許延霞，瞿士鵬，王 琴，梅興天

（甘肅省金昌生態(tài)環(huán)境監(jiān)測中心，甘肅 金昌 737100）

在我國，六六六、滴滴涕等有機氯農(nóng)藥在追求農(nóng)作物高產(chǎn)量的時代起到重要的作用，做出過的重要貢獻。由于其具有高毒、難降解、蓄積性等特性［1］，已在1983 年被禁用。但由于有機氯農(nóng)藥的特性作用使得部分農(nóng)藥進入土壤環(huán)境［2］，而土壤是農(nóng)藥的主要載體，其殘留的有機氯農(nóng)藥會通過各種方式進行持續(xù)累積、擴散［3］，從而對農(nóng)產(chǎn)品造成殘留［4］，影響人體健康［5］。在此狀況下，對有機氯農(nóng)藥殘留量進行分析監(jiān)測具有重要的意義［6］。

α-六六六、β-六六六、γ-六六六、δ-六六六、O，P’-DDT、P，P’-DDE、P，P’-DDT、P，P’-DDD、環(huán)氧七氯和百菌清殘留量的測定方法有高效液相色譜法、氣相色譜法和質(zhì)譜法等［7-8］。關于有機氯農(nóng)藥殘留的檢測方法國內(nèi)外均有報道。馬健生等［9］用氣相色譜法對土壤樣品中的多種有機氯農(nóng)藥進行了分析檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)該方法快捷、準確度高和精密度高，能夠適用于土壤中有機氯污染物的分析檢測。為了科學使用農(nóng)藥防治病蟲害，保障土地使用安全、糧食安全，我們采用氣相色譜法檢測分析了金昌市永昌縣有機氯農(nóng)藥α-六六六、β-六六六、γ-六六六、δ-六六六、O，P’-DDT、P，P’-DDE、P，P’-DDT、P，P’-DDD、百菌清、環(huán)氧七氯的殘留量，對土壤樣品的前處理進行了方法優(yōu)化，在優(yōu)化的氣相色譜條件下對土壤樣品進行了檢測，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試農(nóng)藥樣品 供試有機氯農(nóng)藥分別是α-六六六、β-六六六、γ-六六六、δ-六六六、O，P’-DDT、P，P’-DDT、P，P’-DDE、P，P’-DDD，百菌清、環(huán)氧七氯（環(huán)氧七氯A 和環(huán)氧七氯B）的標準品，均購于生態(tài)環(huán)境部標準樣品研究所。環(huán)氧七氯在分析時標準溶液分為環(huán)氧七氯A 和環(huán)氧七氯B。計算檢出限時，報檢出限高的值，實際樣品分析中，報最高值。

1.1.2 土壤樣品 選取永昌縣農(nóng)村已種植過辣椒的農(nóng)田混合土壤作為研究對象。共采集4 份土樣，將土壤樣品風干，除去雜物，篩研細磨，制成60目（孔徑0.25 mm）的土樣，貼標簽，裝入棕色玻璃瓶用于農(nóng)藥或有機質(zhì)備用分析。

1.1.3 儀器與試劑 儀器：氣相色譜儀［Agilent 7890A 型，美國Agilent 公司，氣相色譜-電子捕獲檢測器（GC-ECD）］、數(shù)控旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（Hei-VAP Advantage ML/HB/G）、氮吹儀（N-EVAPTM111，Organomation Associates，Jnc）、振蕩器（TTL-800型萃取凈化振蕩器）、自動萃取裝置（MMV-1000W萃取振蕩儀）、離心機（TGL20M臺式高速冷凍離心機）。

試劑：正己烷（Hexane）、丙酮（Acetone）、二氯甲烷（Dichloromethane）、乙腈（Acetonitrile）。均為進口，農(nóng)殘級色譜純；無水硫酸鈉（馬弗爐400℃烘4 h，優(yōu)級純）、氯化鈉（馬弗爐400 ℃烘4 h，優(yōu)級純）。

1.2 土壤樣品前處理優(yōu)化

1.2.1 氣相色譜分析條件優(yōu)化 色譜柱：DB-5MS，30 m×0.25 mm×0.25 um。色譜條件：進樣口溫度為250 ℃，進樣量為1 uL，載氣為純度大于99.999%的高純氦氣，載氣流量為2.0 mL/min。色譜柱升溫程序：初始溫度45 ℃，保持6min，以25 ℃/min 升溫至240 ℃，保持20 min；ECD 檢測器溫度280 ℃，尾吹流量30 mL/min。進樣方式：不分流方式，為雙塔自動進樣器進樣。

1.2.2 標準曲線建立 配制有機氯標準溶液：包括有機氯農(nóng)藥（α-六六六、β-六六六、γ-六六六、δ-六六六、O，P’-DDT、P，P’-DDE、P，P’-DDT、P，P’-DDD）混合標準溶液（溶液①）和環(huán)氧七氯（A）（溶液②）、環(huán)氧七氯（B）（溶液③）以及百菌清（溶液④）的單標溶液，取溶液①、溶液②、溶液③、溶液④（濃度均為100 μg/mL）各100 μL分別置于4 個1 mL 的容量瓶中，正己烷定容后得到有機氯農(nóng)藥單標溶液（溶液⑤、溶液⑥、溶液⑦、溶液⑧），質(zhì)量濃度均為10.00 μg/mL，然后分別取100 μL 的（溶液⑤、溶液⑥、溶液⑦、溶液⑧）單標溶液置于1 個1 mL 的容量瓶中，用正己烷定容后得到最終所需試驗濃度的混標溶液（溶液⑨），質(zhì)量濃度為1.0 μg/mL。將α-六六六、β-六六六、γ-六六六、δ-六六六、O，P’-DDT、P，P’-DDT、P，P’-DDE、P，P’-DDD 等有機氯混合標準溶液和環(huán)氧七氯（A）及環(huán)氧七氯（B）、百菌清標準溶液，分別用正己烷做空白，制備6 個濃度系列（分別為5.0，10.0，20.0，50.0，100.0，200.0 μg/L）。以橫坐標為標準液濃度（x），以縱坐標為峰面積（y），制作標準曲線，得到曲線回歸方程（y=bx+a）。

1.2.3 提取劑的選擇 以乙腈、丙酮、二氯甲烷為提取劑，分別提取土壤樣品中的α-六六六、β-六六六、γ-六六六、δ-六六六、P，P’-DDT、O，P’-DDT、P，P’-DDD、P，P’-DDE、百菌清和環(huán)氧七氯，分別比較丙酮、二氯甲烷、乙腈3 種提取劑對有機氯農(nóng)藥的提取效果。

1.2.4 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)溫度對加標回收率的影響 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀的水浴溫度分別設定為36、40、45 ℃，測定在不同的水浴溫度下的土壤回收率和旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)率。

加標回收率=（加標試樣測定值-試樣測定）/加標量×100 %

1.2.5 氮吹時氮氣的流速對加標回收率的影響 用氮吹儀氮吹的過程中，對氮氣的流速大小進行設定，在液體面上氣體分別吹出深2、4 mm 的水渦時，尋求加標回收率達到最佳效果時的效率。

1.3 優(yōu)化條件下氣相色譜法檢測有機氯農(nóng)藥的靈敏性

1.3.1 有機氯農(nóng)藥的檢出限 根據(jù)美國環(huán)保局（EPA）SW-846 規(guī)定的方法［10］，確定檢出限（MDL），即檢出限=S× t（n-1，0.99），連續(xù)分析7 個樣品，在99%的置信區(qū)間下，t6，0.99=3.143，S 為平行測定的標準偏差，n 為重復測定的7 個樣品數(shù)。取10 個空白土壤樣20 g，分別加入標準溶液20 mL 并含有內(nèi)標物，濃度為1 ug/L，重復測定7 次。

1.3.2 氣相色譜法檢測方法的精密度和準確度 在選定的質(zhì)譜條件下，根據(jù)《農(nóng)田土壤環(huán)境質(zhì)量檢測技術規(guī)范》（NY/T395—2012），在進行平行雙樣分析時，每批實際樣品分析時均需做10%～15%的精密度測試，即平行雙樣的檢測，5 個樣品以下，需增加到50%以上。均對4 個樣品進行了平行測定。在選定的質(zhì)譜條件下，根據(jù)《農(nóng)田土壤環(huán)境質(zhì)量檢測技術規(guī)范》（NY/T395—2012），在實際樣品分析中，需要抽取10%～20%的樣品對準確度測試，即進行加標回收率檢測，因樣品數(shù)量不足10個，對分析條件進行優(yōu)化分析，對所有樣品進行了加標回收測定。

1.4 采用優(yōu)化條件下的氣相色譜法檢測土壤樣品

稱?。?0 g±0.1 g）土壤樣品4 個，分別將土壤樣品放于250 mL 稱量瓶中，粗量加入10 mL 的水，用振蕩器振蕩均勻后，加入40 mL 的乙腈并充分搖勻，之后浸泡約6 h 后，再振蕩提取35 min，將泥漿溶液充分倒入離心管中，在轉(zhuǎn)速為4 000 r/min 下離心15 min，取出將上清液過濾到裝有約6.0 g 氯化鈉的具塞量筒中，充分震蕩2 min，在室溫下靜置30 min，使乙腈相和水相充分分層。用移液管從具塞量筒中準確吸取10.0 mL 的上層溶液乙腈相，放于圓底燒瓶中，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上水溫40℃旋轉(zhuǎn)濃縮至約2 mL 左右，取下后在氮吹儀上吹至近干，然后加入1.0 mL 正己烷搖勻，用0.22 um 的濾膜過濾到2.0 mL 樣品瓶中，供氣相色譜儀檢測。

2 結(jié)果與分析

2.1 氣相色譜分析條件設定

在選定的儀器分析條件下，對六六六、DDT、百菌清、環(huán)氧七氯（A）、環(huán)氧七氯（B）等有機氯農(nóng)藥標準品進行分析，在氣相色譜優(yōu)化的條件下，均得到很好分離，而且各離子豐度均能達到相應的出鋒時間（圖1～3）。

圖1 GC-ECD 檢測有機氯農(nóng)藥混合標樣色譜

2.2 標準曲線建立

以橫坐標為標液濃度（x），以縱坐標為峰面積（y），制作標準曲線，得到曲線的回歸方程（y=bx+a）。以設定好的氣相色譜條件建立標準曲線，從而得到各待測組分的回歸方程（表1），且相關關系極為顯著。

圖2 GC-ECD 環(huán)氧七氯標準色譜

圖3 GC-ECD 百菌清標準色譜

表1 有機氯農(nóng)藥的線性測定結(jié)果

2.3 土壤樣品適宜提取劑篩選

從表2 可以看出，在3 種提取劑（丙酮、二氯甲烷、乙腈）中，丙酮在提取過程中易產(chǎn)生乳化現(xiàn)象，易揮發(fā)，易使試驗結(jié)果偏低，在試驗中不作為提取溶劑。二氯甲烷其極性比較弱，不易凈化雜質(zhì)，且對于水溶性的農(nóng)藥提取效果不是甚好，其加標回收率比較低。乙腈溶解力比較強，作為極性溶劑，不容易帶雜質(zhì)，能夠?qū)r(nóng)藥殘留提取的要求充分滿足。因此，用乙腈對有機氯農(nóng)藥進行提取比較穩(wěn)定，其平均加標回收率在91.3%～121.3%。

表2 有機氯農(nóng)藥在不同的提取溶劑中的回收率 %

2.4 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)溫度對加標回收率的影響

從表3 可以看出，當旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀的水浴溫度為36 ℃時其效率較低，不符合回收率的范圍要求；水浴溫度為45 ℃時，乙腈蒸發(fā)速度較快，雖然在合理的范圍之內(nèi)，但與之前相比回收率略有偏低；水浴溫度為40 ℃回收率比較理想，不但可以保證旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)的效果，可提高土壤的加標回收率。

表3 不同旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)溫度的加標回收率 %

2.5 氮吹時氮氣的流速對加標回收率的影響

從表4 可以看出，氮吹儀的氮氣流速在液面上吹出水渦深2 mm 時，土壤樣品的回收率比較好；氣體流速在液體面上吹出水渦深度小于2 mm時，雖然對加標回收率的影響變化不大，但其效率比較低；氣體流速在液體面上吹出水渦深約4 mm 時，雖然縮短了時間，但會導致?lián)p失較大，加標回收率低。

表4 不同氮吹流速的加標回收率 %

2.6 優(yōu)化條件下氣相色譜法檢測有機氯農(nóng)藥的靈敏性

2.6.1 有機氯農(nóng)藥的檢出限 在優(yōu)化條件下用氣相色譜法檢測有機氯農(nóng)藥的檢出限均低于定量檢出限（表5）。

表5 方法檢出限 μg/kg

2.6.2 氣相色譜法檢測方法的精密度和準確度 在優(yōu)化的色譜條件下及土壤樣品前處理方法選定的條件下，加標回收試驗的結(jié)果（表6）表明，在0.2、0.4、0.6 μg/mL 添加水平下，有機氯農(nóng)藥加標回收率為71.2%～121.2%，相對標準偏差為1.2%～12.2%，方法檢出限為0.28～0.95 μg/kg，均滿足試驗要求。

表6 土壤樣品中有機氯農(nóng)藥添加回收實驗結(jié)果 %

2.7 采用氣相色譜儀對實際土壤中有機氯農(nóng)藥的檢測結(jié)果

在優(yōu)化的氣相色譜條件和土壤樣品前處理方選定的情況下，測定實際4 個自然風干的備用土壤樣，均未出峰，即金昌市永昌縣農(nóng)村已種植過辣椒的農(nóng)田土壤樣品均未檢出有機氯農(nóng)藥。

3 結(jié)論

用氣相色譜儀檢測土壤中的α-六六六、β-六六六、γ-六六六、δ-六六六，O，P’-DDT、P，P’-DDE、P，P’-DDT、P，P’-DDD、環(huán)氧七氯和百菌清等有機氯農(nóng)藥的殘留量，對土壤樣品前處理進行了優(yōu)化。樣品用乙腈充分振蕩提取，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上用水浴溫度為40 ℃旋轉(zhuǎn)濃縮至約2 mL，置于氮吹儀上用吹至近干后用正己烷定容，最后用Florisil 柱凈化。在土壤前處理的過程中，盡最大可能將樣品中的有機氯殘留量提取出來，盡最大可能減少有機氯農(nóng)藥殘留量的損失，在氣相譜優(yōu)化條件下對土壤樣品進行檢測。本試驗中，檢測4 個實際土壤樣品時均未檢出。在0.2、0.4、0.6 ug/mL 添加水平下，加標回收率在71.2%～121.2%，相對標準偏差在1.2%～12.3%，方法檢出限在0.28～0.95 μg/kg。說明用氣相譜法檢測土壤中的有機氯農(nóng)藥，具有快速、準確度高、靈敏度高等優(yōu)點，適用于土壤中的有機氯農(nóng)藥殘留提取及分析。