榮杰峰，張志勇，張松艷，鐘堅海，翁城武*，樂有東，佘紫文

（1.泉州海關綜合技術服務中心，福建 泉州 362000；2.廈門海關技術中心，福建 廈門 361000）

砜吡草唑是日本組合化學公司開發(fā)的新型廣譜、高活性的苗前土壤處理除草劑［1］，屬于異唑類除草劑，是植物體內超長鏈脂肪酸生物合成的潛在抑制劑［2-3］。砜吡草唑的應用作物較為廣泛，可安全地用于玉米、棉花、花生、小麥、向日葵、高粱等作物；可有效防除狗尾草屬、馬唐屬、稗屬等禾本科雜草以及莧屬、曼陀羅屬、茄屬、苘麻屬等闊葉雜草［4-5］。砜吡草唑在澳大利亞等國家被認為是防除硬直黑麥草等抗藥性雜草的最佳藥劑［6］。砜吡草唑具有殺草譜廣、用量低、活性高、安全性好等優(yōu)點，受到越來越廣泛的關注，近年來在澳大利亞、美國、加拿大等國家登記在小麥、玉米、大豆、棉花等作物田封閉除草。其中澳大利亞制定了家禽肉、家禽可食用下水、肉（哺乳動物）、可食用下水（哺乳動物）、乳和蛋等動物源性食品中的殘留限量值，以及玉米、谷類、豆類種子、大豆（干）和葵花籽等植物源性食品中的殘留限量，限量值低至0.002 mg/kg。

國內外針對砜吡草唑的研究主要集中在除草活性、環(huán)境行為和安全性評價等方面，對于砜吡草唑的殘留分析方法報道較少。吳文鑄等［7］采用高效液相色譜建立了土壤與水中砜吡草唑殘留的檢測方法，對于砜吡草唑在動物源性食品中的分析方法尚未見報道。因此，開發(fā)動物源性食品中砜吡草唑殘留的檢測方法，可彌補我國在動物源性食品中該項目無檢測方法的空白；對評估和管理該化合物對人類健康和環(huán)境安全的影響，防止貿易輸入輸出風險具有重要作用。近年來，相較于常規(guī)的氣相色譜-單四極桿質譜聯(lián)用儀，氣相色譜-三重四極桿質譜聯(lián)用儀因抗干擾能力強和靈敏度高等優(yōu)點而廣泛應用于蔬菜水果、糧谷、動物源性食品、藥材、土壤中農藥、獸藥、環(huán)境污染物等的檢測［8-13］。鑒于此，本研究通過對前處理條件、色譜條件、質譜條件進行優(yōu)化，并對基質效應進行考察，建立了砜吡草唑的氣相色譜-三重四極桿質譜檢測方法，以期為動物源性產品中砜吡草唑殘留檢測提供技術保障。

1 實驗部分

1.1 試劑與儀器

無水硫酸鎂（MgSO4）、氯化鈉（分析純，國藥集團化學試劑有限公司）；乙腈、正己烷、丙酮、乙酸乙酯（色譜純，美國Tedia公司）。乙二胺-N-丙基硅烷化硅膠（PSA，40 ～60μm）和十八烷基鍵合硅膠（C18，40 ～60μm）購于上海安譜實驗科技股份有限公司。有機相微孔濾膜：0.22μm；陶瓷均質子：2 cm（長）×1 cm（外徑）。砜吡草唑（C12H14F5N3O4S，100μg/mL，Bepure公司）。

Agilent 7890A-7000B 型氣相色譜-三重四極桿質譜聯(lián)用儀（美國安捷倫科技有限公司），配備電子轟擊源（EI）；GM200刀式研磨儀（德國萊馳）；渦旋振蕩器（美國Talboys公司）。

1.2 標準溶液配制

吸取適量的100 mg/L 標準儲備液，用丙酮稀釋成1 mg/L 的標準中間液；吸取適量的1 mg/L 標準中間液，用丙酮稀釋成質量濃度分別為0.5、2、10、50、100μg/L 的標準工作溶液，現(xiàn)配現(xiàn)用，所有標準溶液均于-（18±2）℃下保存。

1.3 樣品前處理

豬肉、豬肝、雞肉和雞肝樣品切成小塊，用刀式研磨儀5000 r/min 粉碎至漿狀，雞蛋取10枚去殼后攪拌混勻，牛奶樣品取約200 g攪拌混勻。稱取5 g（精確至0.01 g）制備好的試樣于50 mL聚丙烯離心管中，加入2 g氯化鈉、10 mL乙腈及1顆陶瓷均質子，渦旋振蕩提取5 min，4000 r/min離心3 min。吸取1.5 mL 上清液于2 mL 聚丙烯離心管中，加入50 mg PSA、50 mg C18和50 mg MgSO4。渦旋混合1 min，12000 r/min離心3 min，吸取1 mL上清液于60 ℃氮吹至干（氮吹過程應迅速且避光操作），加入1 mL丙酮復溶后過0.22μm有機濾膜，待測定。

1.4 儀器條件

DB-17MS 毛細管色譜柱（30 m×0.25 mm×0.25μm）；柱箱升溫程序：70 ℃保持0 min，以20 ℃/min升至230 ℃，保持0 min；以30 ℃/min升至310 ℃，保持1 min；載氣：氦氣，純度≥99.999%，恒流模式，流量為1.0 mL/min；進樣口溫度：280 ℃；進樣量：1μL；進樣方式：不分流進樣；電子轟擊源：70 eV；離子源溫度：230 ℃；傳輸線溫度：280 ℃；溶劑延遲：3 min；多反應監(jiān)測（MRM）模式。定量離子對為m/z228.6/179.1，碰撞能量為15 eV；定性離子對為m/z178.6/159.0，碰撞能量為15 eV。

2 結果與討論

2.1 儀器條件的優(yōu)化

2.1.1 儀器的選擇實驗分別采用液相色譜-三重四極桿質譜聯(lián)用儀和氣相色譜-三重四極桿質譜聯(lián)用儀對動物源性食品中的砜吡草唑殘留進行檢測。結果表明，使用液相色譜-三重四極桿質譜聯(lián)用儀進行檢測時，砜吡草唑的峰形一般，響應較差，靈敏度無法滿足相關法規(guī)要求；而砜吡草唑在氣相色譜-三重四極桿質譜聯(lián)用儀上的峰形良好，方法靈敏度高。最終確定使用氣相色譜-三重四極桿質譜聯(lián)用儀進行測定。

2.1.2 質譜條件的優(yōu)化選擇5 mg/L的砜吡草唑標準溶液進行一級質譜全掃描，發(fā)現(xiàn)分子離子峰的響應較低，因此選擇響應較高的離子m/z228.6和178.6作為母離子；再對相應母離子進行產物離子掃描，選擇信號最好的兩組分別作為MRM 定量和定性離子對。0.01 mg/L 砜吡草唑標準溶液的提取離子色譜圖見圖1。

圖1 砜吡草唑（0.01 mg/L）標準溶液的提取離子色譜圖Fig.1 Extraction ion chromatogram of pyroxasulfone（0.01 mg/L）standard solution

2.2 前處理方法的優(yōu)化

2.2.1 提取溶劑的選擇對于動物源性試樣，蛋白質和脂肪等雜質是主要干擾物質，大多數(shù)的前處理過程需加入蛋白質沉淀劑去除部分蛋白質，通常使用乙腈或酸性乙腈作為提取劑以達到沉淀蛋白和消除乳濁液的效果。因本實驗以氣相色譜-三重四極桿質譜聯(lián)用儀作為檢測設備，使用乙腈為提取溶劑時需將乙腈氮吹至干用正己烷等溶劑復溶后再上機檢測。實驗對比了丙酮、乙酸乙酯、正己烷、乙腈和0.1%甲酸乙腈作為提取溶劑時的提取效果。對于丙酮、乙酸乙酯和正己烷溶劑，按照“1.3”方法處理后上機測定，不進行氮吹復溶操作；對于乙腈和0.1%甲酸乙腈，將添加0.01 mg/kg 砜吡草唑的豬肉、豬肝、雞肉、雞肝、牛奶和雞蛋樣品按照“1.3”方法處理后上機測定；每個實驗平行測定3次，采用溶劑標準曲線進行校準定量。由圖2可知，以正己烷為提取溶劑時，砜吡草唑在各種基質中的提取回收率均較低；以乙酸乙酯為提取溶劑時，砜吡草唑在雞蛋中的回收率低，在其他基質中的回收率均較高，但基質效應明顯；以丙酮為提取溶劑時，在所有基質中的提取回收率均較高，但基質效應明顯；而使用乙腈和0.1%甲酸乙腈提取時的回收率均較好，提取效率高。為便于操作，最終選擇乙腈作為提取溶劑。

圖2 不同提取溶劑對6種基質中砜吡草唑回收率的影響Fig.2 Effects of different extraction solvents on recoveries of pyroxasulfone in six matrices

2.2.2 凈化試劑的選擇動物源性食品中常用的QuEChERS凈化試劑有C18、PSA和NH2等，其中PSA和NH2的作用機理相似，均具有弱陰離子交換能力，通過氫鍵與化合物產生作用，可有效去除樣品中的有機酸、極性色素、脂肪酸、糖類以及其他能形成氫鍵的成分；C18去除揮發(fā)油、萜類、脂類等非極性化合物；無水硫酸鎂可去除樣液中的水分。實驗考察了PSA、C18和MgSO43 種凈化試劑對0.05 mg/L砜吡草唑標準溶液進行吸附后的回收率。結果表明，PSA、C18、MgSO4對砜吡草唑的平均吸附回收率均在95%～105%之間，最終選擇PSA、C18、MgSO4作為凈化試劑。

2.2.3 凈化試劑組合用量的確定動物源性樣品使用分散固相萃取進行凈化時通常采用兩種或多種凈化試劑，以較好地除去樣品中的脂類和糖類等干擾雜質。實驗考察了3 組凈化試劑（Ⅰ：20 mg PSA + 20 mg C18+ 50 mg MgSO4，Ⅱ：50 mg PSA + 50 mg C18+ 50 mg MgSO4，Ⅲ：100 mg PSA + 100 mg C18+50 mg MgSO4）對豬肉、豬肝、雞肉、雞肝、牛奶和雞蛋空白樣品加標提取液（0.02 mg/kg）的凈化效果，如圖3所示。結果表明，3組凈化試劑的回收率均在90%～110%之間，可滿足實驗要求；從實際凈化效果看，隨著PSA和C18用量的增加，砜吡草唑色譜圖的雜質峰減少，基線更平穩(wěn)。綜合考慮，實驗選擇凈化試劑組合為50 mg PSA+50 mg C18+50 mg MgSO4。

圖3 不同凈化試劑用量對6種基質中砜吡草唑回收率的影響Fig.3 Effects of different purification reagent dosages on recoveries of pyroxasulfone in six matricesⅠ：20 mg PSA+20 mg C18+50 mg MgSO4，Ⅱ：50 mg PSA+50 mg C18+50 mg MgSO4，Ⅲ：100 mg PSA+100 mg C18+50 mg MgSO4

2.3 基質效應的影響

基質效應（Matrix effects，ME）在氣相色譜系統(tǒng)中主要表現(xiàn)為基質增強效應［14］。實驗按照“1.3”前處理方法制備空白基質溶液（不進行凈化），按照“1.2”方法配制標準工作溶液和基質標準工作溶液上機測定。按照下式計算基質效應：ME=［（基質匹配校準曲線斜率/純溶劑標準曲線斜率）-1］×100%，豬肉、豬肝、雞肉、雞肝、牛奶和雞蛋中砜吡草唑凈化前的基質效應為1%～10%，均小于20%，表明砜吡草唑在上述6種基質中均表現(xiàn)為弱基質效應，無需補償基質效應［15］。

2.4 方法學評價

2.4.1 線性關系與定量下限按照“1.2”方法配制質量濃度分別為0.5、2、10、50、100μg/L 的砜吡草唑系列標準工作溶液，按“1.4”儀器條件進樣檢測，以砜吡草唑的質量濃度（X，μg/L）為橫坐標，以其峰面積為縱坐標（Y）繪制標準工作曲線。結果表明，砜吡草唑在0.5 ～100μg/L 范圍內線性關系良好，線性方程為Y=3124.13X-1470.73，相關系數(shù)（r）為0.9995。在空白樣品溶液中添加適量標準溶液后上機測定，以10 倍信噪比（S/N= 10）確定砜吡草唑的定量下限（LOQ）為0.001 mg/kg。

2.4.2 回收率與相對標準偏差分別對豬肉、豬肝、雞肉、雞肝、牛奶和雞蛋空白樣品進行0.001、0.002、0.02、0.1 mg/kg 4個水平的加標回收實驗，每個加標濃度測定6次平行，回收率和相對標準偏差（RSD，n= 6）見表1。砜吡草唑在4 個加標水平下的平均回收率為85.8% ～106%，RSD 為3.1% ～6.8%，表明本方法具有較好的準確度和精密度。

表1 砜吡草唑在不同樣品中的平均回收率和相對標準偏差（n=6）Table 1 Average recoveries and relative standard deviations（RSDs）for pyroxasulfone spiked in different sample matrices（n=6）

2.5 實際樣品檢測

采用本方法對實驗室日常檢測樣品豬肉、豬肝、雞肉、雞肝、牛奶、雞蛋各5個，牛肉和羊肉各10個進行檢測，結果在1個牛肉樣品和1個羊肉樣品中檢出砜吡草唑，含量分別為0.0012、0.0015 mg/kg，說明砜吡草唑在動物源性食品中存在累積殘留的風險。

3 結論

本文建立了氣相色譜-三重四極桿質譜測定動物源性食品中砜吡草唑的檢測方法，在優(yōu)化實驗條件下，目標化合物在0.5 ～100 μg/L 范圍內線性關系良好，相關系數(shù)為0.9995，方法定量下限為0.001 mg/kg。空白樣品在低、中、高4個加標水平下的平均回收率為85.8%～106%，RSD為3.1%～6.8%。該方法靈敏度高、操作簡單、快速、準確、成本低，能滿足動物源性食品中砜吡草唑殘留的檢測需求。