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        非小細(xì)胞肺癌患者組織中l(wèi)ncRNA MAGI2-AS3 的表達(dá)及與病理參數(shù)和預(yù)后的關(guān)系

        2022-08-24 07:45:20楊廣惠潘慧敏查麗芬
        中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào) 2022年20期
        關(guān)鍵詞:海綿引物病理

        楊廣惠 潘慧敏 查麗芬 顧 俊

        1.南通大學(xué)醫(yī)學(xué)院,江蘇南通 226001;2.南通大學(xué)附屬丹陽市人民醫(yī)院呼吸內(nèi)科,江蘇丹陽 212300

        肺癌是全球發(fā)病排名第二、死亡排名第一的惡性腫瘤,2020 年新發(fā)病例220.7 萬例,死亡179.6 萬例,我國新發(fā)和死亡病例分別為81.6 萬例、71.5 萬例[1]。非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)是肺癌最常見的類型,晚期患者5 年生存率不足20%[2-3]。長鏈非編碼RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是一類不編碼蛋白質(zhì)的RNA,可作為癌基因或抑癌基因參與多種腫瘤的發(fā)生及發(fā)展[4]。研究報(bào)道,lncRNA膜相關(guān)鳥苷酸激酶包含WW 和PDZ 結(jié)構(gòu)域2-反義RNA 3(membrane associated guanylate kinase,WW,and PDZ domain containing two-antisense RNA three,MAGI2-AS3)在乳腺癌、膀胱癌中低表達(dá),與腫瘤細(xì)胞的惡性進(jìn)展密切相關(guān)[5-6]。已有研究報(bào)道,lncRNA MAGI2-AS3在NSCLC 中表達(dá)下調(diào)[7-8]。基于此,本研究分析lncRNA MAGI2-AS3 與NSCLC 患者病理參數(shù)及預(yù)后的關(guān)系。

        1 資料與方法

        1.1 一般資料

        選取2016 年8 月至2018 年8 月于南通大學(xué)附屬丹陽市人民醫(yī)院(以下簡稱“我院”)收治的103 例NSCLC 患者,年齡42~82 歲,平均(58.74±10.26)歲。納入標(biāo)準(zhǔn):①經(jīng)病理確診為NSCLC;②初診且未接受放化療。排除標(biāo)準(zhǔn):①造血免疫系統(tǒng)損害;②嚴(yán)重心肝腎等臟器疾??;③病理資料和隨訪資料有缺失;④年齡<18 歲;⑤合并其他惡性腫瘤。本研究經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)(18-11024)。

        1.2 研究方法

        術(shù)中切除的部分癌組織和距離癌組織>5 cm 的癌旁組織,立即經(jīng)液氮冷凍保存,取出保存的組織標(biāo)本50 mg,研碎,TRIzol 試劑盒(上海生工生物工程股份有限公司,批號:20160025)提取組織中總RNA,Narodrop 驗(yàn)證DNA 濃度及純度,使光密度(optical density,OD)260/OD280為1.8~2.0;TaKaRa 逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(北京寶日醫(yī)生物技術(shù)有限公司,批號:20169769S)轉(zhuǎn)錄合成cDNA,進(jìn)行qRT-PCR 擴(kuò)增。lncRNA MAGI2-AS3 正向引物:5’-CACCTTGCTTGACAACTTGA-3’;反向引物:5’-CATTACAGCTCGGCTACTGC-3’,長度121 bp;內(nèi)參GAPDH 正向引物:5’-AATGGGCAGCCGTTAGGAAA-3’;反向引物:5’-GCGCCCAATACGACCAAATC-3’,長度168 bp。反應(yīng)體系共20 μl:2 μl cDNA,0.6 μl 正向引物,0.6 μl 反向引物,10 μl SYBR?Premix Ex TaqTMⅡMix,6.8 μl 雙蒸水。反應(yīng)條件:1 次95℃10 min,40 次95℃10 s,60℃30 s,72℃30 s。采用2-ΔΔCt法計(jì)算lncRNA MAGI2-AS3 相對表達(dá)量,實(shí)驗(yàn)重復(fù)3 次,取平均值。

        1.3 隨訪

        根據(jù)lncRNA MAGI2-AS3 表達(dá)均值將患者分為高lncRNA MAGI2-AS3 表達(dá)組(≥lncRNA MAGI2-AS3表達(dá)均值)和低lncRNA MAGI2-AS3 表達(dá)組(<lncRNA MAGI2-AS3 表達(dá)均值)。兩組出院后通過門診或電話方式隨訪3 年,隨訪至2021 年8 月,統(tǒng)計(jì)兩組生存情況。

        1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

        采用SPSS 26.0 對所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示,采用t 檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料以例數(shù)和百分比表示,采用χ2檢驗(yàn);Kaplan-Meier法繪制NSCLC 患者生存曲線,組間生存率采用logrank 檢驗(yàn);多因素Cox 回歸分析NSCLC 患者預(yù)后影響因素。以P <0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        2.1 NSCLC 組織與癌旁組織中l(wèi)ncRNA MAGI2-AS3表達(dá)比較

        NSCLC 組織中l(wèi)ncRNA MAGI2-AS3 表達(dá)(0.434±0.079)低于癌旁組織(0.969±0.245),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=21.075,P <0.001)。

        2.2 lncRNA MAGI2-AS3 表達(dá)與NSCLC 患者病理參數(shù)的關(guān)系

        不同TNM 分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者lncRNA MAGI2-AS3 表達(dá)比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P <0.05)。見表1。

        表1 lncRNA MAGI2-AS3 表達(dá)與NSCLC 患者病理參數(shù)的關(guān)系

        2.3 lncRNA MAGI2-AS3 表達(dá)與NSCLC 患者生存時(shí)間的關(guān)系

        隨訪3~36 個(gè)月,中位生存時(shí)間為28.095 個(gè)月。高lncRNA MAGI2-AS3 表達(dá)組(≥0.434,51 例)中位生存時(shí)間為30.991 個(gè)月,低lncRNA MAGI2-AS3 表達(dá)組中位生存時(shí)間為25.309 個(gè)月。兩組生存曲線比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(log-rank χ2=5.127,P=0.024)。見圖1。

        圖1 兩組生存曲線

        2.4 NSCLC 患者預(yù)后影響因素的多因素Cox 回歸分析

        以隨訪時(shí)間為時(shí)間變量,以年齡(≥60 歲=1,<60 歲=0)、分化程度(低未分化=1,中高分化=0)、TNM 分期(Ⅲ期=1,Ⅰ~Ⅱ期=0)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(是=1,否=)、lncRNA MAGI2-AS3(≥0.434=1,<0.434=0)、預(yù)后(死亡=1,存活=0)為因變量。多因素Cox 回歸分析顯示,腫瘤分化程度、TNM 分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、lncRNA MAGI2-AS3 表達(dá)水平是NSCLC 患者預(yù)后不良的影響因素(P <0.05)。見表2。

        表2 NSCLC 患者預(yù)后影響因素的多因素Cox 回歸分析

        3 討論

        NSCLC 是一種侵襲性、生長迅速的惡性腫瘤,早期表現(xiàn)為咳嗽、呼吸困難、疼痛、體重減輕,但大多患者早期無明顯癥狀常于晚期確診,總體生存率較低。近年來隨著腫瘤分子生物學(xué)的進(jìn)展,出現(xiàn)了靶向和免疫療法,極大地延長了NSCLC 患者生存期,但僅部分患者臨床獲益,同時(shí)隨著治療時(shí)間的延長,獲得性耐藥越來越多[9-11]。近期一項(xiàng)關(guān)于晚期(Ⅲb~Ⅳ期)NSCLC患者真實(shí)世界研究報(bào)道,接受免疫患者1、2、3 年生存率分別為61.1%、16.5%、12.7%,相比未接受免疫治療患者,接受免疫患者1、2、3 年死亡風(fēng)險(xiǎn)比分別為2.15、1.23、1.00[12]。提示隨著治療時(shí)間延長,免疫療效降低,亟須尋找更多治療靶點(diǎn)。

        表觀遺傳改變是惡性腫瘤最大特征之一,其異常改變與腫瘤發(fā)生及發(fā)展密切相關(guān)[13-14]。lncRNA 是一類長度超過200 個(gè)核苷酸的新興表觀遺傳調(diào)控分子,不僅能通過類似機(jī)制調(diào)控表觀遺傳通路本身的基因,還能通過競爭性結(jié)合特定蛋白或微RNA(micro RNA,miRNA),形成分子海綿效應(yīng),調(diào)控癌細(xì)胞生長、增殖、分化、凋亡等生物學(xué)過程[15-17]。如lncRNA 長基因間非蛋白編碼RNA 240 能通過海綿miR-7-5p 上調(diào)表皮生長因子受體表達(dá)促進(jìn)NSCLC 細(xì)胞侵襲和遷移[18]。lncRNA DNA 損傷激活的非編碼RNA 能通過海綿miR-363-3p 上調(diào)富集偽足的非典型激酶1 表達(dá)促進(jìn)NSCLC 細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化和侵襲[19]。lncRNA MAGI2-AS3 定位于人染色體7q21.11,近年多項(xiàng)研究均報(bào)道了其與腫瘤的關(guān)系,如Li 等[20]研究報(bào)道,lncRNA MAGI2-AS3 在胃癌中高表達(dá),能通過海綿miR-141 和miR-200a 上調(diào)溴結(jié)構(gòu)域蛋白4 促進(jìn)肝癌細(xì)胞增殖、侵襲和遷移。Liu 等[21]研究報(bào)道,lncRNA MAGI2-AS3 在肝癌中低表達(dá),能靶向miR-23a-3p 調(diào)控第10 號染色體缺失磷酸酶及張力蛋白同源基因抑制肝癌細(xì)胞增殖、侵襲和遷移。本研究結(jié)果顯示,NSCLC 組織中l(wèi)ncRNA MAGI2-AS3 表達(dá)明顯降低,與既往研究報(bào)道一致[7]。進(jìn)一步分析顯示,lncRNA MAGI2-AS3 表達(dá)與NSCLC 患者TNM 分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān),提示lncRNA MAGI2-AS3 在NSCLC 中發(fā)揮抑癌基因作用,lncRNA MAGI2-AS3 低表達(dá)導(dǎo)致NSCLC 惡性進(jìn)展,其機(jī)制可能與lncRNA MAGI2-AS3 能調(diào)節(jié)張力蛋白同源基因表達(dá)有關(guān)。張力蛋白同源基因是一種具備雙重特性磷酸酶活性的腫瘤抑制基因,其脂質(zhì)磷酸酶能通過催化磷酯酰肌醇3,4,5-三磷酸去磷酸化為磷酯酰肌醇4,5-二磷酸,阻斷磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑,阻止細(xì)胞快速生長和分裂,抑制NSCLC細(xì)胞增殖、侵襲行為和促進(jìn)凋亡[22-23]。Hao 等[24]研究報(bào)道,lncRNA MAGI2-AS3 能通過海綿miR-23a-3p 上調(diào)張力蛋白同源基因表達(dá),抑制腫瘤細(xì)胞活力和侵襲。本研究還發(fā)現(xiàn),與lncRNA MAGI2-AS3 低表達(dá)組比較,lncRNA MAGI2-AS3 高表達(dá)組中位生存時(shí)間延長,lncRNA MAGI2-AS3 高表達(dá)是NSCLC 患者預(yù)后不良的影響因素,顯示lncRNA MAGI2-AS3 可作為NSCLC患者預(yù)后評估指標(biāo),可能成為一種新型的靶點(diǎn)。

        綜上所述,NSCLC 組織中l(wèi)ncRNA MAGI2-AS3 低表達(dá),與TNM 分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、預(yù)后不良有關(guān),可作為NSCLC 患者預(yù)后評估指標(biāo)。但這還需前瞻性多中心研究證實(shí),并進(jìn)一步從分子方向研究lncRNA MAGI2-AS3 對NSCLC 患者預(yù)后的影響,了解其具體調(diào)控關(guān)系。

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