張麗紅， 董 雯， 趙 丹， 尹婉宜， 沈 揚(yáng)， 劉清池， 馬 兵

河北醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院 血液內(nèi)科，河北 石家莊 050031

多發(fā)性骨髓瘤(multiple myeloma，MM)是一種惡性單克隆漿細(xì)胞異常增生的惡性疾病，主要臨床表現(xiàn)為高鈣血癥、腎功能損害、貧血等[1]。 MM 約占所有血液系統(tǒng)惡性腫瘤的10%[2]，盡管近年來(lái)通過(guò)引入新型藥物，MM 患者的治療效果得到了顯著改善，但該病患者預(yù)后仍不樂(lè)觀[3]。 MM 患者報(bào)告時(shí)表現(xiàn)出的癥狀通常是非特異性的，多數(shù)患者就診時(shí)往往病程已較長(zhǎng)，不利于疾病的早期診斷和治療[4]。 白細(xì)胞介素-6(interleukin-6，IL-6)是白細(xì)胞分泌的重要炎癥介質(zhì)，IL-6 導(dǎo)致炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、聚集，進(jìn)而導(dǎo)致炎癥損傷。 有研究報(bào)道，MM 患者外周血IL-6 等促炎因子及趨化因子表達(dá)異常[5]。 同時(shí)，也有研究報(bào)道，當(dāng)MM 病情發(fā)展時(shí)患者炎癥因子活化可導(dǎo)致細(xì)胞炎癥損傷，導(dǎo)致病情惡化[6]。 而血管細(xì)胞粘附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1，VCAM-1)是一種重要的細(xì)胞粘附分子[7]。 有研究報(bào)道，MM 患者VCAM-1 表達(dá)異常，且與患者疾病分期有關(guān)[8]。 本研究旨在探討VCAM-1、白細(xì)胞介素-2(interleukin-2，IL-2)、IL-6 在MM 中的表達(dá)及其意義。 現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取自2020 年1 月至2021 年12 月河北醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院收治的68 例MM 患者為觀察組。 納入標(biāo)準(zhǔn):符合MM 的診斷標(biāo)準(zhǔn)[9]；年齡>18 歲；預(yù)期生存期>3 個(gè)月。排除標(biāo)準(zhǔn):合并其他血液病者；合并主要器官功能損害者，合并外傷和手術(shù)史者，合并其他惡性腫瘤者；近期有感染者。 另選取同一時(shí)間于本院體檢的30 例健康體檢者為常規(guī)組。 觀察組中，男性36 例，女性32 例；年齡35 ~76 歲，平均年齡(61.26 ± 9.31)歲；國(guó)際系統(tǒng)分期(international staging system，ISS):Ⅰ期9 例，Ⅱ期24 例，Ⅲ期35 例；初診64 例，復(fù)發(fā)4 例；病情穩(wěn)定期23 例，活動(dòng)期45 例。 常規(guī)組中，男性14 例，女性16 例；年齡35 ~ 71 歲，平均年齡(60.24 ±8.69)歲。兩組患者的性別比例及年齡比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。所有研究對(duì)象均簽署知情同意書。

1.2 研究方法 所有研究對(duì)象均采集外周靜脈血2 ~3 ml，3 500 r/min 離心10 min，分離血清，上清液收集到EP 管中，在－80℃下保存待測(cè)。 用酶聯(lián)免疫法測(cè)定VCAM-1、IL-2 和IL-6 的水平，檢測(cè)試劑盒從ZYscience 獲得。 檢測(cè)過(guò)程嚴(yán)格按照試劑盒的說(shuō)明和實(shí)驗(yàn)室慣例進(jìn)行。 設(shè)置空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔和待測(cè)樣品孔，將樣品稀釋液、標(biāo)準(zhǔn)稀釋液和待測(cè)血清依次加入孔板中，充分混合，靜置120 min。 加入底物工作液，加入終止液并充分混合，然后用酶標(biāo)儀測(cè)定吸光度值。

1.3 觀察指標(biāo) 比較觀察組與常規(guī)組研究對(duì)象，以及不同疾病分期、不同疾病狀態(tài)MM 患者的VCAM-1、IL-6、IL-2 水平。 繪制受試者工作特征曲線(receiver operating characteristic curve，ROC)評(píng)估各指標(biāo)診斷MM 的效能。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 20.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理。 符合正態(tài)分布的計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，多組間比較采用單因素方差分析，多組間兩兩比較用LSD-t 檢驗(yàn)。 計(jì)數(shù)資料用例(百分率)表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。 偏態(tài)計(jì)量資料采用中位數(shù)(p25，p75)表示，多組間比較采用man-Whitney U 檢驗(yàn)、Kruskal Walls H(K)檢驗(yàn)，進(jìn)一步雙向比較采用Dunn-Bonferroni 檢驗(yàn)。 評(píng)估指標(biāo)的診斷效果采用ROC 圖，指標(biāo)間的相關(guān)性分析采用Spearman 相關(guān)分析。 以P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組VCAM-1、IL-6、IL-2 水平比較 觀察組患者的IL-2水平低于常規(guī)組，VCAM-1、IL-6 水平均高于常規(guī)組，組間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 見(jiàn)表1。

2.2 不同疾病分期MM患者VCAM-1、IL-2、IL-6 水平比較 MM Ⅲ期患者的VCAM-1、IL-6 水平高于Ⅰ期和Ⅱ期，且MM Ⅱ期患者的IL-6 水平高于Ⅰ期，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)(P <0.05)。 MM 不同疾病分期患者的IL-2 水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 見(jiàn)表2。

表1 兩組VCAM-1、IL-2、IL-6 水平比較(±s)

表1 兩組VCAM-1、IL-2、IL-6 水平比較(±s)

組別 VCAM-1/ng·ml-1IL-2/pg·ml-1IL-6/pg·ml-1常規(guī)組(n ＝30) 207.55(121.83，329.56) 452.07(274.32，548.19) 38.70 ±9.60觀察組(n ＝68) 1 053.64(555.76，1 475.94) 229.63(163.23，316.87) 112.64 ±35.02 Z/t 值 －6.806 －4.717 11.348 P 值 <0.05 <0.05 <0.05

表2 不同疾病分期MM 患者VCAM-1、IL-6、IL-2 水平比較(±s)

表2 不同疾病分期MM 患者VCAM-1、IL-6、IL-2 水平比較(±s)

注，與Ⅰ期比較，①P<0.05；與Ⅱ期比較，②P<0.05

組別 VCAM-1/ng·ml-1IL-6/pg·ml-1IL-2/pg·ml-1Ⅰ期(n ＝9) 589.48(221.65，684.91) 35.66 ±5.12 256.29(207.11，305.60)Ⅱ期(n ＝24) 608.58(405.89，1 035.23) 119.47 ±9.75①234.68(161.71，298.23)Ⅲ期(n ＝35) 1 463.44(1 138.41，1 901.99)①②182.79 ±16.09①②217.43(193.26，266.87)Z/F 值 29.823 156.043 1.348 P 值 <0.05 <0.05 <0.05

2.3 不同疾病狀態(tài)MM 患者VCAM-1、IL-2、IL-6 水平比較 MM 活動(dòng)期患者的VCAM-1、IL-6 水平均高于穩(wěn)定期，IL-2水平低于穩(wěn)定期，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 見(jiàn)表3。

2.4 VCAM-1、IL-2、IL-6 診斷MM 的效能 ROC 曲線顯示，VCAM-1、IL-2、IL-6 均是診斷MM 的有效指標(biāo)(P <0.05)。見(jiàn)表4 及圖1、2。

組別 VCAM-1/ng·ml-1IL-2/pg·ml-1IL-6/pg·ml-1活動(dòng)期(n ＝45) 1 203.62(730.74，1 592.12) 208.68(182.07，262.15) 141.39 ±30.07穩(wěn)定期(n ＝23) 639.10(427.24，887.99) 265.29(199.92，353.89) 83.89 ±24.05 Z/t 值 －3.571 －2.184 7.953 P 值 <0.05 <0.05 <0.05

表4 VCAM-1、IL-2、IL-6 診斷MM 的效能

圖1 VCAM-1、IL-6 診斷MM 的ROC 曲線

圖2 IL-2 診斷MM 的ROC 曲線

2.5 MM 患者VACM-1 與IL-2、IL-6 的相關(guān)性 Spearman相關(guān)分析顯示，VACM-1 水平與IL-2 呈負(fù)相關(guān)(r ＝－0.379，P<0.05)，與IL-6 呈正相關(guān)(r ＝0.605，P<0.05)。

3 討論

MM 的腫瘤細(xì)胞高度依賴骨髓微環(huán)境，而VCAM-1 作為一種血管粘附分子，可以通過(guò)調(diào)節(jié)VCAM-1 軸引發(fā)骨髓基質(zhì)細(xì)胞的變化，進(jìn)而引起骨髓微環(huán)境的顯著改變，導(dǎo)致MM 疾病的發(fā)生和發(fā)展[10]。 然而，關(guān)于VCAM-1 水平及其在MM患者中意義的研究有限，VCAM-1 可應(yīng)用于MM 診斷的實(shí)際切點(diǎn)仍未明確。 近年來(lái)，隨著研究的不斷深入，全身性炎癥反應(yīng)與MM 發(fā)病之間的聯(lián)系被不斷探索，持續(xù)的炎癥狀態(tài)為惡性腫瘤的發(fā)展建立了微環(huán)境，而惡性腫瘤則促進(jìn)了炎癥反應(yīng)的發(fā)生[11]。 王碧薇等[12]研究表明，MM 患者的IL-6 水平與患者分期和預(yù)后相關(guān)。 Matthes 等[13]研究表明，IL-6 是一種旁分泌因子，由微環(huán)境產(chǎn)生，主要由骨髓系細(xì)胞產(chǎn)生。 因此，IL-6 是MM 疾病發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的一個(gè)重要血清指標(biāo)。而IL-2 在多種惡性血液病中發(fā)揮著重要作用，相關(guān)研究表明，MM 患者外周血單個(gè)細(xì)胞核中IL-2 的產(chǎn)生存在障礙，且MM 患者的IL-2 低于健康人群[14]。 因此，本研究選擇上述指標(biāo)進(jìn)行分析，以期為MM 的臨床診斷和治療提供參考。

以往臨床上對(duì)MM 的診斷主要是根據(jù)臨床表現(xiàn)和細(xì)胞組織等形態(tài)學(xué)檢查，但隨著檢測(cè)手段的進(jìn)步，近年來(lái)流式細(xì)胞儀、細(xì)胞遺傳學(xué)和血液遺傳學(xué)方法已逐漸應(yīng)用于MM 的診斷[15]。 但上述檢查方法仍受可行性和資源的限制，難以在三級(jí)預(yù)防中應(yīng)用。 本研究結(jié)果顯示，觀察組MM 患者的VCAM-1 和IL-6 水平明顯高于常規(guī)組，IL-2 水平明顯低于常規(guī)組，提示了通過(guò)各項(xiàng)指標(biāo)診斷MM 的可能性。 本研究還發(fā)現(xiàn)，VCAM-1、IL-2 和IL-6 是診斷MM 的有效指標(biāo)，其中，IL-6的療效最高。 VCAM-1 診斷MM 的臨界點(diǎn)為398.19 ng/ml，可供臨床參考。 但本研究只是一個(gè)單中心研究，納入的樣本量相對(duì)較少，預(yù)計(jì)大樣本量的多中心研究將進(jìn)一步驗(yàn)證研究結(jié)果。

本研究結(jié)果還顯示，不同疾病狀態(tài)和不同疾病分期的MM 患者之間的VCAM-1 水平比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，Ⅲ期及活動(dòng)期MM 患者的VCAM 和IL-6 水平更高，進(jìn)一步表明了VCAM-1 和IL-6 在MM 疾病進(jìn)展中的作用。 VCAM-1 是一種細(xì)胞粘附分子，由血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生，其高表達(dá)表明機(jī)體的血管內(nèi)皮細(xì)胞被激活。 VCAM-1 表達(dá)水平的升高參與了白細(xì)胞和血管內(nèi)皮功能受損之間的相互作用，可以促進(jìn)炎癥因子的釋放和T 細(xì)胞亞群的變化，影響疾病的進(jìn)展[16]。 而且，機(jī)體的炎癥微環(huán)境和免疫功能的改變都是影響惡性腫瘤發(fā)展的重要因素。 在MM 患者的骨髓微環(huán)境中，可以觀察到輔助性Th1/Th2 平衡紊亂，調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞增加，導(dǎo)致MM 細(xì)胞的免疫逃逸，以及Th17 等分泌的細(xì)胞因子介導(dǎo)的促腫瘤作用[17]，所以，進(jìn)展期MM 患者的VCAM-1 水平更高。 本研究結(jié)果還發(fā)現(xiàn)，MM 患者的VCAM-1 水平和IL-6 水平呈正相關(guān)，這也支持上述結(jié)論。 同時(shí)，惡性腫瘤的生長(zhǎng)、發(fā)展和轉(zhuǎn)移均與新生血管有關(guān)[18]。 有研究報(bào)道，VCAM-1 可以促進(jìn)血管生成，具有血管內(nèi)皮細(xì)胞的趨化性[19]，這也可能是VCAM-1 參與MM 疾病進(jìn)展的機(jī)制之一。本研究數(shù)據(jù)顯示，不同疾病階段的MM 患者IL-2 水平相似，但I(xiàn)L-2 水平在活動(dòng)期較低，并與VCAM-1 水平呈負(fù)相關(guān)。考慮到所有Ⅰ~Ⅲ期的MM 患者的外周血單核細(xì)胞中IL-2的產(chǎn)生都有障礙，而且，患者的IL-2 功能障礙水平相似，因此出現(xiàn)了這種結(jié)果。

綜上所述，VCAM-1、IL-2 和IL-6 水平在MM 患者中變化明顯，有助于MM 的診斷。