李金州

(蘇州華測(cè)安評(píng)技術(shù)服務(wù)有限公司，江蘇 蘇州，215000)

2007年農(nóng)業(yè)部農(nóng)藥檢定所出版的《農(nóng)藥登記殘留田間試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程》，為國(guó)內(nèi)開展農(nóng)藥殘留田間試驗(yàn)的主要標(biāo)準(zhǔn)。到2014年，在農(nóng)業(yè)部農(nóng)藥檢定所的推動(dòng)下，國(guó)內(nèi)農(nóng)藥殘留田間試驗(yàn)的良好實(shí)驗(yàn)室規(guī)范(GLP)才得以真正開展，這對(duì)于規(guī)范農(nóng)藥登記殘留田間試驗(yàn)起到了至關(guān)重要的作用。

筆者通過近幾年農(nóng)藥殘留田間試驗(yàn)的實(shí)踐和觀察，對(duì)農(nóng)藥殘留田間試驗(yàn)提出一些個(gè)人看法，以期為國(guó)內(nèi)農(nóng)藥殘留田間試驗(yàn)提供一些技術(shù)參考。

1 對(duì)試驗(yàn)單位人員的要求

試驗(yàn)單位所有人員應(yīng)為簽訂勞動(dòng)合同的長(zhǎng)期工作人員，并應(yīng)具備相應(yīng)的技術(shù)能力。試驗(yàn)單位所有人員不能同時(shí)在兩家及以上農(nóng)藥登記試驗(yàn)認(rèn)定單位任職。各單位所承擔(dān)的試驗(yàn)項(xiàng)目應(yīng)與人員數(shù)量匹配，當(dāng)出現(xiàn)人員較少或其他特殊情形時(shí)，人員可以兼職，一般只能兼職1項(xiàng)，但關(guān)鍵崗位不能相互兼職，QA不能參加自己負(fù)責(zé)審核的項(xiàng)目。農(nóng)藥登記試驗(yàn)認(rèn)定單位關(guān)鍵崗位指機(jī)構(gòu)負(fù)責(zé)人、質(zhì)量保證部門負(fù)責(zé)人(含質(zhì)量保證部門人員)、試驗(yàn)項(xiàng)目負(fù)責(zé)人、檔案管理員、樣品管理員。

2 主計(jì)劃表

試驗(yàn)主計(jì)劃表反映了試驗(yàn)的進(jìn)展情況、工作量以及時(shí)間安排等信息總匯，用于統(tǒng)籌安排下一步的試驗(yàn)內(nèi)容和計(jì)劃，需要記錄試驗(yàn)當(dāng)前進(jìn)展、被試物、專題編號(hào)、樣品編號(hào)、委托方信息、試驗(yàn)類型、施藥日期、采樣日期、試驗(yàn)項(xiàng)目啟動(dòng)和完成日期、試驗(yàn)項(xiàng)目負(fù)責(zé)人、注意事項(xiàng)等，該表用于指導(dǎo)農(nóng)藥殘留試驗(yàn)的開展情況。

3 試驗(yàn)點(diǎn)的選擇

試驗(yàn)點(diǎn)的選擇對(duì)于試驗(yàn)的合理性有著重要的作用；試驗(yàn)點(diǎn)的選擇需要結(jié)合《農(nóng)藥登記殘留試驗(yàn)區(qū)域指南》、優(yōu)先安排在作物主產(chǎn)區(qū)，綜合考慮作物的種植方式、品種、土壤類型、栽培方式、生態(tài)和氣候等條件的差異對(duì)農(nóng)藥殘留的影響；對(duì)于多個(gè)省(區(qū)、市)種植的作物，應(yīng)在不同生態(tài)類型的省(區(qū)、市)開展試驗(yàn)；特色小宗作物只在1～2個(gè)省(區(qū)、市)局部種植的作物，可以在同一省(區(qū)、市)的不同區(qū)域開展試驗(yàn)。另外，有一些作物的種植區(qū)域比較集中，如陜西蘋果、江西柑橘、四川洋蔥種植面積較大；農(nóng)藥殘留試驗(yàn)的登記單位也比較集中，3區(qū)、4區(qū)、5區(qū)農(nóng)藥殘留登記的單位較多，而2區(qū)、7區(qū)、8區(qū)相對(duì)單位較少，如陜西、新疆、江西、四川、福建目前沒有農(nóng)藥殘留登記單位。因此，選擇試驗(yàn)點(diǎn)時(shí)要特別注意試驗(yàn)點(diǎn)之間的距離，比如蘋果、春大豆、柑橘種植區(qū)域比較集中，要確保相同的耕作方式下試驗(yàn)點(diǎn)距離應(yīng)在200km以上，盡量做到分布均勻合理。對(duì)于栽培方式，需要設(shè)施栽培半數(shù)的作物包括韭菜、菠菜、普通白菜、芹菜、番茄、辣椒、茄子、黃瓜、西葫蘆；需要全部設(shè)施栽培的作物有草莓。

表1 距離不足200km的部分試驗(yàn)點(diǎn)

4 試驗(yàn)時(shí)間的要求

了解當(dāng)?shù)刈魑锏姆N植時(shí)間、栽培方式、生育期、防治對(duì)象的發(fā)生規(guī)律，并以此為依據(jù)，確定適宜的施藥日期和樣品采集日期。由于目前的農(nóng)藥登記政策中并未強(qiáng)調(diào)農(nóng)作物殘留試驗(yàn)的完成時(shí)限，很多公司根據(jù)委托方要求在1年之內(nèi)完成試驗(yàn)，為趕進(jìn)度而不按照農(nóng)作物生長(zhǎng)規(guī)律，脫離生產(chǎn)實(shí)際，盲目的進(jìn)行農(nóng)藥登記試驗(yàn)，違背了農(nóng)作物殘留試驗(yàn)的基本原則，所獲得的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)不應(yīng)該被認(rèn)可。

5 試驗(yàn)作物的要求

5.1 試驗(yàn)作物的品種要求 對(duì)于試驗(yàn)作物，要求以主栽品種為主，并說明具體的作物類型，比如普通玉米、鮮食玉米、秈稻、粳稻、雜交稻等；筆者經(jīng)常遇到除草劑的農(nóng)藥登記，委托方未說明是普通玉米還是鮮食玉米，而很多除草劑在甜玉米、糯玉米上存在明顯的藥害，而且影響作物的生長(zhǎng)，對(duì)于農(nóng)藥殘留試驗(yàn)的準(zhǔn)確性是有影響的，這樣登記的農(nóng)藥對(duì)農(nóng)戶是不負(fù)責(zé)的。目前，缺少作物品種和殘留量關(guān)系的研究，比如普通玉米和鮮食玉米，秈稻、粳稻、雜交稻等殘留量的差異。

5.2 需要做反轉(zhuǎn)試驗(yàn)的作物 對(duì)于成熟期比較短，需要一次性收獲的作物，如玉米、小麥、水稻、油菜，后期施藥需要做反轉(zhuǎn)試驗(yàn)。以玉米后期施藥的殺蟲劑為例，消解+終殘?jiān)囼?yàn)一般需要設(shè)計(jì)11個(gè)小區(qū)，其中5個(gè)小區(qū)采集鮮食玉米和青秸稈，5個(gè)小區(qū)采集玉米籽粒和秸稈，1個(gè)小區(qū)作為對(duì)照；當(dāng)采收間隔期相近時(shí)，適當(dāng)可以減少小區(qū)數(shù)目。

5.3 需要做標(biāo)記的作物 如果研究農(nóng)藥的消解動(dòng)態(tài)規(guī)律，而且施藥時(shí)果實(shí)已經(jīng)形成，需要對(duì)施藥的果實(shí)做標(biāo)記，如黃瓜、葡萄、番茄、豇豆、蘑菇、草莓、獼猴桃等。

5.4 施藥時(shí)需要處理的作物 對(duì)于西瓜，需要扒開葉片進(jìn)行施藥。

6 施藥的注意事項(xiàng)

6.1 小區(qū)的設(shè)置和規(guī)劃圖 試驗(yàn)小區(qū)的布置需要考慮風(fēng)向、水流方向、施藥次數(shù)等，并按照用藥量由低到高的順序排列，避免施藥的漂移而造成小區(qū)之間交叉污染，小區(qū)不能隨機(jī)排列；同時(shí)，澆水時(shí)不能串灌。試驗(yàn)必須設(shè)對(duì)照小區(qū)，并與處理區(qū)設(shè)置有效的隔離帶，避免漂移、揮發(fā)和淋溶污染。在畫小區(qū)規(guī)劃圖時(shí)，需要提供試驗(yàn)地點(diǎn)的經(jīng)緯度，附近的永久性標(biāo)志物(建筑或道路)，風(fēng)向、水流方向、方位，便于追蹤試驗(yàn)點(diǎn)信息[1]。田間試驗(yàn)標(biāo)簽要防水、不褪色、醒目、牢固，并注明項(xiàng)目名稱、專題編號(hào)、小區(qū)編號(hào)、施藥日期等信息。

對(duì)于水稻插秧前后施藥、水芹、茭白[2]、蓮藕、芡實(shí)(雞頭米)、茨菰(慈菇)、荸薺、莼菜、菱角等作物，需要小區(qū)之間做田埂，保證不同小區(qū)之間的有效隔離，避免處理和對(duì)照的相互污染。

6.2 噴霧器和步數(shù)的校準(zhǔn) 對(duì)于使用的噴霧器，首先要對(duì)噴霧器進(jìn)行校準(zhǔn)，保證小區(qū)內(nèi)施藥?kù)F滴的均勻性和噴霧器的壓力恒定，而且試驗(yàn)小區(qū)只能噴藥1遍。在施藥時(shí)，我們經(jīng)常會(huì)遇到以下問題：

第一，小區(qū)藥液量不夠，導(dǎo)致無法完成小區(qū)面積的施藥；

第二，噴霧器剩余一部分無效體積的藥液，無法完全施入小區(qū)；

第三，噴霧器中的剩余藥液量變少，噴霧器壓力變小，有藥液滴出，導(dǎo)致小區(qū)局部濃度偏高而引起噴霧不均勻。對(duì)于這些問題，需要保證藥液量必須富余，一般而言，供試品和用水量同比增加1.1倍或1.2倍，保證藥液富余，以便于解決上述的施藥問題[3]。

對(duì)于步數(shù)的校準(zhǔn)，需要先把小區(qū)進(jìn)行規(guī)劃，計(jì)算每小區(qū)的施藥時(shí)間、行走的次數(shù)、單程施藥的時(shí)間，盡量做到均勻施藥。

6.3 施藥方法 包括噴霧法、瓶甩法、甩施法、藥土法、撒施法、溝施法、穴施法、灌根、種子處理和包衣等。

6.4 施藥次數(shù) 土壤處理劑、種子處理劑 (拌種劑) 、除草劑或部分植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑等，只施藥1次。

6.5 用水量(或用土量) 根據(jù)作物大小、施藥方式等確定用水量(或用土量)，如果增加用水量，則用水量和用藥量需要同比增加，確保藥液濃度不變。一些公司沒有規(guī)定用水量，這樣是不規(guī)范的。

6.6 施藥時(shí)間和生產(chǎn)實(shí)際的關(guān)系 施藥時(shí)間根據(jù)作物生長(zhǎng)期、試驗(yàn)需要來推算，施藥時(shí)間不強(qiáng)求與實(shí)際防治的施藥時(shí)期相一致。另外，對(duì)于需要用樣品采收時(shí)間反推施藥時(shí)間的試驗(yàn)，需要了解作物的正常成熟時(shí)間，如黃淮海和東北的玉米，黃淮海夏玉米一般在每年的9月底至10月初收獲，而東北春玉米正常采收是10月上中旬，但有的農(nóng)戶為了等市場(chǎng)價(jià)抬高，東北春玉米可以推遲到12月份采收，根據(jù)這個(gè)收獲時(shí)間反推的施藥日期，所測(cè)定的農(nóng)藥殘留量肯定不是實(shí)際的情況。

目前尚缺少作物播種時(shí)間和殘留量的關(guān)系研究，比如水稻分為單季稻和雙季稻，黑龍江、遼寧、吉林、江蘇為單季稻，而廣東、廣西為雙季稻，對(duì)于雙季稻種植區(qū)域，選擇哪一個(gè)季節(jié)的水稻農(nóng)藥殘留量更高哪？這是我們需要研究的地方。

6.7 施藥的照片和要求 施藥過程要及時(shí)拍照，記錄儀器校準(zhǔn)過程、施藥過程、作物的整體和局部生長(zhǎng)狀況。

6.8 施藥時(shí)作物的生長(zhǎng)狀態(tài)和BBCH 使用統(tǒng)一規(guī)范的施藥時(shí)作物生長(zhǎng)狀態(tài)和BBCH，對(duì)于準(zhǔn)確確定施藥時(shí)間顯著至關(guān)重要。目前有2001年Uwe Meier發(fā)布的第二版《Growth stages of mono-and dicotyledonous plants BBCH Monograph》[4]，該標(biāo)準(zhǔn)包含了通用作物和其他大部分農(nóng)作物。如果該標(biāo)準(zhǔn)沒有登記作物，可采用通用作物(如煙草)或類似作物。另外，煙草也可以參考2019年國(guó)際煙草科學(xué)研究合作中心(https：//www.coresta.org/)發(fā)布的《A Scale For Coding Growth Stages in Tobacco Crops》[5]標(biāo)準(zhǔn)。

6.9 施藥的有效性 施藥的有效性是評(píng)價(jià)施藥成功的關(guān)鍵，具體包括噴霧器是否異常、噴霧器流速和行走速度的校準(zhǔn)、施藥時(shí)行走速度和施藥時(shí)間是否控制好、施藥時(shí)環(huán)境條件是否符合施藥要求(風(fēng)速﹤3m/s、溫度﹤40℃)、剩余藥液量是否控制在誤差允許范圍(﹤10%)之內(nèi)、藥液是否正常施于小區(qū)(藥液有無翻倒)、施藥后有無災(zāi)害性天氣、施藥前后2h有無降雨、小區(qū)施藥前后有無灌溉、小區(qū)有無使用其他影響試驗(yàn)的農(nóng)藥等。

7 樣品的采收和制備

7.1 采收間隔期的設(shè)置 采收間隔期是與殘留量相關(guān)性最顯著的因素，是制定PHI的重要依據(jù)，需要根據(jù)農(nóng)作物病、蟲、草害防治的實(shí)際情況以及農(nóng)產(chǎn)品采收適期設(shè)置采收間隔期。對(duì)于特定生長(zhǎng)期施用的農(nóng)藥，如苗期除草劑、種子包衣劑等，施藥到收獲的間隔即采收間隔期。對(duì)于要求標(biāo)注安全間隔期的農(nóng)藥，一般設(shè)2個(gè)采收間隔期測(cè)定最終殘留量。當(dāng)作物可食用部位形成后施用的農(nóng)藥，應(yīng)進(jìn)行殘留消解試驗(yàn)，以研究農(nóng)藥在農(nóng)作物的殘留量變化規(guī)律；不推薦安全間隔期的不需要進(jìn)行消解試驗(yàn)(種子處理劑、除草劑等作物生長(zhǎng)前期使用)。除最終殘留試驗(yàn)設(shè)置的采收間隔期外，消解試驗(yàn)應(yīng)在推薦的安全間隔期前后至少再設(shè)3個(gè)采樣時(shí)間點(diǎn)，對(duì)于消解較快的農(nóng)藥，采收間隔期時(shí)間應(yīng)以小時(shí)計(jì)；對(duì)于生長(zhǎng)期較短、鮮嫩時(shí)采摘的作物，如葉菜類蔬菜、黃瓜、番茄、豇豆、草莓、茶葉等，可以設(shè)置0d(2h)、1d、3d、5d、7d、10d、14d；對(duì)于生長(zhǎng)期較長(zhǎng)的作物，如蘋果、柑橘、棉花、糧食作物，可以設(shè)置0d(2h)、7d、14d、21d、28d、30d、40d。

7.2 樣品的采收、制備、保存和運(yùn)輸 樣品的采收要有照片記錄作物的整體和局部生長(zhǎng)狀況，并記錄相應(yīng)的采樣生長(zhǎng)狀態(tài)和BBCH。在所選的采樣點(diǎn)上有選擇地采樣，應(yīng)避免采有病蟲害、過小或未成熟的樣品。采集果樹樣品時(shí)，需在植株各部位(上、下、內(nèi)、外、向陽(yáng)和背陰面)采樣[6]，果實(shí)密集的部位相對(duì)多采，果實(shí)稀少的部位少采樣。同時(shí)避免在地頭或邊沿采樣(留0.5m邊緣)，按規(guī)定采集所有可食用部分，注意盡可能符合農(nóng)產(chǎn)品采收實(shí)際要求。樣品的采集和制備順序相同，按照對(duì)照小區(qū)、采收間隔期長(zhǎng)的小區(qū)、采收間隔短的順序完成，避免造成樣品污染，并戴一次性手套，每采集一個(gè)處理的樣品后，應(yīng)更換一次手套，防止樣品間污染。一旦在對(duì)照小區(qū)的作物中檢出目標(biāo)化合物，則本試驗(yàn)點(diǎn)的所有數(shù)據(jù)均不能使用。

對(duì)于樣品的保存，原始記錄需要體現(xiàn)存放地點(diǎn)，冰箱或冷庫(kù)的編號(hào)與溫度記錄，便于追溯樣品保存情況。

對(duì)于樣品的運(yùn)輸，消解動(dòng)態(tài)試驗(yàn)的樣品要在4h內(nèi)運(yùn)到實(shí)驗(yàn)室，超過4h樣品應(yīng)放在有冰袋的保溫桶內(nèi)運(yùn)送。發(fā)貨時(shí)，盡量采取冷鏈運(yùn)輸?shù)姆绞?如沒有冷鏈運(yùn)輸，盡量多放置冰塊)，并向委托方提供樣品清單、運(yùn)輸日期、快遞單號(hào)以及樣品接收回執(zhí)，樣品標(biāo)簽最好是防水的，避免運(yùn)輸過程中冰塊融化導(dǎo)致標(biāo)簽?zāi)：?，同時(shí)樣品標(biāo)簽要注明公司名稱、專題編號(hào)、供試品名稱、試驗(yàn)地點(diǎn)、作物和相應(yīng)的基質(zhì)、樣品類型、室內(nèi)編號(hào)、采收間隔期，室內(nèi)編號(hào)盡量按照主包方公司的方案執(zhí)行。

7.3 基質(zhì)的注意事項(xiàng) 需要測(cè)定鮮樣和干樣的作物[7]：黃花菜、茶、啤酒花、菊花、玫瑰花、葉類調(diào)味料(芫荽、薄荷、羅勒、紫蘇)、根莖類藥用作物(人參、三七、天麻、甘草、半夏、白術(shù)、麥冬)、花及果實(shí)類藥用作物(金銀花)、煙草。

需要測(cè)定多種基質(zhì)的作物[8]：玉米(鮮食玉米、青秸稈、玉米籽粒、秸稈)、大蒜(蒜苗、蒜薹、蒜頭)、大豆(青秸稈、青豆帶莢、秸稈、大豆籽粒)、蓮藕(蓮葉、蓮子、蓮藕)、香蕉(全果和果肉)、柑橘(全果和果肉)。

需要測(cè)定含水量的作物：玉米秸稈、小麥秸稈、水稻秸稈、櫻桃果肉、大豆秸稈、花生秸稈。

需要測(cè)定比重的作物：稻類(稻谷中糙米和稻殼)、水果類(測(cè)定果肉和籽粒，果肉和果核，如仁果類的山楂，核果類的桃、棗、油桃、杏、枇杷、李子、櫻桃，楊梅，小型果的荔枝、龍眼、黃皮、紅毛丹，中型果的芒果、鱷梨、石榴、番荔枝、西榴蓮、山竹，大型果椰子，帶刺果的菠蘿蜜、榴蓮)。

8 特殊事故和偏離現(xiàn)象

田間試驗(yàn)過程中，如遇到天氣和人為的影響，如暴雨、倒伏、試驗(yàn)材料被偷等特殊事故，要及時(shí)記錄，并和委托方溝通，討論是否重新開展試驗(yàn)。

如遇到同一個(gè)小區(qū)第2次施藥降雨，藥液翻倒等導(dǎo)致田間試驗(yàn)的偏離現(xiàn)象，要及時(shí)記錄偏離的原因、結(jié)果、補(bǔ)救措施等，并由懸浮種衣劑評(píng)估上述偏離現(xiàn)象對(duì)試驗(yàn)項(xiàng)目的影響和補(bǔ)救措施，保證試驗(yàn)的完整性和準(zhǔn)確性。

9 前景展望

隨著轉(zhuǎn)基因玉米和大豆的科研投入，其農(nóng)藥殘留試驗(yàn)需要提前布局，這就需要我們考慮是否有開展轉(zhuǎn)基因試驗(yàn)的單位資質(zhì)、農(nóng)業(yè)部門的報(bào)備審批、試驗(yàn)地塊的選擇要和大田作物有相對(duì)的隔離帶、殘留試驗(yàn)樣品的焚燒處理、樣品追蹤機(jī)制、是否配備有焚燒爐等設(shè)備，并保證轉(zhuǎn)基因玉米和大豆不能隨便流入市場(chǎng)。但是，目前很多農(nóng)藥殘留單位沒有轉(zhuǎn)基因玉米和大豆的資質(zhì)，這就勢(shì)必造成轉(zhuǎn)基因玉米和大豆的農(nóng)藥登記審批的延后。如果農(nóng)藥殘留單位和有資質(zhì)的轉(zhuǎn)基因玉米和大豆單位合作，勢(shì)必增加成本，比如土地租用、樣品處理、農(nóng)業(yè)部門的報(bào)備審批等。因此，筆者建議先在一些農(nóng)業(yè)院校開展轉(zhuǎn)基因玉米和大豆的農(nóng)藥登記，隨后在慢慢普及到各個(gè)公司，這樣有利于保證試驗(yàn)材料不會(huì)隨意流入市場(chǎng)，同時(shí)確保我國(guó)的轉(zhuǎn)基因玉米和大豆的農(nóng)藥登記不至于延后。