唐樂(lè) 鄧淑芬 秦嫚嫚 江友 裘梁,*

(1 江西中醫(yī)藥大學(xué) 醫(yī)學(xué)轉(zhuǎn)化中心，南昌 330006；2 江西中醫(yī)藥大學(xué) 江西省中藥防治血管重塑相關(guān)疾病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，南昌 330006；3 深圳市寶安區(qū)石巖人民醫(yī)院，深圳 518108)

腸道微生態(tài)與腸道菌群有著直接聯(lián)系，腸道菌群的種類(lèi)及數(shù)量直接影響著腸道微生態(tài)的改變。腸道菌群可以分為益生菌、致病菌和條件致病菌。常見(jiàn)的益生菌有雙歧桿菌和乳酸桿菌等，是一類(lèi)可以通過(guò)調(diào)節(jié)腸道菌群平衡來(lái)對(duì)宿主產(chǎn)生有益作用的活的微生物。如，它具有緩解便秘[1]、治療非酒精性脂肪性肝病[2]、改善中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病及精神疾病[3]和預(yù)防腫瘤[4]等作用。條件致病菌則是指與宿主間的生態(tài)平衡在某些情況下被打破，形成生態(tài)失調(diào)而導(dǎo)致疾病發(fā)生的正常菌群，如人體共生菌之一的腸球菌即是一種條件致病菌。由于菌株差異，腸球菌具有益生和潛在致病雙重性。一方面腸球菌在機(jī)體內(nèi)發(fā)揮著重要的益生功能，能夠調(diào)整腸道菌群微生態(tài)平衡，促進(jìn)腸道環(huán)境健康[5]。另一方面，腸球菌也具有潛在的致病性。臨床實(shí)驗(yàn)證實(shí)，腸球菌不僅可引起皮膚創(chuàng)傷和尿路感染，而且可能引發(fā)新生兒早產(chǎn)[6]、新生兒極低體重[7]、新生兒腦膜炎[8]和新生兒敗血癥[9]等。糞腸球菌是腸球菌的一種，它是一種革蘭陽(yáng)性細(xì)菌，一般沒(méi)有莢膜。它存在于人體的口腔、呼吸道、腸道、泌尿道和生殖道。它可以作為益生菌使用，抑制其他病原菌的生長(zhǎng)，調(diào)節(jié)腸道微環(huán)境，在調(diào)節(jié)人體免疫方面發(fā)揮重要作用[10-11]。本研究從健康成人糞便分離出一株能產(chǎn)生抑菌圈的糞腸球菌，評(píng)價(jià)了其耐酸耐膽鹽能力、抗生素敏感性和拮抗致病菌等生物學(xué)特性，從而為該菌株做微生態(tài)制劑防治致病菌方面提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品及細(xì)胞

糞便樣品取自健康成人。人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞(Caco-2)來(lái)自本實(shí)驗(yàn)室保存。

1.1.2 指示菌

糞腸球菌(Enterococcus faecalis)V583、產(chǎn)氣腸桿菌(Enterobacter aerogenes)ZDY01、植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)ZDY04、干酪乳桿菌(Lactobacillus casei)ZDY08、嗜熱鏈球菌(Streptococcus thermophilus)、鼠李糖乳桿菌(Lactobacillus rhamnosusGG)均來(lái)自本實(shí)驗(yàn)室保存。

1.1.3 主要試劑

MRS固體培養(yǎng)基、MRS肉湯培養(yǎng)基、腦心浸液肉湯(BHI)、牛膽鹽購(gòu)自北京索萊寶科技有限公司；DMEM培養(yǎng)基、PBS和胎牛血清購(gòu)自北京?？寺∩锘瘜W(xué)制品有限公司；甘油購(gòu)自西隴化工股份有限公司；抗生素藥敏試紙片購(gòu)自杭州微生物試劑有限公司；腸球菌編碼鑒定盒購(gòu)自杭州濱和微生物有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 菌株的分離、篩選

將4.5 g糞便樣品溶解至30 mL MRS肉湯培養(yǎng)基，梯度稀釋到1×10-6涂布至MRS固體培養(yǎng)基表面，37℃厭氧培養(yǎng)48 h，挑選產(chǎn)生抑菌圈的單個(gè)菌落接種至1 mL MRS液體培養(yǎng)基中，37℃厭氧培養(yǎng)24 h，將培養(yǎng)后的菌液再次涂布至MRS固體培養(yǎng)基表面，得到純的菌株。同時(shí)，將菌株用20%甘油凍存于-80℃冰箱。

1.2.2 菌株的鑒定

(1)生化鑒定 根據(jù)腸球菌成套編碼鑒定盒說(shuō)明書(shū)對(duì)菌株進(jìn)行生理生化鑒定，參照編碼手冊(cè)進(jìn)行鑒別。

(2)16S rDNA鑒定 將菌株用MRS固體培養(yǎng)基活化之后，接種于MRS液體培養(yǎng)中，37℃過(guò)夜培養(yǎng)，12000 r/min離心5 min，收集菌體。采用細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒(生工生物工程(上海)股份有限公司)提取基因組DNA。以基因組DNA為模板，細(xì)菌16S rDNA的通用引物27F(5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3')和1492R(5'-CTACGGCTACCTTGTTACGA-3')進(jìn)行PCR擴(kuò)增16S rDNA序列，PCR反應(yīng)條件為：94℃預(yù)變熱5 min；94℃變性1 min，56℃退火30 s，72℃延伸2 min，循環(huán)30次；72℃延伸10 min。瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)：利用2% 瓊脂糖對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行檢測(cè)，每孔加入反應(yīng)產(chǎn)物5 μL，電壓120 V，電泳時(shí)間 20 min，電泳結(jié)束后，利用凝膠成像儀進(jìn)行觀察。并將PCR產(chǎn)物送至生物工程(上海)股份有限公司進(jìn)行測(cè)序。

(3)系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)構(gòu)建 將測(cè)序序列與Genebank數(shù)據(jù)庫(kù)中的相關(guān)菌16S rDNA序比對(duì)，并用MEGA 7.0軟件構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)確定菌株的種屬。

1.2.3 毒力基因鑒定

將QT01菌株用MRS固體培養(yǎng)基活化之后，接種于MRS液體培養(yǎng)中，37℃過(guò)夜培養(yǎng)，12000 r/min離心5 min，收集菌體。采用細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒[生工生物工程(上海)股份有限公司]提取基因組DNA。以基因組DNA為模板，分別以efαM、efαS、hyi、gei、ccf、cob、cyiA、cyiB、cyiM、cpd、esp和agg引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，PCR反應(yīng)條件為：94℃預(yù)變熱5 min；94℃變性1 min，56℃退火30 s，72℃延伸2 min，循環(huán)30次；72℃延伸10 min。瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)：利用2% 瓊脂糖對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行檢測(cè)，每孔加入反應(yīng)產(chǎn)物5 μL，電壓120 V，電泳時(shí)間 20 min，電泳結(jié)束后，利用凝膠成像儀進(jìn)行觀察。

1.2.4 藥敏試驗(yàn)

采用K-B紙片擴(kuò)散法[12]，測(cè)定分離菌QT01對(duì) 14種常見(jiàn)抗生素的藥敏試驗(yàn)。將QT01菌接種到 BHI 液體培養(yǎng)基中，37℃ 過(guò)夜厭氧培養(yǎng)。取500 μL QT01菌液離心(8000 r/min，3 min)，菌體經(jīng)PBS洗滌2次，重懸于PBS中，將細(xì)菌濃度稀釋至1×106CFU/mL，取100 μL涂布于BHI固體平板上，晾干，用鑷子將藥敏紙片貼于培養(yǎng)基表面，放置于37℃培養(yǎng)箱厭氧培養(yǎng)24 h，用游標(biāo)卡尺測(cè)量抑菌圈的大小。抑菌圈大小按2016年美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(huì)(clinical and laboratory standards institute,CLSI)制訂的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行供試菌及藥物敏感性鑒定和判斷。

1.2.5 耐膽鹽試驗(yàn)

將QT01菌株接種于BHI液體培養(yǎng)基中，置于37℃培養(yǎng)箱過(guò)夜厭氧培養(yǎng)，分別配制不含牛膽鹽及含0.3%、0.5%和1%牛膽鹽的BHI液體培養(yǎng)基。將培養(yǎng)后的QT01菌液以1:100的比例加入到不含牛膽鹽及含有不同濃度牛膽鹽的BHI液體培養(yǎng)基中，每個(gè)濃度做3個(gè)復(fù)孔，放至37℃厭氧培養(yǎng)箱，分別在0、4、8、12和24 h檢測(cè)培養(yǎng)液A600值，并進(jìn)行平板計(jì)數(shù)。

1.2.6 耐酸試驗(yàn)

將QT01菌株接種于BHI液體培養(yǎng)基中，置于37℃培養(yǎng)箱過(guò)夜厭氧培養(yǎng)。用0.1 mol/L HCL將BHI液體培養(yǎng)基pH值分別調(diào)成2.0、3.0、4.0、5.0和6.0，分別取不同pH值的培養(yǎng)基10 mL分裝到15 mL的離心管中，每個(gè)pH值做3個(gè)復(fù)孔，在每個(gè)管中加入100 μL QT01菌液，放至 37℃培養(yǎng)箱厭氧培養(yǎng)，分別在0、2、4、6、8、10和12 h時(shí)進(jìn)行平板計(jì)數(shù)。

1.2.7 模擬胃腸道試驗(yàn)

人工胃液制備[13]：含7 mmol/L NaCl、 7 mmol/L KCl、 45 mmol/L NaHCO3、0.30%胃蛋白酶，以0.1 mol/L HCl 調(diào) pH至2.5，過(guò)濾除菌備用。人工腸液制備[13]：含0.1 g/L胰蛋白酶、3 g/L牛膽鹽、0.835 g/L KCl、6.5 g/L NaCl、0.22 g/L CaCl2、1.386 g/L NaHCO3，以0.1 mol/L HCl調(diào) pH至7.5，過(guò)濾除菌備用。將QT01菌株接種于BHI液體培養(yǎng)基中，置于37℃培養(yǎng)箱過(guò)夜厭氧培養(yǎng)，取500 μL QT01菌液離心(12000 r/min，10 min)，棄上清，菌體重懸于10%脫脂乳中。取100 μL菌懸液與10 mL的人工胃液或人工腸液混合后，37℃厭氧培養(yǎng)，分別在0和2 h取樣檢測(cè)培養(yǎng)液A600值，并進(jìn)行平板計(jì)數(shù)。

1.2.8 抑菌試驗(yàn)

QT01菌株充分活化后，以1%接種量接種于MRS培養(yǎng)基中，37℃厭氧培養(yǎng)。取屎腸球菌Ab、 屎腸球菌As、糞腸球菌V583、 產(chǎn)氣腸桿菌ZDY01、植物乳桿菌ZDY04、干酪乳桿菌、 嗜熱鏈球菌、 鼠李糖乳桿菌作為指示菌，分別將菌體量為1×106CFU的指示菌涂布于MRS固體平板上，靜置晾干。用移液槍吸取2 μL過(guò)夜培養(yǎng)的QT01菌液(菌體量約為1×105CFU) 滴至MRS固體平板 (每個(gè)平板5滴) 。置于37 ℃培養(yǎng)箱厭氧培養(yǎng)20～24 h，用游標(biāo)卡尺測(cè)量抑菌圈的大小。

1.2.9 黏附能力及抑菌能力測(cè)定

Caco-2細(xì)胞經(jīng)活化后，按1×105個(gè)細(xì)胞/孔的細(xì)胞量鋪至24孔板，以DMEM培養(yǎng)基(不含雙抗)培養(yǎng)，置于37℃、5%CO2條件下培養(yǎng)至單層達(dá)98%。QT01過(guò)夜培養(yǎng)后，無(wú)菌PBS清洗兩次，重懸于DMEM培養(yǎng)基(不含雙抗)，將125 μL QT01菌懸液(濃度約1×108CFU/mL)與Caco-2細(xì)胞共孵育2 h后，PBS洗去未黏附的細(xì)菌，經(jīng)含0.25% EDTA的胰酶消化后，收集細(xì)胞懸浮液，涂布于BHI固體培養(yǎng)基上，置于37℃培養(yǎng)箱厭氧培養(yǎng)12 h，計(jì)算平板上菌落數(shù)。采用同樣方法制備致病菌V583菌懸液，抑制V583實(shí)驗(yàn)通過(guò)3種方式進(jìn)行：①競(jìng)爭(zhēng)試驗(yàn)：QT01菌與致病菌V583同時(shí)與Caco-2細(xì)胞共孵育2 h。②排斥試驗(yàn)：QT01菌與Caco-2細(xì)胞共孵育1 h后，PBS洗去未黏附的細(xì)菌，再加入致病菌V583共孵育1 h。③置換試驗(yàn)：致病菌V583與 Caco-2 細(xì)胞共孵育1 h后，PBS洗去未黏附的細(xì)菌，再加入QT01菌共孵育1 h。最后，PBS洗去未黏附的細(xì)菌，經(jīng)0.25% EDTA的胰酶消化后，收集溶液，涂布于BHI固體培養(yǎng)基上，置于37℃培養(yǎng)箱厭氧培養(yǎng)12 h，計(jì)算平板上菌落數(shù)。

1.3 數(shù)據(jù)處理

采用Graphpad Prism version 8.4.3軟件和SPSS 20.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，所得數(shù)據(jù)均表示為均值±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)，采用單因素和兩因素方差分析法 (ANOVA)比較組間顯著性差異，用Tukey' spost hoc 進(jìn)行檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 菌株分離與鑒定

PYR、VP、蔗糖、精氨酸、MAG、蕈糖、蔗糖和山梨醇試驗(yàn)為陽(yáng)性；DPP、PMG和TMZ為陰性。參考編碼手冊(cè)，該分離菌株與糞腸球菌一致，故初步判定為糞腸球菌，詳見(jiàn)表1。

將來(lái)源于健康成人的糞便經(jīng)梯度稀釋后，涂布于MRS固體培養(yǎng)基上，37℃過(guò)夜厭氧培養(yǎng)后，MRS固體培養(yǎng)基上出現(xiàn)一具有顯著透明圈菌株，將其命名為QT01，該菌落形態(tài)為圓形、邊緣整齊、表面光滑、白色菌落，菌落直徑1.0～2.0 mm。另隨機(jī)挑取QT01周?chē)?個(gè)菌落，分別命名為Ab和As。對(duì)3株菌進(jìn)行16S rDNA基因序列的測(cè)定及與GenBank核酸數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)分析，結(jié)果表明QT01為糞腸球菌，Ab和As分別為屎腸球菌。生理生化鑒定結(jié)果見(jiàn)表1。通過(guò)與糞腸球菌模式菌株生理生化特征進(jìn)行對(duì)比，可初步確定QT01為糞腸球菌。進(jìn)一步將QT01、Ab和As與腸球菌屬其他菌株進(jìn)行系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)分析，結(jié)果如圖1所示，QT01與腸球菌屬其他糞腸球菌進(jìn)化水平相當(dāng)，與里氏腸球菌S299株和腸道共生性腸球菌LMG7937株等關(guān)系接近。Ab和As均為屎腸球菌。

表1 分離菌生化特性試驗(yàn)結(jié)果Tab.1 Results of the biochemical characteristics test of the isolate

2.2 糞腸球菌毒力基因鑒定

采用表2中引物，PCR擴(kuò)增QT01毒力基因，結(jié)果如圖2所示。QT01含毒力基因agg，cylA，esp，efaS，cpd和cob，且大小與理論值相符，但不含毒力基因gelE，cylM，cylB，ccf和hyl。

表2 糞腸球菌毒力基因及引物Tab.2 Enterococcus faecalis virulence genes and primers

2.3 藥敏試驗(yàn)結(jié)果

根據(jù)藥敏試驗(yàn)獲得的藥敏環(huán)直徑大小判斷QT01對(duì)抗生素的敏感性，結(jié)果顯示：QT01對(duì)阿莫西林、青霉素、氯霉素、環(huán)丙沙星和萬(wàn)古霉素敏感；對(duì)利福平、慶大霉素和鏈霉素中度敏感；對(duì)四環(huán)素、卡那霉素、桿肽菌、多黏菌素B、紅霉素和頭孢西丁耐藥。說(shuō)明QT01對(duì)大部分常見(jiàn)抗生素敏感。具體結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 QT01藥敏試驗(yàn)結(jié)果Tab.3 Results of drug sensitivity test of QT01

2.4 抑菌試驗(yàn)結(jié)果

為進(jìn)一步確定QT01是否能抑制其他致病菌生長(zhǎng)，將QT01與其他菌相互作用。從表4可以看出，QT01對(duì)條件致病菌V583、As、Ab和ZDY01等菌株都有不同程度的抑制作用，其中對(duì)V583的抑菌圈直徑為(1.59±0.51) mm，抑菌效果最好；對(duì)As、Ab和ZDY01的抑菌圈直徑分別為(1.01±0.22) mm，(0.824±0.206) mm，(0.634±0.266) mm，抑菌效果次之；此外，QT01對(duì)益生菌ZDY04的抑菌圈直徑為(0.345±0.025) mm，抑菌效果較弱，而對(duì)益生菌Streptococcus thermophilus和Lactobacillus rhamnosusGG的抑菌效果并不明顯。以上結(jié)果表明QT01能抑制條件致病菌，而不能抑制益生菌的生長(zhǎng)(圖3)。

表4 QT01抑菌試驗(yàn)結(jié)果Tab.4 Results of Bacteriostatic Test of QT01

2.5 細(xì)胞黏附試驗(yàn)結(jié)果

以糞腸球菌V583為指示菌，采用競(jìng)爭(zhēng)、排斥和替換3種方式進(jìn)行實(shí)驗(yàn)考察QT01拮抗V583黏附腸上皮細(xì)胞作用。結(jié)果如表5所示：與對(duì)照組相比，在競(jìng)爭(zhēng)實(shí)驗(yàn)中， QT01 顯著抑制了糞腸球菌V583對(duì)Caco-2細(xì)胞的黏附；但在排斥和替換試驗(yàn)中， QT01對(duì)V583 黏附Caco-2細(xì)胞的能力并無(wú)明顯影響。

表5 QT01對(duì) V583的黏附拮抗作用Tab.5 Adhesion antagonism of QT01 to V583

2.6 耐酸試驗(yàn)結(jié)果

將QT01分別接種于不同p H值( 2.0、3.0、4.0 、5.0和6.0)的BHI液體培養(yǎng)基中厭氧生長(zhǎng)12 h，隨后進(jìn)行平板菌落計(jì)數(shù)。結(jié)果如圖4所示：在pH 6.0時(shí)，QT01仍保持一定的生長(zhǎng)速度，而在pH≤5.0時(shí)，QT01幾乎不能生長(zhǎng)。

2.7 模擬胃腸道試驗(yàn)結(jié)果

我們采用模擬胃腸液確定QT01菌株耐受胃腸道能力。如圖5所示，QT01在模擬胃液中維持初始活菌計(jì)數(shù)水平。而在模擬腸液中，2 h后的QT01的活菌計(jì)數(shù)增加了1.902×108CFU/mL，提高了1.2倍。因此，QT01雖不能在胃液中增殖，但能耐受胃液2 h，同時(shí)亦能耐受腸液。

2.8 耐膽鹽試驗(yàn)結(jié)果

將QT01接種于含不同膽鹽濃度(0.3%、0.5%和1%)的BHI液體培養(yǎng)基中，考察其膽鹽耐受能力。結(jié)果如圖6所示：與不加膽鹽的對(duì)照組相比，QT01在0.3%、0.5%和1%膽鹽濃度下處理4 h后生長(zhǎng)速度較慢，但在8 h后各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組間已無(wú)明顯差異。說(shuō)明在膽鹽環(huán)境中并不會(huì)影響QT01菌株的生長(zhǎng)，其具有耐膽鹽特性。

3 討論和結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)以成人糞便分離出的糞腸球菌QT01為研究對(duì)象，通過(guò)耐酸、耐膽鹽、藥敏試驗(yàn)、模擬胃腸道實(shí)驗(yàn)和抑菌試驗(yàn)等表明該菌株耐酸但不能在酸性條件增殖，耐膽鹽并能增殖；對(duì)常見(jiàn)抗生素如阿莫西林、青霉素、氯霉素和環(huán)丙沙星等敏感；能抑制糞腸球菌致病株V583和產(chǎn)氣腸桿菌，但不能抑制植物乳桿菌和嗜熱鏈球菌。不同菌株具有不同的抑菌物質(zhì)，其抑菌機(jī)理也并不相同。Claes等[15]稱(chēng)，LGG對(duì)沙門(mén)菌的強(qiáng)烈抑制作用來(lái)自乳酸的積累。Vimont等[16]研究發(fā)現(xiàn)屎腸球菌LCW44對(duì)單核細(xì)胞李斯特菌的抑制是由于細(xì)菌素的產(chǎn)生。同時(shí)，有研究表明菌體的自聚集與致病菌的共聚集效應(yīng)對(duì)抑菌活性也起到了一定的作用。然而本文所涉及的糞腸球菌QT01究竟是通過(guò)何種機(jī)理產(chǎn)生抑菌作用還有待進(jìn)一步研究。

能夠抵抗較強(qiáng)的酸性環(huán)境是外源菌體能在腸道中存活和發(fā)揮作用的先決條件。胃液pH會(huì)隨著飲食結(jié)構(gòu)的變化而出現(xiàn)波動(dòng)，pH通常為3左右[17]，空腹食用酸性食品可達(dá)1.5，食用堿性食品可達(dá)4～5，且食物尤其是流食通過(guò)胃的時(shí)間相對(duì)較短，一般1～2 h[18]。本實(shí)驗(yàn)中Enterococcus faecalisQT01經(jīng) pH2、3、4、5和6的培養(yǎng)基處理12 h后，菌株僅在pH6條件下維持一定的生長(zhǎng)能力，pH2、3、4和5均無(wú)法正常生長(zhǎng)。模擬胃腸道實(shí)驗(yàn)也證明，QT01在人工胃液處理2 h后，活菌數(shù)量雖沒(méi)有發(fā)生明顯變化，但仍能存活。因此，研究者判斷該糞腸球菌菌株QT01能夠耐受胃內(nèi)低酸環(huán)境，但不能在酸性環(huán)境下增殖。將在下一步研究中擬對(duì)pH＜5條件培養(yǎng)的細(xì)菌移除酸性條件進(jìn)行培養(yǎng)，以判斷其是否能耐受酸性環(huán)境。

外源菌體被食入人體后，不僅要抵抗胃液，還要抵抗具有抑菌作用的膽鹽。高濃度膽鹽形成的滲透壓使腸液內(nèi)的微生物質(zhì)壁分離從而抑制其生長(zhǎng)。人體小腸中膽汁鹽的含量在0.03%～0.3%范圍波動(dòng)，只有具有較強(qiáng)耐膽汁鹽能力的菌株才能順利通過(guò)小腸而到達(dá)大腸[19]。本試驗(yàn)中糞腸球菌經(jīng)質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.3%、0.5%和1%的膽鹽處理4 h后平均活菌數(shù)密度分別為 4.24×109、3.92×109和3.29×109CFU/mL，8 h時(shí)活菌數(shù)達(dá)到峰值，分別為9.44×109、9.99×109和9.57×109CFU/mL，說(shuō)明糞腸球菌不僅能夠耐受高膽鹽，還能在高膽鹽環(huán)境下增殖。

耐萬(wàn)古霉素腸球菌是引起院內(nèi)感染的主要因素之一[20-21]，而采用抗生素治療會(huì)導(dǎo)致腸內(nèi)耐萬(wàn)古霉素腸球菌增殖，使患者更容易發(fā)生血液感染[22]。其中，腸球菌約占感染性心內(nèi)膜炎病原菌的5%～15%，也有少數(shù)病例報(bào)道早產(chǎn)兒敗血癥和腦膜炎中也檢測(cè)到糞腸球菌和屎腸球菌。Enterococcus faecalisQT01除對(duì)紅霉素和頭孢西丁有耐藥性外，對(duì)其他抗生素均敏感。此外，QT01能夠有效抑制如糞腸球菌致病菌V583等腸球菌的生長(zhǎng)，文獻(xiàn)報(bào)道糞腸球菌產(chǎn)生的細(xì)菌素能抑制革蘭陽(yáng)性細(xì)菌如梭狀芽胞桿菌、李斯特菌、葡萄球菌和乳酸桿菌等[16,23]，但對(duì)于QT01是否通過(guò)分泌的抑菌物質(zhì)抑制V583增殖以及是否在體內(nèi)能有效緩解萬(wàn)古霉素抗性腸球菌引起的感染有待進(jìn)一步研究。

綜上所述，Enterococcus faecalisQT01具有很好的耐酸、耐膽鹽和抑菌生物學(xué)特性，或可將其作為微生態(tài)制劑使用[25]。