 統(tǒng)計學方差分析，繪出3D 曲面圖，考察各影響因素對銅藻提取巖藻黃質(zhì)提取得率的影響。采用Origin 9.0 軟件進行回歸分析，檢驗回歸模型中各項的顯著性，去除非顯著項，確定簡化動力學擬合模型。

2 結(jié)果與分析

2.1 銅藻提取巖藻黃質(zhì)單因素分析

2.1.1 乙醇濃度對銅藻中巖藻黃質(zhì)提取得率的影響

由圖1 可知，隨著乙醇濃度的增大，巖藻黃質(zhì)提取得率呈上升趨勢，到80%乙醇時得率有明顯提高，之后沒有明顯變化。這可能是因為80%乙醇已能均勻與銅藻碎塊充分接觸，使巖藻黃質(zhì)的傳質(zhì)過程進行完全，此時大部分巖藻黃質(zhì)已被提取出。因此選擇60%～100%的乙醇濃度進行響應(yīng)面試驗。

圖1 乙醇濃度對銅藻中巖藻黃質(zhì)提取得率的影響Fig.1 The effect of ethanol concentration on the extraction yield of fucoxanthin in Sargassum horneri

2.1.2 超聲時間對銅藻中巖藻黃質(zhì)提取得率的影響

由圖2 可知，隨著提取時間的延長，銅藻中巖藻黃質(zhì)的提取得率緩慢增大，20 min 時達到最大值，之后提取得率不再增加，反而出現(xiàn)下降。可能是由于短時間色素沒有完全溶出，原理是傳質(zhì)過程需要有足夠的時間達到平衡，時間太短，提取還沒有達到平衡；隨著提取時間的延長，巖藻黃質(zhì)全部被溶出；當繼續(xù)延長提取時間，巖藻黃質(zhì)因長時間超聲的高功率作用下產(chǎn)生的熱量而遭受破壞，產(chǎn)生降解，導致提取得率減少。故超聲時間選擇10～30 min 進行響應(yīng)面試驗。

圖2 超聲時間對銅藻中巖藻黃質(zhì)提取得率的影響Fig.2 The effect of ultrasound time on the extraction yield of fucoxanthin in Sargassum horneri

2.1.3 液料比對銅藻中巖藻黃質(zhì)提取得率的影響由圖3 可知，隨液料比的增大，巖藻黃質(zhì)提取得率慢慢提高，當液料比為40：1 mL/g 時達到較大值，再加大液料比，提取液中巖藻黃質(zhì)基本不變。說明溶劑體積達到40：1 mL/g 時已幾乎可將巖藻黃質(zhì)完全溶出。其原理在于該提取屬于固一液萃取過程，化學位差（濃度差）是該過程的推動力。當浸提劑用量增加到一定程度，傳質(zhì)達到平衡后，被提取物溶出率不再增加，而僅僅是更加均勻的分布在溶劑中。因此，考慮到成本，液料比選擇20:1～40:1 mL/g 進行響應(yīng)面試驗。

圖3 液料比對銅藻中巖藻黃質(zhì)提取得率的影響Fig.3 The effect of liquid-to-material ratio on the extraction yield of fucoxanthin in Sargassum horneri

2.1.4 提取次數(shù)對銅藻中巖藻黃質(zhì)提取得率的影響

由圖4 可知第一次提取得率最高，為185.41 μg/g，第二次提取量明顯降低，為11.34 μg/g，到第三次提取則無巖藻黃質(zhì)?？傮w來說，第一次的提取得率已達到了總提取得率的94.23%，說明銅藻中巖藻黃質(zhì)已大部分被提取出?？紤]到提取次數(shù)增加，會增加提取劑消耗，且不利于后面蒸發(fā)溶劑進行濃縮的操作，最終選擇提取一次即可。

圖4 提取次數(shù)對銅藻中巖藻黃質(zhì)提取得率的影響Fig.4 The effect of extraction times on the extraction yield of fucoxanthin in Sargassum horneri

2.2 巖藻黃質(zhì)提取工藝響應(yīng)面優(yōu)化分析

綜合考慮各因素影響，選取乙醇濃度（A）、液料比（B）、超聲時間（C）做響應(yīng)面優(yōu)化試驗，試驗因素與水平的取值表見表1。

根據(jù)Box-Behnken 的原理，試驗中對三因素各取三水平，設(shè)計了三因素三水平共17 個試驗點的響應(yīng)面分析試驗，并用統(tǒng)計軟件Design Expert 8.0 對試驗數(shù)據(jù)進行回歸分析。結(jié)果見表2。

表2 響應(yīng)面試驗設(shè)計及結(jié)果Table 2 Design and results of response surface test

經(jīng)過ANOVA 方差分析，各因素經(jīng)過擬合后，得到回歸方程為：Y=206.19+17.30A+11.76B+5.44C-1.15AB-1.10AC-2.10BC-26.04A-6.14B-9.94C。方差分析結(jié)果見表3，可以看出模型的值＜0.0001，說明該二次多項式回歸方程模式達到了極顯著的水平，具有較高的可靠性。決定系數(shù)=0.9958，表明試驗值與預(yù)測值高度相關(guān)，即響應(yīng)值的變化由99.58%來自于所選變量，且失擬項（0.5611＞0.05）不顯著，說明實際值與模型預(yù)測值有較好的擬合度。由值可得，各因素對響應(yīng)值的影響大小順序為：A（乙醇濃度）＞B（液料比）＞C（超聲時間）。

表3 回歸模型方差分析Table 3 Variance analysis of regression model

綜上所述，試驗所建立的數(shù)學回歸模型擬合度較高，可以較好地反映各因素與響應(yīng)值間的真實關(guān)系。因此，可以用該數(shù)學模型預(yù)測銅藻中巖藻黃質(zhì)的提取工藝條件。

為了更好地對結(jié)果進行理解與分析，利用Design Expert 軟件繪制了響應(yīng)面的三維圖和等高線圖，以研究各因素交互作用（AB、AC、BC）對因變量（巖藻黃質(zhì)提取得率）的影響。結(jié)果見圖5。

圖5 不同相互作用下對巖藻黃質(zhì)提取得率的影響Fig.5 The effect of different interactions on the extraction yield of fucoxanthin

響應(yīng)面能夠反映出單因素交互作用對響應(yīng)值的影響能力大小，響應(yīng)面越陡，說明這種因素對響應(yīng)值影響越顯著。一般地，等高線圖越接近橢圓狀則說明相關(guān)性越顯著，由圖可觀察到，交互項對FX 提取得率的影響大小為：BC＞AB＞AC，其中BC 交互項的影響呈顯著性。

2.3 巖藻黃質(zhì)提取優(yōu)化工藝驗證試驗

根據(jù)DesignExpert 對提取工藝進行優(yōu)化，可知最佳工藝條件為乙醇濃度為95.43%，液料比38.42:1，超聲時間為21.31 min，提取液中巖藻黃質(zhì)理論提取得率為202.21 μg/g。結(jié)合實際操作，以修正后的提取條件（乙醇濃度95%，液料比38:1，超聲時間21 min，提取次數(shù)為1 次）進行銅藻中巖藻黃質(zhì)驗證試驗，平行做3 組，得到巖藻黃質(zhì)的平均提取得率為200.28 μg/g，RSD＜5%，與理論值的相對誤差為0.95%。說明篩選出的最佳條件準確可靠。

2.4 巖藻黃質(zhì)分離純化工藝

2.4.1 大孔吸附樹脂的靜態(tài)吸附與解析動力學 本研究分別采用擬一階動力學方程和擬二階動力學方程對樹脂的靜態(tài)吸附曲線進行擬合，分析了不同大孔吸附樹脂對巖藻黃質(zhì)的吸附速率變化情況。

圖6給出了KP20、D101、AB-8、HPD750、KP670和PS30 6 種樹脂在室溫下吸附銅藻提取物中巖藻黃質(zhì)的吸附量（Q）與接觸時間（t）的關(guān)系圖。圖中顯示，KP670 和PS30 的吸附平衡時間接近，約80 min，其次是KP20、AB-8、HPD750 樹脂，平衡時間為100 min 左右，D101 所需時間最長，約在130 min 后達到吸附平衡。

圖6 不同樹脂吸附巖藻黃質(zhì)的吸附動力學曲線Fig.6 Adsorption kinetic curves of fucoxanthin by different resins

圖7顯示了6 種樹脂的擬一階動力學模型和擬二階動力學模型，擬合結(jié)果的動力學參數(shù)如表4 所示。根據(jù)擬合結(jié)果中相關(guān)系數(shù)，擬一階動力學方程的擬合結(jié)果更為良好，其值均大于0.97，且大部分＞0.99。此外，根據(jù)擬合出的理論計算值Q（cal）與實際實驗值Q（exp）相比較，一階動力學方程所得的結(jié)果與實際值非常接近，差值更小，結(jié)果表明擬一階動力學模型能更好的詮釋6 種樹脂吸附巖藻黃質(zhì)的動力學行為。根據(jù)擬一階速率常數(shù)k，吸附率大于0.02 min的樹脂依次為：KP670＞PS30＞KP20。

圖7 不同樹脂吸附巖藻黃質(zhì)的擬一階動力學模型（A）和擬二階動力學模型（B）Fig.7 The pseudo-first-order kinetic model (A) and pseudosecond-order kinetic model (B) of fucoxanthin adsorption by different resins

表4 不同樹脂吸附巖藻黃質(zhì)的動力學參數(shù)Table 4 Kinetic parameters of fucoxanthin adsorption by different resins

圖8顯示在室溫下，6 種大孔吸附樹脂對巖藻黃質(zhì)解析動力學。從圖中觀察到，樹脂的解析速率相比吸附速率均明顯提高，其中KP20 最快達到解析平衡，約10 min，PS30 與KP670 平衡速率接近，在20 min左右達到解析平衡，其次是AB-8 與HPD750，而D101 樹脂的平衡解析量和解析速率皆最低。根據(jù)洗脫液的濃度（C）與解析速率大小，性能較高的三種樹脂排序依次為：KP20＞PS30＞KP670。結(jié)合吸附能力結(jié)果，最終選擇KP20、PS30、KP670 這三種樹脂作為適合分離純化巖藻黃質(zhì)的層析樹脂。

圖8 不同樹脂的洗脫動力學曲線Fig.8 Elution kinetic curves of different resins

2.4.2 大孔吸附樹脂的靜態(tài)吸附與解析性能驗證為了驗證6 種樹脂的靜態(tài)吸附與解析動力學結(jié)果，采用“1.2.5.2”項下公式，分別對6 種樹脂的吸附率與解析率進行考察，結(jié)果如表5。

表5 不同樹脂對巖藻黃質(zhì)的靜態(tài)吸附與解析Table 5 Static adsorption and desorption of fucoxanthin by different resins

由表5 可知，KP670 型大孔吸附樹脂對銅藻提取液中巖藻黃質(zhì)的吸附能力最強，其次是PS30 和KP20 型樹脂；而 KP20、PS30 型大孔吸附樹脂對巖藻黃質(zhì)的解析能力強于KP670，其吸附與解析能力結(jié)果與“2.4.1”動力模型擬合結(jié)果一致，說明篩選出的最佳樹脂準確可靠。

考慮到PS30 樹脂較昂貴，放大化生產(chǎn)成本較高，故選擇KP20、KP670 兩種樹脂為吸附材料，放大3 倍進行吸附后，考察樹脂動態(tài)吸附性能與解析率，進一步確定最佳層析樹脂。

2.4.3 大孔吸附樹脂的動態(tài)吸附與解析 按“1.2.5.3”項下方法測定兩種樹脂的最大上樣量，并繪制泄露曲線。

當流出液濃度為上樣液濃度的5%時，到達泄露點，認為此時為最佳上樣容積。由圖9（A）可見，在到12 份流出液中濃度仍為0，當流出液收集到第16 份時為4.6 μg/mL，達到上樣液濃度的5%，因此選擇上樣液容積為320 mL 為KP670 型樹脂的最大上樣量。

圖9 巖藻黃質(zhì)在KP670 型（A）、KP20 型（B）大孔吸附樹脂上的泄露曲線Fig.9 The leakage curve of fucoxanthin on KP670 type (A) and KP20 type (B) macroporous resin

同理，由圖9（B）可觀察到當流出液收集到第9 份開始有巖藻黃質(zhì)流出，在第11 份流出液中檢測到巖藻黃質(zhì)濃度為4.8 μg/mL，達到上樣液濃度的5%，因此選擇上樣液容積為220 mL 為KP20 型樹脂的最大上樣量。

同時，為了更好比較兩種樹脂的純化效果，按“1.2.5.3”項下方法進行巖藻黃質(zhì)在樹脂上的動態(tài)解析，分離純化結(jié)果見表6。

表6 大孔吸附樹脂純化工藝結(jié)果Table 6 Purification process results of macroporous resins

結(jié)果表明，對于KP670 大孔吸附樹脂，乙醇的洗脫率為89.53%，固形物由3.13 g 減少到0.09 g，質(zhì)量分數(shù)從0.90%升至31.07%；對于KP20 大孔吸附樹脂，固形物由2.15 g 減少到0.08 g，質(zhì)量分數(shù)從0.90%升至24.56%，洗脫率為87.51%。綜合對比，KP670 大孔吸附樹脂對銅藻中巖藻黃質(zhì)的分離純化效果更好。

3 討論與結(jié)論

本研究首先采用超聲波輔助有機溶劑萃取法提取銅藻中的巖藻黃質(zhì)，在單因素實驗基礎(chǔ)上，通過Box-Behnken 模型對巖藻黃質(zhì)提取條件進行優(yōu)化，經(jīng)回歸分析和方差分析，得到簡化回歸方程，模型擬合結(jié)果良好（=0.9958），最終得到最優(yōu)提取工藝為：乙醇濃度95%，超聲時間21 min，液料比38:1，提取次數(shù)為1 次，所得巖藻黃質(zhì)的提取得率為200.28 μg/g鮮重（FW），折算成干重為0.93 mg/g（DW），相比于胡永東等采用超聲輔助有機溶劑萃取法所得的巖藻黃質(zhì)提取率為0.70 mg/g 干重（DW），本研究中提取工藝所得的巖藻黃質(zhì)提取得率有所提高，這說明，銅藻鮮藻中巖藻黃質(zhì)提取得率要高于銅藻干藻，同樣的結(jié)果也出現(xiàn)在海帶、馬尾藻等的提取得率對比中，原因可能是一方面樣品干燥過程容易使巖藻黃質(zhì)受熱分解；一方面干燥樣品中吸附作用加強，影響巖藻黃質(zhì)浸出，且不易過濾，導致巖藻黃質(zhì)的損失，故直接采用新鮮銅藻作為巖藻黃質(zhì)原料是更為高效的方法。

其次，本研究基于大孔吸附樹脂的一步柱層析方法對巖藻黃質(zhì)粗提取液進行純化。通過6 種型號大孔吸附樹脂的靜態(tài)吸附和解析動力學結(jié)果比較，KP670、KP20 大孔吸附樹脂表現(xiàn)出較優(yōu)的綜合性能，其靜態(tài)吸附過程符合擬一階動力學方程（均＞0.99）。最后，在大孔樹脂的動態(tài)吸附與解析動力學中對兩種樹脂進一步比較，KP670 大孔吸附樹脂對銅藻中巖藻黃質(zhì)的分離純化效果比KP20 大孔吸附樹脂好，其純化后經(jīng)HPLC 檢測其質(zhì)量分數(shù)從0.09%提高到31.07%，提高了30.98%，且?guī)r藻黃質(zhì)的洗脫率為89.53%，損失較少，說明選用KP670 大孔吸附樹脂能更好地分離純化巖藻黃質(zhì)。在巖藻黃質(zhì)純化方面，近年來已有學者使用硅膠柱層析分離純化海帶、鼠尾藻、球等鞭金藻等中的巖藻黃質(zhì)，對于使用大孔樹脂從銅藻提取液中分離巖藻黃質(zhì)鮮有文獻報道，且未揭示大孔吸附樹脂對巖藻黃質(zhì)的吸附動力學規(guī)律。相比之下，本研究采用的大孔吸附樹脂具有比表面積大，條件溫和，再生處理方便等優(yōu)點，采用吸附-解析一步柱層析工藝即獲得高含量的巖藻黃質(zhì)，成本低，操作簡易，適用于工業(yè)化生產(chǎn)，同時為巖藻黃質(zhì)的提取純化工藝提供了新的理論參考。

考慮到本文采用大孔樹脂吸附技術(shù)對巖藻黃質(zhì)僅進行了初步的純化，巖藻黃質(zhì)的純度和濃度都有待提高，后續(xù)可以采用制備型液相或高效液相色譜法得到更高純度的巖藻黃質(zhì)，并采用質(zhì)譜技術(shù)對巖藻黃質(zhì)進行結(jié)構(gòu)鑒定，對其生物活性和功能進行進一步研究。