文│沈思思（黑龍江省農業(yè)科學院畜牧獸醫(yī)分院）

坦不蘇病毒（TMUV）屬于黃病毒科黃病毒屬，是一種單股正鏈RNA蟲媒病毒，1955年首次在馬來西亞吉隆坡被發(fā)現(xiàn)并分離出來。但它與人類或動物健康的相關性尚未完全揭示。黃病毒屬有許多成員，包括登革熱病毒（DENV）、黃熱病病毒（YFV）、日本腦炎病毒（JEV）和寨卡病毒都是人畜共患病和重要的媒介傳播病毒，每年導致數(shù)百萬人感染，從輕微發(fā)熱癥狀到出血性或神經疾病。在自然界中，鳥類通常是許多黃病毒的擴增宿主和貯存宿主。2010年4月，在中國鴨TMUV首次被確定為鴨產蛋下降綜合征的病原體，該病的特點是產蛋量大幅下降，受感染的產蛋鴨和種鴨的采食量突然下降，還出現(xiàn)了神經癥狀、卵巢出血、卵泡閉鎖和淋巴細胞浸潤等主要病理變化。感染率和發(fā)病率很高，總死亡率為5%～15%。禽TMUV已在家禽業(yè)造成嚴重的經濟損失，由于黃病毒的人畜共患病特性，禽TMUV可能會引起公共衛(wèi)生問題。因此，筆者總結了禽TMUV病毒基因組特征、宿主范圍、流行病學和系統(tǒng)發(fā)育、臨床癥狀、檢測方法以及治療的研究進展，以期為后續(xù)研究提供參考。

一、基因組特征

坦不蘇病毒是單股正鏈RNA病毒，基因組長度約為11kb，有一個開放閱讀框，兩側是5′端和3′端非編碼區(qū)（UTR）。5′端有m7GPPaMP結構，3′端沒有poly A尾。通過病毒和細胞蛋白酶的后續(xù)切割，多聚蛋白被加工成基因組5′端的3種結構蛋白：衣殼（C）蛋白、前膜（PrM）蛋白和包膜（E）蛋白；7種非結構（NS）蛋白編碼：NS1、NS2A、NS2B、NS3、NS4A、NS4B和NS5。結構蛋白形成病毒顆粒并參與病毒與宿主細胞的融合，在病毒受體結合、進入和融合中發(fā)揮重要作用，而NS蛋白參與病毒RNA復制、病毒粒子組裝和先天免疫逃避反應。

二、宿主范圍

TMUV宿主范圍廣泛，包括蚊子、雞、鴨、鵝、鴿子和麻雀等。產蛋下降綜合征影響了肉鴨、蛋鴨及多種品種鴨，包括北京鴨、紹興鴨、龍巖鴨、番鴨和家養(yǎng)野鴨等。體外實驗室研究表明，鴨TMUV在廣泛的哺乳動物細胞系（即Vero、BHK21、HeLa、HepG2和SH-SY5Y）、禽源細胞系（即DEF、GEF和DF-1）和蚊媒細胞系（即C6/36和白紋伊蚊）中復制良好。此外，一項人工感染研究發(fā)現(xiàn)，BALB/c小鼠和昆明小鼠在腦內接種后對鴨TMUV敏感，但對皮下或鼻腔接種不敏感，病理變化與許多其他腦炎性黃病毒的典型特征相似，嚴重可導致死亡。該病毒在大腦和脾中大量復制。此外，一項針對鴨業(yè)工人的調查報告顯示，70%以上的受試血清樣本中檢測到鴨TMUV抗體，其中約50%的口腔拭子樣本對TMUV RNA呈陽性，表明其可能從鴨傳播到人或從鴨傳播到其他非禽宿主上。隨后的體內研究表明，鴨TMUV不能在皮下接種的恒河猴上引起病毒血癥或臨床癥狀，但可以通過感染誘導引起鴨TMUV特異性體液免疫反應。這些數(shù)據(jù)表明，鴨TMUV在體內和體外的多種非禽類細胞中復制良好，但鴨TMUV引起人類疾病的風險沒有其他黃病毒高。

三、流行病學和系統(tǒng)發(fā)育

2010年TMUV首次在中國東南部鴨子中被確診為未知原因引起的鴨產蛋下降綜合征，同年，該病迅速蔓延到中國大部分養(yǎng)鴨地區(qū)，包括許多沿海省份和周邊地區(qū)及北京市、河北省、山東省、江蘇省、安徽省、浙江省、江西省和福建省等。隨后，中國西南部和南部報告的病例數(shù)量不斷增加，包括2012年的廣東省和廣西壯族自治區(qū)、2013年的重慶市和2015年的上海市。TMUV感染鴨的臨床癥狀包括精神沉郁、生長遲緩、食欲減退，甚至癱瘓或死亡。被感染的產蛋鴨產蛋數(shù)量嚴重減少（產蛋量減少20%～60%，偶爾高達90%），病理剖檢觀察到嚴重的卵巢出血、卵巢炎和卵巢退化。此外，分子系統(tǒng)發(fā)育分析將中國分離的所有TMUV歸為一枝。

馬來西亞該分離株更接近所有中國TMUV菌株。但蚊媒傳播的TMUV并沒有被證明是人類和動物疾病的病原體。直到2012年，在馬來西亞的幾個養(yǎng)鴨場，4～7周齡的肉雞鴨群中出現(xiàn)了幾次以共濟失調、跛足和進行性癱瘓為特征的神經系統(tǒng)疾病。在進行大體病理學和組織學觀察、病毒分離、雛鴨繁殖和基因組測序后，確認該病的病原為馬來西亞鴨坦不蘇病毒，其基因組RNA序列與中國的相關鴨TMUV相似。

2002年，一項研究報告顯示，在泰國同一地區(qū)的庫蚊和哨兵鴨中檢測到TMUV。但直到2013年才有關于TMUV在鳥類中感染的疾病報告，當時泰國養(yǎng)鴨場新出現(xiàn)了一種嚴重的減蛋綜合征傳染病。這種疾病迅速蔓延，給養(yǎng)鴨業(yè)造成了巨大的經濟損失。最終被確診為鴨TMUV。根據(jù)系統(tǒng)發(fā)育分析，泰國的TMUV與馬來西亞的傳統(tǒng)鴨TMUV和中國新分離的鴨TMUV相同。

四、臨床癥狀

TMUV是一種由蚊媒傳播的病毒性黃病毒，與WNV和Usutu病毒（USUV）一樣，其自然維持周期涉及鳥類和蚊子。鳥類感染的病因以流涕、腹瀉、厭食和社會行為紊亂等突發(fā)性急性癥狀為特征。受感染的動物還表現(xiàn)出嚴重的神經系統(tǒng)疾病，包括腦炎、行動困難、共濟失調和癱瘓。養(yǎng)殖場感染率可達到90%，具體取決于飼養(yǎng)條件，死亡率5%～30%不等，并可能因繼發(fā)感染而增加。脾、肝、腎和大腦通常出現(xiàn)肉眼可見的病變。組織學分析顯示，感染器官出現(xiàn)了多種微觀變化，包括出血、炎癥、增生、巨噬細胞和淋巴細胞浸潤等。在種鴨常見臨床表現(xiàn)為卵巢受損，伴有大量炎癥、出血和充血，并伴有器官退化。TMUV感染可導致胚胎退化和排卵量急劇下降，這被稱為產蛋下降綜合征，造成養(yǎng)鴨業(yè)的重大經濟損失。最近的一項研究報告稱，所有年齡段的鴨子都可能感染TMUV。盡管在一些鴨群中，幼齡動物的感染程度更嚴重，但在老種鴨中易感性更高。此外，老齡的被感染鴨病毒脫落期較長，載量較高，沒有臨床癥狀，是隱性攜帶者，表明這些動物在疫情暴發(fā)期間發(fā)揮了重要作用。

目前已經證實TMUV是一種鳥類嗜神經病毒，盡管在神經元水平上的擴散機制仍知之甚少。最近一項關于雛鴨模型的研究揭示了血腦屏障進入中樞神經系統(tǒng)的方式。早期幾乎沒有臨床癥狀，盡管病毒在大腦中復制并由此誘導炎性細胞因子，但血腦屏障似乎不易被病毒滲透。因此，有必要等到感染晚期才能看到與血腦屏障破壞和微血管內皮細胞擴散相關的神經癥狀，導致感染動物的炎癥和致命性腦炎。

雖然TMUV感染禽類的癥狀得到廣泛描述，但很少感染其他脊椎動物宿主。2020年，Yurayart等報告，TMUV感染小鼠腦內的神經發(fā)病機制和全球傳播。這些動物表現(xiàn)出廣泛的臨床癥狀，導致死亡的嚴重內部器官損傷。Tang等調查了禽類養(yǎng)殖場工人中TMUV感染情況，收集口腔拭子和血清樣本進行TMUV分子檢測和血清學篩查。分子方法為半巢式RT-PCR，而血清學檢測方法為IgG ELISA和病毒中和試驗。超過70%的血清樣本為陽性，TMUV可以從48%的口腔拭子中分離出來。感染工人也表現(xiàn)出無癥狀。TMUV對人類有潛在的傳播風險，建議將TMUV視為一種新出現(xiàn)的人畜共患病病原體，盡管與其他禽類黃病毒成員一樣，人類傳播事件沒有進一步的人傳人現(xiàn)象。泰國最近的一項研究報告也稱，人類對TMUV血清呈陽性，并且沒有臨床癥狀。這項研究強調了對人類，特別是接觸禽類動物的高風險人群進行前瞻性監(jiān)測和調查的重要性。還需進一步的研究來更好地評估哺乳動物的潛在結果，尤其是神經表現(xiàn)及其在傳播中的作用。

五、檢測方法

自從首次分離出TMUV以來，已經開發(fā)了幾種檢測技術用來診斷該病毒。診斷工具的開發(fā)是為了防止養(yǎng)殖場大規(guī)模疫情暴發(fā)，保護家禽業(yè)免受經濟損失。在生產和出口大量家禽的國家預防疫情暴發(fā)是一個重大問題，尤其是對我國來說，因為我國是世界上第一大鴨子生產國。

Kono等通過電子顯微鏡觀察到在感染TMUV的轉化雞B淋巴細胞系BK3（LSCC-BK3）中的病毒顆粒。雖然病毒分離和電子顯微鏡仍然是最佳診斷方法，但它們不適合用于診斷目的。電子顯微鏡的觀察非常耗時，需要配備一臺昂貴的設備和訓練有素的高技能人員及專用實驗室，這使得無法在實驗室之外進行檢測。此外，必須使用新鮮標本來獲得活病毒。

目前，常見的TMUV診斷方法包括基于NS1蛋白檢測的酶聯(lián)免疫吸附試驗血清學檢測和中和試驗。E蛋白的空間結構在DENV、WNV和JEV中得到很好的描述，顯示了黃病毒之間的高度相似性，由于這種糖蛋白暴露在病毒粒子表面，具有免疫原性。事實上，E蛋白已被廣泛用于生產單克隆或多克隆抗體。最近有報道稱，一種新的中和抗體（1G2）與JEV、WNV和ZIKV交叉反應，靶向位于E蛋白結構域II中的一個最小表位，在小鼠中對TMUV有很大的保護作用，表明其在檢測中的潛在用途，以及在診斷和治療中的一個有價值的候選者。逆轉錄酶結合聚合酶鏈式反應（RTPCR）通常用于檢測病毒的存在，目前，開發(fā)了幾種針對幾種禽病毒的多重PCR方法。最后，開發(fā)了一種新的檢測方法，使用逆轉錄酶PCR結合質譜檢測來篩查特定鴨病毒的存在。利用這項技術可以同時以較低的檢測閾值識別養(yǎng)鴨業(yè)中的各種病毒感染。

為確保其傳播，TMUV必須先在蚊媒載體中復制。在胚胎雞蛋中分離病毒的同時，C6/36蚊媒細胞系被用于病毒分離。但由于缺乏脊椎動物宿主中病毒的信息，導致使用原代細胞和細胞系來研究病毒的生物學特性。不同類型的禽類細胞已被用于研究TMUV的生物學特性，包括BK3細胞、轉化的雞B淋巴細胞細胞系、雞巨噬細胞衍生細胞系HD-11和雞胚成纖維細胞分離的DF1細胞系。除了用于特定用途外，雞胚成纖維細胞、鴨蛋和雞蛋通常用于病毒分離和維持。

TMUV還能在廣泛的非禽類細胞中復制，用于研究TMUV對哺乳動物宿主的影響。人類細胞系被用來評估病毒的趨向性，并確定TMUV感染的分子機制。HEK293T細胞系和小鼠原代細胞系（MEF）用于研究先天性免疫反應及TMUV的免疫逃避反應。最近使用各種人類細胞系對TMUV細胞取向性進行研究，肝、腎和神經細胞系在不同程度上存在易感性，而肺、肌肉、B細胞、T細胞和單核細胞對感染有很大抵抗力。所有研究表明，TMUV能在廣泛的脊椎動物細胞中復制，哺乳動物和鳥類的靶器官相似。但關于人類細胞發(fā)病機制的研究還不多，還需要進一步探索。此外，雖然TMUV通過蚊媒叮咬傳播，但還需要更多蚊媒生物學信息，并對C6/36細胞進行體外研究。

六、治療

與其他一些黃病毒感染一樣，TMUV沒有特定的治療方法。目前正在評估不同分子的抗病毒效果。如四環(huán)素類在體外對嗜神經病毒感染的神經細胞死亡有一定效果。在感染TMUV的鴨神經細胞中也發(fā)現(xiàn)了這種神經保護作用。EGCG是一種多酚類活性分子，已經顯示出對不同病毒的廣譜活性，并且似乎是一種很有希望治療TMUV感染的藥物。在BHK-21細胞中使用EGCG，結果顯示TMUV復制顯著減少，可能是由于I型干擾素產量增加。經EGCG處理的TMUV感染雛鴨的存活率增加證實了這種效果。新的治療策略正在研究并用于預防或治療TMUV。衣殼靶向病毒滅活（CTVI）方法是一種針對衣殼蛋白的抗病毒策略，最初開發(fā)用于靶向逆轉錄病毒，并在DENV和JEV的治療中取得了成功，最近也被研究用于TMUV的治療。

七、結語

與其蟲媒病毒一樣，TMUV利用近年來有利的條件，在亞洲各地傳播。2010年，中國首次暴發(fā)這種病毒，導致人們重新考慮這種病毒的危險性。其傳播在很大程度上是由養(yǎng)殖場密集飼養(yǎng)家禽造成的。在這種情況下，TMUV甚至在沒有蚊子媒介干預的情況下在動物之間傳播。最后，鳥類的影響尚未得到明確證明，但TMUV在亞洲傳播中發(fā)揮重要作用。因此，密集的養(yǎng)殖業(yè)、日益增長的貿易和環(huán)境變化促進了TMUV的廣泛傳播。這種情況更令人擔憂，因為這種病毒有傳播到人類的風險。因此，可能會導致一種新的人畜共患病。由于缺乏廣泛的監(jiān)測，迄今為止，該病毒只在3個亞洲國家被檢測到，并且只在中國和泰國進行積極研究。但這些國家和病毒的系統(tǒng)發(fā)育模式表明，該病毒在亞洲和太平洋地區(qū)廣泛存在。近年來，關于宿主-病原體相互作用的研究主要集中在禽類模型上，但也應更好地了解哺乳動物，尤其是該病毒的生物學特性及對人的影響。