于泳

黑龍江省醫(yī)院泌尿外科，黑龍江哈爾濱 150001

間質(zhì)性膀胱炎（interstitial cystitis，IC），或者稱(chēng)之為膀胱痛綜合征（bladder pain syndrome，BPS）[1]，是一種以長(zhǎng)期盆腔或會(huì)陰部疼痛，并伴有各種膀胱過(guò)度活動(dòng)癥狀，如尿頻、尿急，夜尿次數(shù)增多為特點(diǎn)的慢性疾病[2-3]。目前已有研究中，葡萄糖氨基聚糖（glycosaminoglycan，GAG）層缺損理論受到學(xué)者們一致認(rèn)可，同時(shí)也被廣泛證實(shí)。GAG 中不僅包括硫酸軟骨素，還有硫酸肝素及透明質(zhì)酸的成分存在，而GAG 最主要的作用是對(duì)膀胱黏膜起到保護(hù)作用[4-6］。戊聚糖多硫酸鈉（pentosan polysulphate，PPS）是一種結(jié)構(gòu)與GAG 較為相似的肝素樣大分子，其可以通過(guò)對(duì)膀胱黏膜表面的GAG 起到一定補(bǔ)充作用[7]；透明質(zhì)酸為一種與GAG 較為類(lèi)似的物質(zhì)[8-9]。本研究選取2021年1—2月鼠齡6～8周的30只成年SD雌性大鼠為研究對(duì)象，選擇戊聚糖多硫酸鈉和透明質(zhì)酸對(duì)間質(zhì)性膀胱炎大鼠進(jìn)行聯(lián)合灌注干預(yù)。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

成年SD 雌性大鼠30 只，鼠齡6～8 周；體質(zhì)量200～250 g，平均225 g。隨機(jī)分為空白組6 只，鼠齡6～8 周；體質(zhì)量205～245 g，平均220 g。IC 組6 只，鼠齡6～8 周；體質(zhì)量200～245 g，平均215 g。干預(yù)IC1組6 只，鼠齡6～8 周；體質(zhì)量200～250 g，平均225 g。干預(yù)IC2 組6 只，鼠齡6～8 周；體質(zhì)量200～250 g，平均225 g。干預(yù)IC3 組6 只，鼠齡6～8 周；體質(zhì)量200～250 g，平均225 g。各組大鼠一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。具有可比性。

1.2 動(dòng)物模型建立

選取SD 雌性大鼠，地西泮注射液（H41024255，規(guī)格2ml:10mg），劑量0.3 mL/100 g 體質(zhì)量，腹腔注射，麻醉完全后，將大鼠仰臥位固定于實(shí)驗(yàn)臺(tái)[10]。乙醇消毒泌尿生殖區(qū)，PE-50 導(dǎo)管導(dǎo)尿，200 μl/min 膀胱注入試劑，避免注入過(guò)快造成膀胱輸尿管反流和試劑溢出，拔除導(dǎo)管。灌注時(shí)間達(dá)到后重新導(dǎo)尿，排空膀胱[11-13]。應(yīng)用硫酸魚(yú)精蛋白（protaminesulfate，PS）/脂多糖，用量為10 mg/mL，PS 1 mL，2 mg/mL 脂多糖1 mL，500 mmol/L 氯化鉀溶液1 mL，時(shí)間30～45 min。

1.3 方法

空白組：經(jīng)尿道膀胱灌注0.9%生理鹽水1 mL，保留40 min，排盡藥物后用磷酸緩沖液（PBS）沖洗3次,不做任何處理，連續(xù)1周[14]。

IC 組：經(jīng)尿道膀胱灌注10 mg/mL 硫酸魚(yú)精蛋白（5 mL；H11020246）1 mL，2 mg/mL 脂多糖1 mL，500 mmol/L 氯化鉀溶液1 mL，時(shí)間保留40 min，排盡藥物后用磷酸緩沖液（PBS）沖洗3 次，拔除尿管，不做特殊處理，連續(xù)1周[15]。

干預(yù)IC 組：C1 組（聯(lián)合用藥組）：在IC 組的基礎(chǔ)上，拔除尿管4 h后應(yīng)用透明質(zhì)酸0.5 mL，0.8 mg/mL，戊聚糖多硫酸鈉0.25 mg/kg，保留30 min[16]。

C2 組（透明質(zhì)酸組）：在IC 組的基礎(chǔ)上，拔除尿管4 h 后應(yīng)用透明質(zhì)酸0.5 mL，0.8 mg/mL，保留30 min。

C3 組（戊聚多硫酸鈉組）：在IC 組的基礎(chǔ)上，拔除尿管4 h 后應(yīng)用戊聚糖多硫酸鈉0.25 mg/kg，保留30 min。

1周后處死3組大鼠，取膀胱組織送病理。進(jìn)一步操作：①通過(guò)HE 染色觀察研究對(duì)象IC 動(dòng)物模型病理學(xué)特征；②甲苯胺藍(lán)染色檢測(cè)大鼠膀胱黏膜及黏膜下層MC 的數(shù)量，通過(guò)光鏡對(duì)MC 數(shù)進(jìn)行觀察并記錄。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 22.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)，符合正態(tài)分布的計(jì)量資料用（±s）表示，采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用[n(%)]表示，采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3組大鼠膀胱病理學(xué)改變

空白組大鼠膀胱黏膜及黏膜下層無(wú)破損，處于完好狀態(tài)，而其他各組均可以看到明顯的膀胱黏膜處損傷，且黏膜層有連續(xù)性的損傷，黏膜下層出現(xiàn)不同程度的脫落現(xiàn)象，膀胱壁組織出現(xiàn)較大面積的出血及充血情況，能夠明顯看出淋巴細(xì)胞及MC 的侵襲。

2.2 各組甲苯胺藍(lán)染色MC計(jì)數(shù)結(jié)果對(duì)比

空白組膀胱黏膜固有層、逼尿肌、漿膜層與IC組相比MC 數(shù)都顯著增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）?？瞻捉M和干預(yù)IC 組比較，兩組黏膜固有層、逼尿肌和漿膜層MC 數(shù)比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)表1。

表1 各組黏膜固有層、逼尿肌和漿膜層MC計(jì)數(shù)對(duì)比[(±s)，/HP]

表1 各組黏膜固有層、逼尿肌和漿膜層MC計(jì)數(shù)對(duì)比[(±s)，/HP]

組別空白組（n=6）IC組（n=6）干預(yù)IC組C1（n=6）C2（n=6）C3（n=6）黏膜固有層2.64±1.02 1.16±0.52 2.77±1.11 2.11±0.14 2.27±1.01逼尿肌0.99±0.63 0.33±0.18 1.18±0.59 0.68±0.17 0.43±0.51漿膜層2.36±0.97 0.06±0.05 1.62±0.84 1.27±1.01 1.02±0.44

2.3 各組大鼠膀胱中MC生長(zhǎng)情況對(duì)比

空白組膀胱黏膜處有較少M(fèi)C 存在，IC 組MC 有明顯增生出現(xiàn)，而通過(guò)不同方式干預(yù)的3 個(gè)干預(yù)組膀胱黏膜也發(fā)生較明顯的MC 增生情況，且明顯高于空白組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。各組大鼠膀胱肌層處可見(jiàn)少量MC，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)表2。

表2 各組大鼠膀胱MC表達(dá)對(duì)比

3 討論

間質(zhì)性膀胱炎病因復(fù)雜，機(jī)制不清，療效不佳，且發(fā)病率逐年升高，嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量[9]。許源城等[17]觀察沙培林(SapylinOK-432)膀胱灌注對(duì)環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)間質(zhì)性膀胱炎大鼠模型的治療作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)與對(duì)照組比較，治療組尿動(dòng)力學(xué)參數(shù)中排尿間隔[(307.60±835)s vs (20 140±9.33)s]和膀胱容量明顯改善[(115±0.12)mL vs (0.61±008)mL]，病理炎癥程度明顯下降，肥大細(xì)胞浸潤(rùn)數(shù)量明顯減少[(425±2.45)個(gè)vs(15.30±375)個(gè)]，膀胱組織勻漿炎癥因子濃度下降（P＜0.05）。可見(jiàn)沙培林膀胱灌注能有效改善間質(zhì)性膀胱炎大鼠的炎癥和尿頻尿急癥狀。本研究中空白組黏膜固有層(2.64±1.02)/HP、逼尿肌(0.99±0.63)/HP 和漿膜層肥大細(xì)胞數(shù)(2.36±0.97)/HP；IC 組黏膜固有層(1.16±0.52)/HP、逼尿肌(0.33±0.18)/HP 和漿膜層 肥 大 細(xì) 胞 數(shù)(0.06±0.05)/HP；C1 組 黏 膜 固 有 層(2.77±1.11)/HP、逼尿肌(1.18±0.59)/HP 和漿膜層肥大細(xì)胞數(shù)(1.62±0.84)/HP；C2 組黏膜固有層(2.11±0.14)/HP、逼尿肌(0.68±0.17)/HP 和漿膜層肥大細(xì)胞數(shù)(1.27±1.01)/HP；C3 組黏膜固有層(2.27±1.01)/HP、逼尿肌(0.43±0.51)/HP 和漿膜層肥大細(xì)胞數(shù)(1.02±0.44)/HP。張祥等[18]探索IC 大鼠膀胱組織中細(xì)胞間黏附分子-1 與膀胱炎癥反應(yīng)的關(guān)系及其作為IC 治療新靶點(diǎn)的價(jià)值所在。選擇雌性SD 大鼠分為對(duì)照組模型組和抗體治療組，腹腔注射環(huán)磷酰胺聯(lián)合膀胱灌注魚(yú)精蛋白和脂多糖構(gòu)建IC 的大鼠模型模型，鼠膀胱灌注抗ICAM1 抗體進(jìn)行治療為抗體組，比較各組大鼠膀胱組織的炎癥反應(yīng)程度、肥大細(xì)胞浸潤(rùn)數(shù)目及膀胱組織中P2X3PGE2EP2 受體腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α, TNF-α）和ICAM1 的表達(dá)水平。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，模型組大鼠膀胱組織炎癥程度、肥大細(xì)胞浸潤(rùn)數(shù)目及P2X3PGE2EP2 受體TNFa和ICAM1的表達(dá)水平均顯著高于對(duì)照組；當(dāng)1C模型大鼠給予抗體治療后，所有指標(biāo)較模型組均顯著顯下降且同對(duì)照組相近。ICAM-1 與膀胱組織炎癥程度和肥大細(xì)胞浸潤(rùn)數(shù)目均呈正性相關(guān)。謝偉杰等[19]觀察環(huán)孢素A（腫瘤壞死因子-α（cyclosporine A,CsA）在透明質(zhì)酸酶誘導(dǎo)的大鼠間質(zhì)性膀胱炎/膀胱疼痛綜合征（IC/BPS）中的治療作用，將45 只成年雌性Sprague-Dawley（SD）大鼠（200～250 g）分為對(duì)照組15 只（膀胱灌注生理鹽水）、模型組15 只（膀胱灌注透明質(zhì)酸酶）、CsA 治療組15 只（膀胱灌注透明質(zhì)酸酶+CsA）。采用長(zhǎng)期（1 個(gè)月）間歇灌注透明質(zhì)酸酶（4 g/L）構(gòu)建大鼠IC/BPS 模型，尿流動(dòng)力學(xué)檢測(cè)膀胱功能，VonFrey 刷檢測(cè)泌尿生殖區(qū)疼痛變化，硝酸還原酶法測(cè)定膀胱組織NO 的含量，逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（Inducible nitric oxide synthase, iNOS）、白介素-6（interleukin-6, IL-6）、白介素-10（interleukin-10, IL-10）及白介素-17（interleukin-17, IL-17）mRNA 表達(dá)，ELISA 法檢測(cè)膀胱組織IL-6、IL-10 及IL-17 含量。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組相比，模型組膀胱大鼠膀胱iNOS、IL-6、IL-10、IL-17 mRNA 表達(dá)均顯著升高（P＜0.05），在予以CsA 治療后，其mRNA 表達(dá)均顯著下調(diào)（P＜0.05）。模型組膀胱一氧化氮（Nitric oxide,NO）含量(9.73±2.62)μmol/g；IL-6含量(125.4±11.25)μg/g；IL-10含量(64.05±6.26)μg/g；IL-17 含量(90.61±10.49)μg/g；排 尿 時(shí) 間 間 隔(148.23±40.75)s；膀 胱 容 量(0.41±0.06)mL。對(duì)照組膀胱NO 含量(1.31±0.55)μmol/g；IL-6 含 量(55.18±5.07)μg/g；IL-10 含 量(32.12±3.82)μg/g；IL-17 含量(44.45±4.92)μg/g；排尿時(shí)間間隔(441.90±34.96)s；膀胱容量(1.27±0.10)mL。與對(duì)照組比較，模型組大鼠膀胱NO、IL-6、IL-10、IL-17 含量均明顯升高，排尿時(shí)間間隔縮短，膀胱容量降低，疼痛評(píng)分顯著增加（P＜0.05）。與模型組相比，CsA治療組大鼠的膀胱組織NO、IL-6、IL-10、IL-17含量均顯著減少（P＜0.05），分別為(3.97±1.71)μmol/g、(62.29±6.68)μg/g、(33.51±5.77)μg/g、(51.88±6.67)μg/g，排尿時(shí)間間隔及膀胱容量明顯增加（P＜0.05），分別為(422.06±42.22)s、(1.14±0.15)mL，疼痛評(píng)分也明顯下調(diào)（P＜0.05）。

本研究?jī)?nèi)容是兩種黏膜保護(hù)劑聯(lián)用是否能有效降低間質(zhì)性膀胱炎的炎癥反應(yīng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，空白組無(wú)論是膀胱黏膜還是黏膜下層都無(wú)破損，IC組及IC 干預(yù)組膀胱黏膜均可以看出明顯損壞，且黏膜層存在連續(xù)性破損伴黏膜下層脫落的情況，組內(nèi)大鼠可以明顯看出膀胱壁組織存在大面積的出血、充血情況。空白組無(wú)論是膀胱黏膜固有層還是逼尿肌、漿膜層與IC 組相比MC 數(shù)都顯著增加（P＜0.05）?？瞻捉M和干預(yù)1 組比較，兩組黏膜固有層、逼尿肌和漿膜層MC 數(shù)對(duì)比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。通過(guò)對(duì)各組MC 的研究發(fā)現(xiàn)，空白組膀胱黏膜處有較少M(fèi)C 存在，IC 組MC 有明顯增生，通過(guò)不同方式干預(yù)3 個(gè)干預(yù)組膀胱黏膜發(fā)生較明顯的MC 增生，且明顯高于空白組（P＜0.05）。各組大鼠膀胱肌層處可見(jiàn)少量MC，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

綜上所述，間質(zhì)性膀胱炎通過(guò)膀胱灌注兩種黏膜保護(hù)劑PPS及透明質(zhì)酸聯(lián)用替代葡萄糖氨基聚糖層，借助MC 與間質(zhì)性膀胱炎的炎癥反應(yīng)有密切關(guān)系。GAG 替代的黏膜保護(hù)劑能降低患者炎癥反應(yīng)，減少患者膀胱黏膜及黏膜下層的MC。