李攀，徐焰#，張廣煥，楊紫嫣，呂菁，魏東，郝茜，周慧蓉，嚴歡慶

西安大興醫(yī)院1檢驗科，2輸血科，西安 710000

食管癌是指發(fā)生于食管黏膜上皮組織的惡性腫瘤，約占所有惡性腫瘤的2%，隨著年輕群體生活習慣的改變，近年來食管癌的發(fā)病率呈增長趨勢[1-2]。早期食管癌的臨床表現(xiàn)較為隱匿，病情呈跳躍性進展，臨床檢查存在一定難度，大多數(shù)患者確診時已發(fā)展至中晚期，導(dǎo)致預(yù)后較差，嚴重威脅患者的生命安全[3]。因此，檢測食管癌相關(guān)指標對評估食管癌病情進展和預(yù)后具有重要意義。研究發(fā)現(xiàn)，惡性腫瘤患者往往存在凝血功能異常，而凝血功能與腫瘤的發(fā)生、進展密切相關(guān)[4]。孕激素和脂聯(lián)素分子受體3（progestin and adipoQ receptor family member 3，PAQR3）是一種跨膜蛋白，參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程[5]。本研究探討凝血功能指標、PAQR3 與食管癌疾病進展和預(yù)后的關(guān)系，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017 年1 月至2019 年8 月西安大興醫(yī)院收治的食管癌患者。納入標準：①經(jīng)病理檢查確診為食管癌；②入院前未接受放療、化療等治療；③臨床資料及實驗室檢查資料完整。排除標準：①入院前1 個月內(nèi)服用過抗凝藥或止血藥、存在輸血史；②合并血液系統(tǒng)疾?。虎酆喜⑵渌麗盒阅[瘤；④合并器官衰竭；⑤未能接受隨訪；⑥合并意識障礙或精神疾?。虎吆喜⑷砀腥拘约膊?；⑧妊娠期或哺乳期女性。依據(jù)納入和排除標準，本研究共納入82 例食管癌患者作為研究組。其中，男48 例，女34 例；年齡43～78 歲，平均（62.45±10.35）歲；病理類型：鱗狀細胞癌71 例，腺癌11 例；臨床分期：Ⅰ～Ⅱ期49 例，Ⅲ～Ⅳ期33 例。分別取術(shù)中切片腫瘤組織82 例和癌旁5 cm 處正常組織82例。另選取同期于西安大興醫(yī)院進行體檢的74 例健康體檢者作為健康組。其中，男47 例，女27 例；年齡45～77 歲，平均（64.38±11.29）歲。兩組研究對象的年齡、性別比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P﹥0.05），具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會審批通過，所有研究對象均知情同意并簽署知情同意書。

1.2 凝血功能檢測

所有受檢者均在醫(yī)師協(xié)助下完善相關(guān)檢查，研究組于入院后第2 天、健康組于體檢當日抽取5 ml空腹靜脈血，應(yīng)用枸櫞酸鈉進行抗凝處理，采用凝固法檢測凝血酶時間（thrombin time，TT）、活化部分凝血活酶時間（activated partial thromboplastin time，APTT）、凝血酶原時間（prothrombin time，PT）、D-二聚體（D-Dimer，D-D），采用Clauss 法檢測纖維蛋白原（fibrinogen，F(xiàn)IB）水平，應(yīng)用沃芬ACLTOP-750 型全自動凝血分析儀及配套試劑盒進行檢測，操作均嚴格按照說明書執(zhí)行。TT 正常值：13～16 s；APTT正常值：21～37 s；PT正常值：11～13 s；D-D 正常值：﹤0.5 mg/L；FIB 正常值：2～4 g/L。

1.3 PAQR3 檢測

收集食管癌患者的食管癌組織及癌旁5 cm 處正常組織，將組織切片后脫蠟、水化，采用鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結(jié)法（streptavidin perosidase，SP）檢測PAQR3 表達情況，以磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline，PBS）代替一抗作為對照。檢測過程嚴格按照說明書進行。根據(jù)陽性細胞百分比及染色程度判定PAQR3 表達情況[6]。陽性細胞百分比評分：無陽性細胞為0 分，陽性細胞1%～25%為1 分，陽性細胞26%～50%為2 分，陽性細胞﹥50%為3 分。染色程度評分：無色為0 分，淡黃色為1 分，棕黃色為2 分，棕褐色為3 分。陽性細胞百分比評分與染色程度評分相乘，≤3分為低表達，﹥4 分為高表達。

1.4 觀察指標

比較食管癌組織和癌旁正常組織中PAQR3 的表達情況，比較研究組和健康組的凝血功能指標，比較不同臨床分期食管癌患者凝血功能指標及食管癌組織中PAQR3 的表達情況。對食管癌患者進行2 年隨訪，隨訪方式包括電話隨訪、回院復(fù)查，統(tǒng)計食管癌患者的生存情況，分析食管癌患者預(yù)后的影響因素。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 22.0 軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，計量資料以均數(shù)±標準差（±s）表示，組間比較采用t檢驗；計數(shù)資料以例數(shù)和率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗；采用多元Logistic 回歸模型分析食管癌患者預(yù)后的影響因素；以P﹤0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 食管癌組織和癌旁正常組織中PAQR3 表達情況的比較

食管癌組織中PAQR3 高表達率為69.51%（57/82），低于癌旁正常組織的91.46%（75/82），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=12.580，P﹤0.05）。

2.2 研究組和健康組凝血功能指標的比較

研究組和健康組的TT、APTT、PT 比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P﹥0.05）；研究組患者的FIB、D-D水平均明顯高于健康組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P﹤0.01）。（表1）

表1 研究組和健康組凝血功能指標的比較

2.3 不同臨床分期食管癌患者凝血功能指標及食管癌組織中PAQR3 表達情況的比較

Ⅰ～Ⅱ期和Ⅲ～Ⅳ期食管癌患者的TT、APTT、PT 比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P﹥0.05）；Ⅰ～Ⅱ期食管癌患者的FIB、D-D 水平均明顯低于Ⅲ～Ⅳ期患者，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P﹤0.01）（表2）。Ⅰ～Ⅱ期食管癌患者食管癌組織中PAQR3 高表達率為91.84%（45/49），明顯高于Ⅲ～Ⅳ期患者的36.36%（12/33），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=28.634，P﹤0.01）。

表2 不同臨床分期食管癌患者凝血功能指標的比較（±s）

表2 不同臨床分期食管癌患者凝血功能指標的比較（±s）

P值0.055 0.064 0.086<0.01<0.01

2.4 食管癌患者生存情況的影響因素分析

隨訪2 年，82 例食管癌患者生存63 例，死亡19例。Logistic 回歸分析結(jié)果顯示，F(xiàn)IB 異常、D-D 異常、PAQR3 低表達均是食管癌患者生存情況的獨立危險因素（P﹤0.01）。（表3）

表3 食管癌患者生存情況的影響因素分析

3 討論

近年來，中國食管癌的發(fā)病率顯著增加，據(jù)統(tǒng)計，中國食管癌發(fā)病例數(shù)占全世界食管癌發(fā)病例數(shù)的50%以上，病死例數(shù)約占全世界食管癌病死例數(shù)的50%，其病死率居全部惡性腫瘤的第4 位[7-8]。食管癌患者早期可無明顯臨床癥狀，少數(shù)患者會出現(xiàn)胸骨后疼痛，隨著病情進展，患者會出現(xiàn)進行性吞咽困難，直至最后出現(xiàn)惡病質(zhì)[9]。如何延緩食管癌患者的病情進展，從而改善預(yù)后是目前臨床研究的熱點。

隨著分子生物學(xué)的不斷發(fā)展，臨床開始關(guān)注惡性腫瘤與凝血功能之間的關(guān)系[10]。相關(guān)研究顯示，惡性腫瘤與血栓形成存在一定的聯(lián)系，惡性腫瘤患者常表現(xiàn)為高凝狀態(tài)，具有并發(fā)血栓相關(guān)性疾病的潛在風險[11]。據(jù)不完全統(tǒng)計，約95%的惡性腫瘤患者存在一項甚至多項凝血功能指標異常[12]。此外，凝血功能異常亦會對惡性腫瘤患者疾病進展和預(yù)后造成一定程度的影響。本研究結(jié)果顯示，研究組和健康組的TT、APTT、PT 比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P﹥0.05）；研究組患者的FIB 及D-D水平均明顯高于健康組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P﹤0.01）。表明食管癌患者存在凝血功能異常，致使血液處于高凝狀態(tài)。Ⅰ～Ⅱ期食管癌患者的FIB、D-D 水平均明顯低于Ⅲ～Ⅳ期患者，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P﹤0.01）。這可能是由于腫瘤細胞進入血液循環(huán)后，會對內(nèi)皮細胞造成一定程度的刺激，使內(nèi)皮細胞釋放大量的組織因子，促進凝血系統(tǒng)激活，致使抗凝活性下降，從而引起凝血因子活性增加，造成繼發(fā)性纖溶亢進，導(dǎo)致D-D、FIB 表達水平上調(diào)，而隨著疾病進展，患者體內(nèi)的FIB及D-D含量增加，機體的高凝狀態(tài)顯著增強[13]。因此，通過檢測血液中FIB 及D-D 含量有助于預(yù)測食管癌患者病情發(fā)展。

PAQR3 是PAQR 家族中的一員，是近些年來新發(fā)現(xiàn)的一類抑癌基因，相關(guān)研究指出，PAQR3 可通過調(diào)控RAS/RAF/絲裂原活化蛋白激酶（mitogenactivated protein kinase，MEK）/胞外信號調(diào)節(jié)激酶（extracellular signal- regulated kinase，ERK）信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，影響多種細胞功能，且PAQR3 與惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)[14]。本研究結(jié)果顯示，食管癌組織中PAQR3 高表達率低于癌旁正常組織（P﹤0.05），Ⅰ～Ⅱ期食管癌患者食管癌組織中PAQR3高表達率明顯高于Ⅲ～Ⅳ期患者（P﹤0.01），提示PAQR3 低表達可能在食管癌的發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮一定的作用。但目前關(guān)于PAQR3 介導(dǎo)食管癌發(fā)生、發(fā)展的具體分子機制還需進一步深入研究。通過Logistic 回歸分析發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)IB 異常、D-D 異常、PAQR3 低表達均是食管癌患者生存情況的獨立危險因素（P﹤0.01），提示FIB、D-D 及PAQR3 是評估食管癌患者預(yù)后的重要指標，臨床中可將上述指標用于輔助評估食管癌患者的預(yù)后。

綜上所述，食管癌患者存在凝血功能異常及PAQR3 表達下調(diào)，加強對食管癌患者凝血功能及PAQR3 的干預(yù)，及時根據(jù)上述指標的變化情況調(diào)整診療計劃，有助于延緩病情進展及改善預(yù)后。