吳曉康，張 妮，尹佳鋒，劉海龍，靳 莉，吳曉玲，李妙羨，耿 燕

（西安交通大學(xué)第二附屬醫(yī)院a.檢驗(yàn)科；b.婦產(chǎn)科，西安710004）

人乳頭瘤病毒（human papillomavirus，HPV）屬乳頭瘤病毒科，是一種無(wú)被膜的雙鏈環(huán)狀 DNA病毒，感染人體可導(dǎo)致皮膚黏膜的鱗狀上皮細(xì)胞周期調(diào)節(jié)的紊亂及增殖的失控[1-2]。隨著檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展，新的HPV 亞型不斷被發(fā)現(xiàn)，在不同國(guó)家區(qū)域、不同種族人群，其HPV 感染的型別有所差異，所致疾病也不盡相同。依據(jù)其致病力強(qiáng)弱分為高危型和低危型，高危型常與女性宮頸癌、陰道癌、宮頸上皮內(nèi)瘤變的發(fā)生密切相關(guān)，而低危型常引起生殖器疣等病變[3-5]。HPV 感染及所引發(fā)的疾病已然成為共同關(guān)注的公共健康問(wèn)題。

宮頸癌已成為危害女性健康常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，近年來(lái)其發(fā)病率呈現(xiàn)上升和年輕化趨勢(shì)[3]，而宮頸癌的發(fā)生與高危型的HPV感染密切相關(guān)。因此，及時(shí)了解本地區(qū)HPV 感染情況對(duì)其防治工作具有重要意義。本文分析2019 ～2021年來(lái)院就診的體檢人群HPV 檢測(cè)及基因分型結(jié)果，以了解本地區(qū)女性HPV 感染狀況和流行特征。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象 選取2019年4月～2021年12月在西安交通大學(xué)第二附屬醫(yī)院體檢的10 772 例女性HPV 受檢者為研究對(duì)象，年齡20 ～85 歲，標(biāo)本類型為宮頸脫落細(xì)胞，同一受檢者僅收集第一次檢測(cè)結(jié)果。納入標(biāo)準(zhǔn)：①檢查前3 天內(nèi)無(wú)陰道放藥、沖洗等治療，就診前24h 內(nèi)無(wú)同房；②宮頸完整，既往有性生活史者。排除標(biāo)準(zhǔn)：①婦科惡性腫瘤、有宮頸手術(shù)史者；②妊娠期、月經(jīng)期女性。所有受檢者均知情，自愿參與檢查。

1.2 試劑與儀器 TC-412 擴(kuò)增儀(英國(guó)Techne 公司)，LBP-3124 自動(dòng)核酸分子雜交儀(廣州安必平醫(yī)藥科技股份有限公司)，HPV 核酸檢測(cè)及分型試劑盒（廣州和實(shí)生物技術(shù)有限公司），HPV 陰、陽(yáng)性質(zhì)控品均為試劑盒包含。

1.3 方法

1.3.1 宮頸脫落細(xì)胞采集與保存：采用專用宮頸刷緊貼宮頸口，單向旋轉(zhuǎn)4 ～5 周后取出，放入裝有生理鹽水（2ml）的無(wú)菌樣本管中送檢。若樣本黏液過(guò)多或含血量過(guò)多應(yīng)該重新取樣。對(duì)未能及時(shí)檢測(cè)的標(biāo)本，放置4℃冰箱保存并次日檢測(cè)。

1.3.2 檢測(cè)：采用PCR-反向點(diǎn)雜交法檢測(cè)獲取的樣本，分析其28 種HPV 基因型。樣本核酸提取、PCR 擴(kuò)增、產(chǎn)物雜交及顯色等步驟，按照說(shuō)明書操作。

1.3.3 結(jié)果比較分析：對(duì)本研究結(jié)果的感染率、HPV 基因型別、高發(fā)年齡段等與省內(nèi)及國(guó)內(nèi)其他地區(qū)報(bào)道比較分析。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS22.0 統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)，當(dāng)P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HPV 感染率及各年齡段分布情況 見(jiàn)表1。在接受HPV 檢測(cè)的10 772 例女性人群中，共檢出HPV 陽(yáng)性者952 例，感染率為8.84%；將受檢人群分為＜25 歲、25 ～＜34 歲、34 ～＜44 歲、44 ～＜ 54 歲、54 ～＜64 歲、≥64 歲六個(gè)年齡組。其中＜25 歲女性HPV 感染率最高（14.29%），其次是54 ～＜64 歲和≥64 歲年齡組女性（11.71%和11.48%）；各年齡組HPV 感染均以HPV 高危型別為主。除＜25 歲年齡組外，其他五個(gè)年齡組在高危型別感染例次（雙重感染者記為感染2 例次，依次類推）上與中危型、低危型別感染例次上的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。

表1 各年齡組HPV 感染率及分布情況

2.2 HPV 感染基因型別情況 本研究中共檢測(cè)出27 種 HPV 基因型，952 例陽(yáng)性者共感染1 188 例次。按感染例次排列，位于前四位的基因型依次為HPV52，HPV53，HPV16 和HPV42，占比依次為14.98%（178 /1 188），10.19%（121 /1 188），8.59%（102/1 188）和7.32%（87/1 188）。

單一型別感染769 例，感染率為7.14%（769/10 772），占比80.78%（769/952）。單一型別感染以HPV 高危型別感染為主，占比55.01%（423/769），感染例數(shù)由高到低依次為HPV-52，HPV-16，HPV-56；中危型別占比15.73%（121/769），以HPV-53，HPV-66 型為主；低危型別占比29.26%（225/769），以HPV-42，HPV-61 型為主。

混合型感染183 例，感染率為1.70%（183/10 772），占比19.22%，包括了雙重、三重、四重、五重、七重感染病例，其中以雙重型別和三重型別感染為主，占比分別為79.23%（145/183）和15.85%（29/183）。常見(jiàn)的雙重感染組合類型為：HPV52+58 型（占比4.83%），HPV42+52 型（占比3.45%），HPV52+81 型（占比3.45%），HPV52+53 型（占比2.76%），HPV53+56 型（占比2.76%），混合感染各型別組合模式各異。

2.3 本研究結(jié)果與其他地區(qū)報(bào)道結(jié)果比較 見(jiàn)表2。將本研究結(jié)果與省內(nèi)及國(guó)內(nèi)一些地區(qū)報(bào)道的情況比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)國(guó)內(nèi)女性HPV感染均以單一感染、高?；蛐蜑橹鳎贖PV 感染率、常見(jiàn)基因型及高發(fā)年齡段上結(jié)果有所不同。

表2 本研究與其他研究結(jié)果比較

3 討論

宮頸細(xì)胞學(xué)檢查是宮頸上皮內(nèi)瘤變及宮頸癌篩查普遍應(yīng)用的方法，但存在其局限性。高危型HPV檢測(cè)用于宮頸癌篩查和宮頸細(xì)胞學(xué)檢查異常的患者，可有效的增加宮頸病變檢出率，提高細(xì)胞學(xué)檢查敏感度[13-14]。

本次研究納入10 722 例女性健康體檢人群，其結(jié)果HPV 感染率（8.84%）低于省內(nèi)、外地區(qū)報(bào)道的結(jié)果，分析其原因：①可能是研究對(duì)象有所不同。有研究表明幾乎全部的宮頸癌患者病理標(biāo)本中均發(fā)現(xiàn)有高危型HPV，而本研究納入的是健康體檢人群，其HPV 感染風(fēng)險(xiǎn)低于門診或住院的疑似患者；②近年來(lái)，HPV 多價(jià)疫苗在社會(huì)積極推廣，隨著女性人群接種率的提高，本地區(qū)HPV 感染有下降的趨勢(shì)[15]；③各地區(qū)經(jīng)濟(jì)發(fā)展水平不均衡、生活習(xí)慣差異等因素導(dǎo)致HPV 感染狀況呈現(xiàn)地區(qū)差異性。

在HPV 感染高發(fā)年齡段的分布上，本研究結(jié)果為＜25 歲和＞54 歲兩個(gè)年齡段，這個(gè)結(jié)果與龔婭等[10,12,16]研究結(jié)果普遍一致，這表明國(guó)內(nèi)HPV 感染高發(fā)在年齡段的“兩端”人群。究其原因，年輕女性高發(fā)可能與社會(huì)交往多、性知識(shí)缺乏，自我保護(hù)意識(shí)薄弱，增加其HPV 感染的風(fēng)險(xiǎn)。雖然年輕人免疫力強(qiáng)，HPV 感染常為輕癥，但是持續(xù)性、反復(fù)感染就會(huì)轉(zhuǎn)變成宮頸癌發(fā)生的重要風(fēng)險(xiǎn)因素；而絕經(jīng)期女性高發(fā)，多與激素水平降低、卵巢功能減退、陰道微生態(tài)屏障功能減弱密切相關(guān)。更需要關(guān)注的是各年齡組均以HPV 高危型別感染為主，因而在加強(qiáng)年輕女性和中老年女性HPV篩查的同時(shí)，對(duì)HPV 高危型別的檢測(cè)，在積極預(yù)防宮頸癌發(fā)生中具有重要意義。

本次研究共檢測(cè)出27 種HPV 基因型（高危型HPV-59 未檢出），其中高危型以HPV52，16，56 型為主，中危型以HPV53 型為主，低危型以HPV42 為主，前四位依次為HPV52，53，16，42 型。與省內(nèi)、外地區(qū)比較，其HPV 感染均以高危型感染為主（如HPV16，52，58），僅在個(gè)別基因型別和占比排列上有所差異，如本研究中高危型HPV58感染例次不高。國(guó)內(nèi)各地區(qū)HPV 感染率雖然不同，但是感染均集中在高危型別上，而高危型別是與婦科惡性病變密切相關(guān)的危險(xiǎn)因素。因此，筆者認(rèn)為除了關(guān)注各地區(qū)HPV 感染率情況，更應(yīng)該重視HPV 高危型別的分布和占比情況。

根據(jù)HPV 的感染狀態(tài)不同分為單一感染和混合感染[17]。本次研究結(jié)果以單一型感染為多，這與國(guó)內(nèi)報(bào)道的結(jié)果一致，提示當(dāng)前我國(guó)女性人群HPV感染以單一型、高危型別為特征。這為HPV 感染篩查及宮頸癌的防治策略提供依據(jù)，如HPV 篩查以高危型別檢測(cè)為主，可以縮短檢測(cè)時(shí)間、減輕患者費(fèi)用；在接種HPV 多價(jià)疫苗時(shí)，優(yōu)先考慮使用針對(duì)高危型別的疫苗。目前上市的HPV 疫苗有2價(jià)（HPV16，18 型）、4 價(jià)（HPV6，11，16，18 型）、9 價(jià)（HPV6，11，16，18，31，33，45，52，58 型），若能接種9 價(jià)疫苗可更好起到廣泛預(yù)防作用，然而其價(jià)格昂貴，難以普遍推廣[10]。因而，研制適宜中國(guó)人群HPV 感染型別的多價(jià)疫苗，對(duì)降低感染、預(yù)防宮頸癌發(fā)生具有重要意義。此外，HPV 型別混合感染病例現(xiàn)在已經(jīng)普遍存在，本次研究除雙重、三重感染占多數(shù)外，還可以見(jiàn)到四重、五重和七重型別感染的病例，提示針對(duì)多重感染時(shí)，要提高檢測(cè)方法的敏感度和特異度，保證檢測(cè)質(zhì)量以免出現(xiàn)假陽(yáng)性或假陰性結(jié)果，同時(shí)更要關(guān)注混合型感染對(duì)于治療及預(yù)后的影響。

綜上所述，本研究分析了西安地區(qū)HPV 感染和基因型別流行情況，旨在為本地衛(wèi)生部門制定HPV 感染防治工作提供依據(jù)。后續(xù)將會(huì)持續(xù)關(guān)注本地HPV 感染及基因型別流行特征，擴(kuò)大樣本量、形成多中心分析研究，以獲得更加客觀準(zhǔn)確的結(jié)果。