原發(fā)性肝癌(PLC)是最為常見的腫瘤之一，全球每年約新增84.1萬患者

。據(jù)報(bào)道，我國作為肝病大國，每年新增病例和死亡患者均占全球總數(shù)的50%，給我國人民造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)壓力和生活負(fù)擔(dān)。微小RNA(miRNA)是一類內(nèi)源性非編碼RNA分子，其可通過靶向特定的靶基因表達(dá)參與生命活動(dòng)的調(diào)節(jié)

。近年來研究發(fā)現(xiàn)，miRNA在PLC組織中異常表達(dá)，與腫瘤細(xì)胞增殖、腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移及預(yù)后等密切相關(guān)

。微小RNA-652-3P(microRNA-652-3P，miR-652-3P)已被證實(shí)在纖維化過程中起著重要作用

。研究發(fā)現(xiàn)，患有肝纖維化的患者容易發(fā)展為肝硬化，持續(xù)存在的肝纖維化可導(dǎo)致肝硬化，甚至肝癌

。跨膜p24運(yùn)輸?shù)鞍?(TMED5)是一種跨膜蛋白，屬于p24家族。Zheng等

研究顯示，在肝癌細(xì)胞中，過表達(dá)的TMED3可促進(jìn)癌細(xì)胞遷移和侵襲。miR-652-3P和TMED5在PLC中的表達(dá)尚未見文獻(xiàn)報(bào)道，本研究檢測miR-652-3P和TMED5在PLC中的表達(dá)并分析二者在PLC中的臨床意義，為miR-652-3P和TMED5評(píng)估患者預(yù)后奠定基礎(chǔ)。

生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)的監(jiān)管手段過于單一，完全依靠監(jiān)管部門進(jìn)行監(jiān)管，沒有發(fā)揮民眾和媒體的監(jiān)管作用；缺乏有效性，主要對(duì)生物醫(yī)藥產(chǎn)品的外包裝、產(chǎn)品標(biāo)識(shí)和名稱等外在問題進(jìn)行監(jiān)管，而很少關(guān)注其生產(chǎn)過程和生產(chǎn)技術(shù)等內(nèi)在問題，導(dǎo)致很多“金玉其外，敗絮其中”的生物醫(yī)藥產(chǎn)品流入市場；以抽樣監(jiān)管為主，無法全面監(jiān)管所有生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)和生物醫(yī)藥產(chǎn)品生產(chǎn)和銷售的全過程。

1 材料與方法

1.1 一般資料 選取2015年12月至2018年12月于本院行手術(shù)治療的PLC患者82例為研究對(duì)象，其中男48例，女34例；年齡37～74歲，平均(56.08±12.11)歲。取手術(shù)切除的肝癌組織為觀察組，同時(shí)選取手術(shù)切除的邊緣正常組織(距離癌組織>5 cm)為對(duì)照組。所有患者肝癌組織標(biāo)本均經(jīng)病理科兩位以上醫(yī)師確診為PLC。

1.2 納入及排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：①PLC患者符合相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)

；②患者術(shù)前未接受任何放化療或藥物治療；③患者臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①患者并發(fā)其他惡性腫瘤；②患有呼吸衰竭或心肌梗死者；③繼發(fā)性肝癌患者；④腎功能異?；颊?。以上標(biāo)本收集均取得患者的同意，也通過本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，符合《世界醫(yī)學(xué)協(xié)會(huì)赫爾辛基宣言》。

1.3 主要試劑及儀器 TRIzol試劑購自武漢科昊佳生物科技有限公司；SYBR?Green Quantitative RT-qPCR Kit，PrimeScript RT reagent Kit均購自日本Takara公司；CFX96 qRT-PCR儀購自德國Bio-Rad公司。

1.4.2 檢測PLC組織中miR-652-3P和TMED5 mRNA表達(dá)水平 從-80℃冰箱中取出樣本，使用TRIzol試劑提取組織中總RNA，依據(jù)cDNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒操作步驟逆轉(zhuǎn)錄RNA得到cDNA，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀對(duì)miR-652-3P、TMED5 mRNA及內(nèi)參U6、β-actin進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)，miR-652-3P以U6為內(nèi)參，TMED5 mRNA以β-actin為內(nèi)參，引物由上海生工合成。反應(yīng)條件：95℃，3 min；95℃，30 s；61℃，30 s；72℃，30 s；38個(gè)循環(huán)。對(duì)miR-652-3P、TMED5 mRNA相對(duì)表達(dá)量采用2

法計(jì)算。

2.4 miR-652-3P和TMED5表達(dá)與PLC患者預(yù)后的關(guān)系 miR-652-3P高表達(dá)PLC患者平均生存時(shí)間為(31.98±0.79)個(gè)月，顯著長于miR-652-3P低表達(dá)患者平均生存時(shí)間[(23.63±1.59)個(gè)月](χ

=14.102，

<0.05)，見圖3。TMED5高表達(dá)PLC患者平均生存時(shí)間為(21.46±1.39)個(gè)月，顯著短于TMED5低表達(dá)患者平均生存時(shí)間[(32.68±0.74)個(gè)月](χ

=28.656，

<0.05)，見圖4。

1.4 研究方法

1.5 隨訪 所有PLC患者均接受隨訪，術(shù)后第1年內(nèi)每隔3個(gè)月患者入院復(fù)查1次；術(shù)后第2、3年，每半年患者入院復(fù)查1次，并每3個(gè)月進(jìn)行隨訪。期間統(tǒng)計(jì)患者開始治療至因任何原因引起死亡的時(shí)間。本次隨訪截止日期2020年12月。

這衣服我們不穿誰穿？我一下買回來兩套，我和你姥姥每人一套。母親站起來，扯著衣襟原地旋轉(zhuǎn)了一圈。年輕時(shí)穿，太俏，怕人家說?，F(xiàn)在再不穿，還等什么時(shí)候？

1.4.1 樣品采集 術(shù)中采集患者癌組織及邊緣正常組織(距離癌組織>5 cm)，將所有組織放置液氮中速凍20 min，然后將組織保存于-80℃冰箱中待檢。

2 結(jié)果

隨著對(duì)miRNA的深入研究，發(fā)現(xiàn)了許多在PLC中異常表達(dá)的miRNA

。有研究發(fā)現(xiàn)miRNA可通過調(diào)控細(xì)胞的增殖、分化、遷移等生物學(xué)行為，在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中起重要作用

。因此探討腫瘤細(xì)胞中miRNA的表達(dá)，可為腫瘤的治療提供新思路。

2.2 miR-652-3P和TMED5表達(dá)與PLC患者臨床病理特征的關(guān)系 根據(jù)miR-652-3P表達(dá)水平均值(0.45)將PLC患者分為高表達(dá)組37例，低表達(dá)組45例；根據(jù)TMED5 mRNA表達(dá)水平均值(2.13)將PLC患者分為高表達(dá)組42例，低表達(dá)組共40例，觀察miR-652-3P和TMED5表達(dá)與PLC患者臨床病理特征的關(guān)系。結(jié)果顯示miR-652-3P和TMED5表達(dá)與TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、淋巴血管間隙浸潤相關(guān)(

<0.05)，與患者年齡、性別、腫瘤大小及分化程度無關(guān)(

>0.05)。見表3、表4。

2.3 PLC組織中miR-652-3P和TMED5相關(guān)性 生物信息學(xué)預(yù)測(miRTarBase數(shù)據(jù)庫)顯示，miR-652-3P和TMED5存在結(jié)合位點(diǎn)，見圖1。Pearson相關(guān)性分析顯示，PLC組織中miR-652-3P和TMED5表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(

=-0.619，

=<0.001)。見圖2。

(4) 軌旁安全設(shè)備中的安全通信模塊接收到RSSP-I安全通信包后，立即進(jìn)行安全協(xié)議解析和驗(yàn)證，并將驗(yàn)證通過的安全數(shù)據(jù)提交給安全應(yīng)用模塊來執(zhí)行計(jì)算。

2.5 影響PLC患者預(yù)后的危險(xiǎn)因素分析 單因素分析表明，TNM分期、淋巴血管間隙有浸潤、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、miR-652-3P低表達(dá)和TMED5高表達(dá)均是PLC患者預(yù)后不良的危險(xiǎn)因素。多因素分析表明，淋巴結(jié)有轉(zhuǎn)移、miR-652-3P低表達(dá)和TMED5高表達(dá)是PLC患者預(yù)后不良的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(

=2.030，95%

為1.608～2.568；

=2.152，95%

為1.424～3.251；

=2.172，95%

為1.507～3.129，

<0.05)。見表5。

3 討論

2.1 miR-652-3P和TMED5表達(dá)水平比較 見表2。

回顧性分析我院2015年01月-2016年12月內(nèi)收治的50例老年消化性潰瘍患者的臨床資料,調(diào)查患者的臨床癥狀表現(xiàn)。50例患者中男性27人,女性23人,患者年齡62.5-81.2歲,平均(69.8±7.6)歲。其中38人(76.00%)存在明顯癥狀,為癥狀發(fā)作就診患者,癥狀包括反復(fù)性腹痛、反酸燒心、嘔血黑便、泛酸噯氣、食欲不佳等;與此同時(shí),有12人(24.00%)無明顯的臨床表現(xiàn),為健康體檢偶發(fā)患者。利用X線鋇餐檢查可確診50例患者均為老年消化性潰瘍患者,包括胃潰瘍34人(68.00%)、十二指腸潰瘍16人(32.00%)。

miR-652-3P在不同的癌細(xì)胞中表達(dá)水平不同，對(duì)癌細(xì)胞的影響也不相同。有資料顯示，miR-652-3P在胃癌中表達(dá)水平異常升高

，且促進(jìn)癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲，從而影響癌癥的發(fā)展。Zhu等

研究顯示miR-652-3P過表達(dá)可促進(jìn)膀胱癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲。但miR-652-3P對(duì)肝癌的影響尚不清晰，僅有文獻(xiàn)報(bào)道m(xù)iR-652-3P在肝纖維化小鼠的肝組織中表達(dá)水平明顯低于健康小鼠的肝組織

。肝纖維化是肝硬化的必經(jīng)階段，肝纖維化是由多種信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路共同控制的復(fù)雜過程，最終可導(dǎo)致肝硬化，甚至肝癌

。本研究發(fā)現(xiàn)觀察組組織miR-652-3P相對(duì)表達(dá)水平明顯低于對(duì)照組，提示miR-652-3P可能參與PLC的發(fā)生。本研究同時(shí)發(fā)現(xiàn)miR-652-3P與PLC患者TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、淋巴血管間隙浸潤相關(guān)，提示miR-652-3P可能與PLC的發(fā)展有關(guān)。Kaplan-Meier法顯示miR-652-3P高表達(dá)患者平均生存時(shí)間長于miR-652-3P低表達(dá)患者，PLC患者預(yù)后不良可能與miR-652-3P水平有關(guān)。

跨膜p24運(yùn)輸?shù)鞍?TMED)家族的成員充當(dāng)物質(zhì)運(yùn)輸?shù)氖荏w，參與蛋白質(zhì)的囊泡運(yùn)輸和先天性免疫信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。有報(bào)道稱，TMED在腫瘤的發(fā)生和發(fā)展中扮演重要角色

。TMED5參與調(diào)控經(jīng)典的Wnt/wg信號(hào)通路，TMED5過表達(dá)可促進(jìn)細(xì)胞的惡性表型，如細(xì)胞的增殖、周期和上皮細(xì)胞向間充質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化進(jìn)程及細(xì)胞的侵襲、遷移和凋亡以及耐藥性

。Wnt蛋白是重要的發(fā)育信號(hào)分子，在細(xì)胞增殖、分化、侵襲和遷移中發(fā)揮重要作用。Yang等

研究顯示，高表達(dá)的TMED5可以激活Wnt/wg信號(hào)通路，促進(jìn)宮頸癌的發(fā)展和進(jìn)程。本研究發(fā)現(xiàn)觀察組TMED5 mRNA相對(duì)表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組，提示TMED5在原發(fā)性肝癌的發(fā)生中可能扮演重要角色。本研究還發(fā)現(xiàn)TMED5與患者TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、淋巴血管間隙浸潤相關(guān)，提示TMED5可能參與原發(fā)性肝癌的發(fā)展。Kaplan-Meier法顯示TMED5低表達(dá)患者平均生存時(shí)間明顯長于TMED5高表達(dá)患者，提示TMED5可能與原發(fā)性肝癌患者的不良預(yù)后相關(guān)。

最近有證據(jù)表明，miRNAs可通過不同機(jī)制上調(diào)靶基因的表達(dá)。王朝等

研究顯示，過表達(dá)的miR-455-3p可以通過靶向負(fù)調(diào)控TMED3基因，從而促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞凋亡，同時(shí)能增強(qiáng)癌細(xì)胞的放射敏感性。生物信息學(xué)預(yù)測顯示，miR-652-3P和TMED5存在結(jié)合位點(diǎn)。經(jīng)Pearson相關(guān)性分析顯示，PLC組織中miR-652-3P和TMED5呈負(fù)相關(guān)性，提示在PLC中miR-652-3P可能與TMED5共同作用，從而影響PLC的發(fā)生、發(fā)展，調(diào)控腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲。多因素分析表明，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、miR-652-3P低表達(dá)和TMED5高表達(dá)是PLC患者預(yù)后不良的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，提示miR-652-3P低表達(dá)和TMED5高表達(dá)患者預(yù)后不良風(fēng)險(xiǎn)性較高。

煤礦機(jī)械工作環(huán)境十分惡劣，空氣中多伴有粉塵水汽等物質(zhì)，同時(shí)環(huán)境十分潮濕。為延長機(jī)械的使用壽命，就必須在日常工作中加強(qiáng)維護(hù)保養(yǎng)，禁止所有不規(guī)范的操作流程。此外，還要選擇某一固定時(shí)間檢測機(jī)械設(shè)備，第一時(shí)間更換損耗過重的機(jī)械部件，徹底清除安全隱患，保證井下作業(yè)的安全。在機(jī)械設(shè)備的操作過程中要嚴(yán)格遵循適度原則，盡可能防止發(fā)生超載和超速的現(xiàn)象，有效預(yù)防由于過度使用導(dǎo)致的機(jī)械損耗，提高機(jī)械設(shè)備使用效率。

綜上所述，miR-652-3P和TMED5與PLC的發(fā)生及預(yù)后有關(guān)，相關(guān)機(jī)制還需進(jìn)一步深入研究。

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