李攀，徐焰#，張廣煥，楊紫嫣，呂菁，魏東，郝茜，周慧蓉，嚴歡慶

西安大興醫(yī)院1檢驗科，2輸血科，西安 710000

食管癌是指發(fā)生于食管黏膜上皮組織的惡性腫瘤，約占所有惡性腫瘤的2%，隨著年輕群體生活習慣的改變，近年來食管癌的發(fā)病率呈增長趨勢[1-2]。早期食管癌的臨床表現(xiàn)較為隱匿，病情呈跳躍性進展，臨床檢查存在一定難度，大多數(shù)患者確診時已發(fā)展至中晚期，導致預后較差，嚴重威脅患者的生命安全[3]。因此，檢測食管癌相關指標對評估食管癌病情進展和預后具有重要意義。研究發(fā)現(xiàn)，惡性腫瘤患者往往存在凝血功能異常，而凝血功能與腫瘤的發(fā)生、進展密切相關[4]。孕激素和脂聯(lián)素分子受體3（progestin and adipoQ receptor family member 3，PAQR3）是一種跨膜蛋白，參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程[5]。本研究探討凝血功能指標、PAQR3 與食管癌疾病進展和預后的關系，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017 年1 月至2019 年8 月西安大興醫(yī)院收治的食管癌患者。納入標準：①經(jīng)病理檢查確診為食管癌；②入院前未接受放療、化療等治療；③臨床資料及實驗室檢查資料完整。排除標準：①入院前1 個月內(nèi)服用過抗凝藥或止血藥、存在輸血史；②合并血液系統(tǒng)疾??；③合并其他惡性腫瘤；④合并器官衰竭；⑤未能接受隨訪；⑥合并意識障礙或精神疾??；⑦合并全身感染性疾?。虎嗳焉锲诨虿溉槠谂?。依據(jù)納入和排除標準，本研究共納入82 例食管癌患者作為研究組。其中，男48 例，女34 例；年齡43～78 歲，平均（62.45±10.35）歲；病理類型：鱗狀細胞癌71 例，腺癌11 例；臨床分期：Ⅰ～Ⅱ期49 例，Ⅲ～Ⅳ期33 例。分別取術中切片腫瘤組織82 例和癌旁5 cm 處正常組織82例。另選取同期于西安大興醫(yī)院進行體檢的74 例健康體檢者作為健康組。其中，男47 例，女27 例；年齡45～77 歲，平均（64.38±11.29）歲。兩組研究對象的年齡、性別比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P﹥0.05），具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會審批通過，所有研究對象均知情同意并簽署知情同意書。

1.2 凝血功能檢測

所有受檢者均在醫(yī)師協(xié)助下完善相關檢查，研究組于入院后第2 天、健康組于體檢當日抽取5 ml空腹靜脈血，應用枸櫞酸鈉進行抗凝處理，采用凝固法檢測凝血酶時間（thrombin time，TT）、活化部分凝血活酶時間（activated partial thromboplastin time，APTT）、凝血酶原時間（prothrombin time，PT）、D-二聚體（D-Dimer，D-D），采用Clauss 法檢測纖維蛋白原（fibrinogen，F(xiàn)IB）水平，應用沃芬ACLTOP-750 型全自動凝血分析儀及配套試劑盒進行檢測，操作均嚴格按照說明書執(zhí)行。TT 正常值：13～16 s；APTT正常值：21～37 s；PT正常值：11～13 s；D-D 正常值：﹤0.5 mg/L；FIB 正常值：2～4 g/L。

1.3 PAQR3 檢測

收集食管癌患者的食管癌組織及癌旁5 cm 處正常組織，將組織切片后脫蠟、水化，采用鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結法（streptavidin perosidase，SP）檢測PAQR3 表達情況，以磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline，PBS）代替一抗作為對照。檢測過程嚴格按照說明書進行。根據(jù)陽性細胞百分比及染色程度判定PAQR3 表達情況[6]。陽性細胞百分比評分：無陽性細胞為0 分，陽性細胞1%～25%為1 分，陽性細胞26%～50%為2 分，陽性細胞﹥50%為3 分。染色程度評分：無色為0 分，淡黃色為1 分，棕黃色為2 分，棕褐色為3 分。陽性細胞百分比評分與染色程度評分相乘，≤3分為低表達，﹥4 分為高表達。

1.4 觀察指標

比較食管癌組織和癌旁正常組織中PAQR3 的表達情況，比較研究組和健康組的凝血功能指標，比較不同臨床分期食管癌患者凝血功能指標及食管癌組織中PAQR3 的表達情況。對食管癌患者進行2 年隨訪，隨訪方式包括電話隨訪、回院復查，統(tǒng)計食管癌患者的生存情況，分析食管癌患者預后的影響因素。

1.5 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 22.0 軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，計量資料以均數(shù)±標準差（±s）表示，組間比較采用t檢驗；計數(shù)資料以例數(shù)和率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗；采用多元Logistic 回歸模型分析食管癌患者預后的影響因素；以P﹤0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 食管癌組織和癌旁正常組織中PAQR3 表達情況的比較

食管癌組織中PAQR3 高表達率為69.51%（57/82），低于癌旁正常組織的91.46%（75/82），差異有統(tǒng)計學意義（χ2=12.580，P﹤0.05）。

2.2 研究組和健康組凝血功能指標的比較

研究組和健康組的TT、APTT、PT 比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P﹥0.05）；研究組患者的FIB、D-D水平均明顯高于健康組，差異均有統(tǒng)計學意義（P﹤0.01）。（表1）

表1 研究組和健康組凝血功能指標的比較

2.3 不同臨床分期食管癌患者凝血功能指標及食管癌組織中PAQR3 表達情況的比較

Ⅰ～Ⅱ期和Ⅲ～Ⅳ期食管癌患者的TT、APTT、PT 比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P﹥0.05）；Ⅰ～Ⅱ期食管癌患者的FIB、D-D 水平均明顯低于Ⅲ～Ⅳ期患者，差異均有統(tǒng)計學意義（P﹤0.01）（表2）。Ⅰ～Ⅱ期食管癌患者食管癌組織中PAQR3 高表達率為91.84%（45/49），明顯高于Ⅲ～Ⅳ期患者的36.36%（12/33），差異有統(tǒng)計學意義（χ2=28.634，P﹤0.01）。

表2 不同臨床分期食管癌患者凝血功能指標的比較（±s）

表2 不同臨床分期食管癌患者凝血功能指標的比較（±s）

P值0.055 0.064 0.086<0.01<0.01

2.4 食管癌患者生存情況的影響因素分析

隨訪2 年，82 例食管癌患者生存63 例，死亡19例。Logistic 回歸分析結果顯示，F(xiàn)IB 異常、D-D 異常、PAQR3 低表達均是食管癌患者生存情況的獨立危險因素（P﹤0.01）。（表3）

表3 食管癌患者生存情況的影響因素分析

3 討論

近年來，中國食管癌的發(fā)病率顯著增加，據(jù)統(tǒng)計，中國食管癌發(fā)病例數(shù)占全世界食管癌發(fā)病例數(shù)的50%以上，病死例數(shù)約占全世界食管癌病死例數(shù)的50%，其病死率居全部惡性腫瘤的第4 位[7-8]。食管癌患者早期可無明顯臨床癥狀，少數(shù)患者會出現(xiàn)胸骨后疼痛，隨著病情進展，患者會出現(xiàn)進行性吞咽困難，直至最后出現(xiàn)惡病質(zhì)[9]。如何延緩食管癌患者的病情進展，從而改善預后是目前臨床研究的熱點。

隨著分子生物學的不斷發(fā)展，臨床開始關注惡性腫瘤與凝血功能之間的關系[10]。相關研究顯示，惡性腫瘤與血栓形成存在一定的聯(lián)系，惡性腫瘤患者常表現(xiàn)為高凝狀態(tài)，具有并發(fā)血栓相關性疾病的潛在風險[11]。據(jù)不完全統(tǒng)計，約95%的惡性腫瘤患者存在一項甚至多項凝血功能指標異常[12]。此外，凝血功能異常亦會對惡性腫瘤患者疾病進展和預后造成一定程度的影響。本研究結果顯示，研究組和健康組的TT、APTT、PT 比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P﹥0.05）；研究組患者的FIB 及D-D水平均明顯高于健康組，差異均有統(tǒng)計學意義（P﹤0.01）。表明食管癌患者存在凝血功能異常，致使血液處于高凝狀態(tài)。Ⅰ～Ⅱ期食管癌患者的FIB、D-D 水平均明顯低于Ⅲ～Ⅳ期患者，差異均有統(tǒng)計學意義（P﹤0.01）。這可能是由于腫瘤細胞進入血液循環(huán)后，會對內(nèi)皮細胞造成一定程度的刺激，使內(nèi)皮細胞釋放大量的組織因子，促進凝血系統(tǒng)激活，致使抗凝活性下降，從而引起凝血因子活性增加，造成繼發(fā)性纖溶亢進，導致D-D、FIB 表達水平上調(diào)，而隨著疾病進展，患者體內(nèi)的FIB及D-D含量增加，機體的高凝狀態(tài)顯著增強[13]。因此，通過檢測血液中FIB 及D-D 含量有助于預測食管癌患者病情發(fā)展。

PAQR3 是PAQR 家族中的一員，是近些年來新發(fā)現(xiàn)的一類抑癌基因，相關研究指出，PAQR3 可通過調(diào)控RAS/RAF/絲裂原活化蛋白激酶（mitogenactivated protein kinase，MEK）/胞外信號調(diào)節(jié)激酶（extracellular signal- regulated kinase，ERK）信號轉導通路，影響多種細胞功能，且PAQR3 與惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有關[14]。本研究結果顯示，食管癌組織中PAQR3 高表達率低于癌旁正常組織（P﹤0.05），Ⅰ～Ⅱ期食管癌患者食管癌組織中PAQR3高表達率明顯高于Ⅲ～Ⅳ期患者（P﹤0.01），提示PAQR3 低表達可能在食管癌的發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮一定的作用。但目前關于PAQR3 介導食管癌發(fā)生、發(fā)展的具體分子機制還需進一步深入研究。通過Logistic 回歸分析發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)IB 異常、D-D 異常、PAQR3 低表達均是食管癌患者生存情況的獨立危險因素（P﹤0.01），提示FIB、D-D 及PAQR3 是評估食管癌患者預后的重要指標，臨床中可將上述指標用于輔助評估食管癌患者的預后。

綜上所述，食管癌患者存在凝血功能異常及PAQR3 表達下調(diào)，加強對食管癌患者凝血功能及PAQR3 的干預，及時根據(jù)上述指標的變化情況調(diào)整診療計劃，有助于延緩病情進展及改善預后。