黃春躍，馬夢(mèng)潔，牛莉鑫，靳建杰，吳 蔓，田 蓓，胡 曉,

（1.中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)研究總院，上海 201203；2.上海醫(yī)藥工業(yè)研究院有限公司，創(chuàng)新藥物與制藥工藝國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，上海 201203；3.貴州創(chuàng)興農(nóng)業(yè)發(fā)展有限責(zé)任公司，貴州銅仁 554300）

糖尿?。╠iabetes mellitus，DM）是以多種病因引起的以慢性高血糖為特征的代謝紊亂性疾病，分為1 和2 型糖尿病。其中2 型糖尿?。╰ype two diabetes mellitus，T2DM）是糖尿病的主要類型，占糖尿病發(fā)病率的90%～95%[1]。受不健康的飲食結(jié)構(gòu)和生活方式等因素的影響，全球糖尿病的發(fā)病率不斷攀升，預(yù)計(jì)2030 年達(dá)到5.78 億例，2050 年達(dá)到7 億例[2]，已經(jīng)成為繼心血管疾病和癌癥之后，威脅人們生命的第三大殺手[3]。

α-葡萄糖苷酶抑制劑能抑制人類小腸粘膜刷狀緣上的α-葡萄糖苷酶對(duì)碳水化合物的轉(zhuǎn)化，從而降低餐后血糖，是治療2 型糖尿病的重要靶點(diǎn)之一[4]。目前臨床上用于治療2 型糖尿病的α-葡萄糖苷酶抑制劑主要包括阿卡波糖、伏格列波糖、米格列醇三種[5]，但是這些藥物也會(huì)引起患者諸如腹瀉、腹痛、腸胃脹氣等不良反應(yīng)[6]。天然來(lái)源的α-葡萄糖苷酶抑制劑一直是近年來(lái)研究的熱點(diǎn)，國(guó)內(nèi)外學(xué)者已經(jīng)從天然植物中提取到多種能夠抑制α-葡萄糖苷酶活性的化合物，如多酚[7-9]、多糖[10-12]、黃酮[13-15]、生物堿和萜類[16]等。同時(shí)研究人員發(fā)現(xiàn)黑醋栗、藍(lán)莓、藍(lán)果忍冬、桑椹等小型漿果對(duì)α-葡萄糖苷酶抑制活性顯著[17-18]，是天然的α-葡萄糖苷酶抑制的良好來(lái)源。

紅果參為桔梗科金錢(qián)豹屬植物長(zhǎng)葉輪鐘草Campnumoea lancifolia（Roxb.）Merr.的根，其性平、味甘、微苦，具補(bǔ)虛益氣、祛痰止痛功效，主要用于勞倦氣虛乏力，跌打損傷和腸絞痛[19]。長(zhǎng)葉輪鐘草的果實(shí)即紅果參果為小型漿果，普遍作為水果使用，具有滋補(bǔ)，保健等功效[20]。少量研究文獻(xiàn)報(bào)道顯示紅果參果富含黃酮類、多糖類以及酚酸類等化學(xué)成分[21]，具有清除羥基自由基、超氧陰離子自由基和DPPH 等自由基的作用，有較好的體外抗氧化作用[22-25]。

目前紅果參從野生到規(guī)范化種植，并在我國(guó)西南地區(qū)作為經(jīng)濟(jì)水果規(guī)模種植，帶動(dòng)了當(dāng)?shù)氐姆鲐毊a(chǎn)業(yè)和經(jīng)濟(jì)發(fā)展。但對(duì)紅果參果化學(xué)成分和生物活性研究相對(duì)薄弱，制約了其開(kāi)發(fā)和利用，而關(guān)于紅果參果的α-糖苷酶抑制活性和潛在抗糖尿病作用未見(jiàn)報(bào)道。本研究以人工規(guī)模栽培的紅果參果為研究對(duì)象，制備兩種提取物，并對(duì)其多糖、總黃酮、總花色苷、總多酚等大類成分含量進(jìn)行測(cè)定。通過(guò)UPLC-QTOFMS 技術(shù)對(duì)其化學(xué)成分表征和結(jié)構(gòu)鑒定，并對(duì)紅果參果提取物樣品以及其代表性成分的α-葡萄糖苷酶抑制活性考察。旨在對(duì)紅果參果資源的開(kāi)發(fā)利用提供更多的科學(xué)實(shí)驗(yàn)依據(jù)和數(shù)據(jù)支撐，為天然來(lái)源的α-糖苷酶抑制劑的發(fā)現(xiàn)提供更多選擇。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

5 批紅果參鮮果（批號(hào)1-A-7，2-A-9，3-B-11，4-A-12 和5-B-5）采摘時(shí)間2021 年3 月8 日，貴州創(chuàng)興農(nóng)業(yè)發(fā)展有限責(zé)任公司；矢車菊素-3-O-葡萄糖苷 批號(hào)ST04290120MG，純度≥98.0%，上海詩(shī)丹德技術(shù)有限公司；對(duì)硝基苯-α-D-葡萄糖苷（p-nitrophenyl-α-D-glucopyran oside，pNPG）批號(hào)C12462390，純度99%，上海麥克林生化科技有限公司；α-葡萄糖苷酶 批號(hào)SLBT8587，酶活力18.5 U/mg（G5003-100UN），美國(guó)Sigma 公司；阿卡波糖水合物 批號(hào)G1718046，純度≥98%，阿拉丁試劑（上海）有限公司；黨參炔苷、木犀草素-7-O-葡萄糖苷、蘆丁、木犀草素、芹菜素 實(shí)驗(yàn)室自制對(duì)照品；乙腈 質(zhì)譜級(jí)；其他試劑 均為分析純。

ZG TP101 電子分析天平 松竫精密天平；PHS-3C pH 計(jì) 上海精密科學(xué)儀器有限公司；UV-2600紫外-可見(jiàn)分光光度儀 SHIMADZU；HWS-24 電熱恒溫水浴鍋 上海齊欣科學(xué)儀器有限公司；BUCHI Lyovapor? L-200 冷凍干燥機(jī) 瑞士步琦有限公司；梅特勒MS105DU 電子天平 梅特勒·托利多公司；KQ-250DE 型數(shù)控超聲波清洗器 昆山市超聲儀器有限公司；Waters ACQUITY UPLC I-Class 串聯(lián)Xevo G2-XS QTOF 質(zhì)譜儀 美國(guó)沃特世公司；Sigma 1-14k 離心機(jī) 美國(guó)Sigma 公司；EPOCH 酶標(biāo)儀 美國(guó)Bio-Teck 公司；Minipore 純化水系統(tǒng) 德國(guó)Merck 公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 紅果參果乙醇提取物的制備 參考宛美志等[26]的方法稍作修改。稱取5 批等質(zhì)量的紅果參鮮果（約100 g）于燒杯中，用料理機(jī)勻漿，按照料液比1:10（g/mL）加入含0.1%鹽酸的65%乙醇水溶液，保鮮膜封口，水浴溫度40 ℃，提取120 min，過(guò)濾，濾液轉(zhuǎn)入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮除去乙醇，濃縮液冷凍干燥得紅果參果乙醇提取物，分別記為批號(hào)1-A-7、2-A-9、3-B-12、4-A-12 和5-B-5，密封，避光貯存在-80 ℃冰箱中，備用。

1.2.2 紅果參果粗多糖的制備 參考陳莉華等[22]的方法稍作修改。稱取5 批等質(zhì)量的紅果參鮮果（約100 g）于燒杯中，用料理機(jī)粉粹勻漿，按照料液比1:20（g/mL）加入去離子水，保鮮膜封口，熱水超聲（功率250 W，頻率40 kHz，80 ℃）提取三次，每次45 min，提取液過(guò)濾，合并濃縮至一定體積，加入四倍量無(wú)水乙醇，過(guò)夜，離心（轉(zhuǎn)速5000 r/min）15 min，冷凍干燥得紅果參果粗多糖。

1.2.3 紅果參果粗多糖含量測(cè)定 以硫酸-苯酚法顯色[23]，紫外可見(jiàn)分光光度法測(cè)定紅果參粗多糖多糖含量。

稱取干燥至恒重的葡萄糖，配制成100 μg·mL-1標(biāo)準(zhǔn)使用液。分別移取0、0.1、0.2、0.4、0.8、1.0 mL標(biāo)準(zhǔn)使用液置于10 mL 刻度管中，補(bǔ)充蒸餾水至1.0 mL。分別加入苯酚試劑1.0 mL，搖勻，于冷水浴中緩緩加入3.0 mL 硫酸，立刻搖勻。靜置5 min 后，置于沸水浴加熱15 min，取出后立即以流水冷卻至室溫。以相應(yīng)試劑為空白，在λ=488 nm 處以紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)測(cè)定吸光度，以吸光度（A）為縱坐標(biāo)，葡萄糖溶液濃度（μg/mL）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線y=47.6125x-0.0818（R2=0.9925）。

取1.2.2 項(xiàng)下的紅果參果粗多糖約10 mg，精密稱定，置10 mL 容量瓶中，加水至刻度線，搖勻。精密量取0.1 mL，照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項(xiàng)下的方法，自“補(bǔ)充蒸餾水至1.0 mL”起，依法測(cè)定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中無(wú)水葡萄糖的濃度，計(jì)算出紅果參果粗多糖中多糖含量。

1.2.4 紅果參果乙醇提取物黃酮含量測(cè)定 總黃酮的測(cè)定采用硝酸鋁-亞硝酸鈉法[27]測(cè)定。

精密稱取蘆丁對(duì)照品10 mg，置10 mL 量瓶中，用70%乙醇溶解后并稀釋定容，搖勻，即得1 mg/mL的蘆丁對(duì)照品溶液。精密量取對(duì)照品溶液0.2、0.4、0.8、1.0、1.6、2.0 mL，分別置25 mL 量瓶中，各加50%乙醇溶液補(bǔ)足至6 mL，再分別加入5%亞硝酸鈉溶液1 mL，搖勻，放置6 min；加10%硝酸鋁溶液1 mL，搖勻，放置6 min；加4%氫氧化鈉溶液10 mL后再加水稀釋至刻度，搖勻，放置15 min。以相應(yīng)的試劑為空白對(duì)照，照紫外-可見(jiàn)分光光度法（通則0401），在510 nm 的波長(zhǎng)處下測(cè)定吸光度。以吸光度（A）為縱坐標(biāo)，蘆丁溶液濃度C（mg/mL）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=12.0350x-0.0136（R2=0.9996）。

取紅果參果乙醇提取物0.2 g，精密稱定，置50 mL具塞錐形瓶中，精密加入50%乙醇20 mL，密塞，稱定重量，超聲處理（功率250 W，頻率40 Hz）15 min，放冷，再稱定重量，用50%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)。精密量取濾液3 mL，置25 mL 容量瓶中，再加入50%乙醇溶液3 mL 照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項(xiàng)下的方法，自“加入5%亞硝酸鈉溶液1 mL”起，依法測(cè)定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線中讀出供試品溶液中蘆丁濃度，再換算成提取液中總黃酮的質(zhì)量，計(jì)算紅果參果乙醇提取物中總黃酮含量。

1.2.5 紅果參果乙醇提取物總花色苷含量測(cè)定 采用pH 示差法，參考文獻(xiàn)[28-31]的方法。取紅果參果提取物約50 mg，精密稱定，置于10 mL 量瓶中，用0.1%鹽酸甲醇溶液溶解并定容，作為供試品溶液。

取供試品溶液兩份各1 mL，分別用pH1.0 的氯化鉀緩沖溶液和pH4.5 的乙酸鈉緩沖溶液稀釋至10 mL，混勻后于室溫條件下靜置反應(yīng)30 min，分別在波長(zhǎng)520 和700 nm 處，用1 cm 比色皿測(cè)定吸光度，重復(fù)操作3 次，取平均值。按照下列公式計(jì)算總花色苷的含量：

式中：ΔA 為緩沖液稀釋后的吸光度；V 為花色苷供試品溶液體積，mL；n 為稀釋倍數(shù)；M 為矢車菊素-3-葡萄糖苷摩爾質(zhì)量，449.2 g/mol；ξ為矢車菊-3-葡萄糖苷消光系數(shù)，26900 L/（mol·cm）；m 為稱取樣品質(zhì)量，g；b 為比色皿厚度，cm。

1.2.6 紅果參果乙醇提取物總多酚含量測(cè)定 參照譚曉舒等[32]的方法并做適當(dāng)修改。

標(biāo)準(zhǔn)曲線制作：精密稱取沒(méi)食子酸10 mg，用乙醇溶解后用蒸餾水定容至10 mL，配制成1 mg/mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。準(zhǔn)確移取沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7 和0.8 mL，用乙醇溶液稀釋成質(zhì)量濃度為10、20、30、40、50、60、70、80 μg/mL的溶液。吸取對(duì)照品溶液各0.5 mL 于10 mL 比色管中，先后加入2.5 mL 稀釋10 倍的福林酚試劑（0.1 mol/L）、2.0 mL 7.5%的碳酸鈉溶液，充分混勻，黑暗處反應(yīng)1 h，用紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)在765 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度值，吸光值（A）為縱坐標(biāo)，以沒(méi)食子酸濃度（mg/mL）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=0.0055x-0.1363（R2=0.9996）。同樣吸取樣品溶液0.5 mL，依法測(cè)定，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算供試品溶液中的總酚含量，結(jié)果表示為沒(méi)食子酸（gallic acid equivalents，GAE）當(dāng)量濃度即μg（GAE）/mL，進(jìn)一步計(jì)算出樣品中的多酚含量。

1.2.7 紅果參果乙醇提取物的化學(xué)成分鑒定 通過(guò)實(shí)驗(yàn)室前期的質(zhì)譜色譜條件優(yōu)化，采用UPLC-QTOFMS 技術(shù)對(duì)紅果參果乙醇提取物進(jìn)行化學(xué)成分分析。

供試品溶液制備：取紅果參果乙醇提取物適量，精密稱定，置入25 mL 具塞錐形瓶中，精密加入含1%甲酸的甲醇溶液10 mL，密塞，稱重，超聲處理（功率250 W，頻率40 Hz）30 min，放冷，再稱定重量，用相應(yīng)溶劑補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)。

對(duì)照品溶液配制：取黨參炔苷、木犀草苷、蘆丁、木犀草素和芹菜素的對(duì)照品適量，用甲醇配制成混合標(biāo)準(zhǔn)備品溶液，備用。

UPLC 條件：Waters ACQUITY I-class 超高效液相色譜儀；Waters ACQUITY UPLC HSS T3 色譜柱（2.1 mm×100 mm，1.8 μm）；流動(dòng)相系統(tǒng)：0.1%甲酸水（A）:乙腈（B）；流速：0.30 mL/min；洗脫程序：0～1 min，98% A；1～15 min，98%～80% A；15～20 min，80%～69% A；20～28 min，69%～58% A；28～35 min，58%～20% A；35～38 min，20% A；38～41 min，20%～0 A；柱溫：35 ℃；進(jìn)樣量：1.0 μL。

MS 條件：Waters Xevo G2-XS QTOF 質(zhì)譜儀，離子源為電噴霧離子源（Electrospray ionization，ESI）；正、負(fù)離子掃描模式，飛行時(shí)間質(zhì)量分析器；源電壓：2.5 kV（-），3.0 kv（+）；碰撞氣體為氮?dú)?，N2流速：800 L/h；毛細(xì)管溫度400 ℃；錐孔氣體流速：100 L/h；氣源溫度：120 ℃；采用全掃描方式，質(zhì)量掃描范圍50～1500 Da；碰撞誘導(dǎo)解離電壓：6 V（低能量）、30～60 V（高能量）

1.2.8α-葡萄糖苷酶活性測(cè)定α-葡萄糖苷酶活性參考文獻(xiàn)[33-34]方法測(cè)定略作改動(dòng)。在96 孔板中加入各樣品溶液10 μL 和0.2 U/mL 的α-葡萄糖苷酶溶液60 μL，于37 ℃搖床中孵育10 min，再加入2.0 mmo/L 的pNPG 溶液80 μL，繼續(xù)37 ℃搖床中孵育20 min 后立即用0.2 mol/L 的Na2CO3溶液50 μL 終止反應(yīng)，于405 nm 波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度值A(chǔ)，每個(gè)樣品平行測(cè)定3 次。以阿卡波糖為陽(yáng)性對(duì)照，按照抑制率（%）=[1-（A 樣品組-A 樣品空白組）/（A 陰性組-A 空白組）]×100，計(jì)算抑制率，并用SPSS18.0 軟件求出相應(yīng)的IC50值。樣品溶液包括紅果參果乙醇提取物樣品溶液、紅果參果粗多糖樣品溶液、木犀草素、矢車菊素-3-O-蕓香糖苷和黨參炔苷溶液。

1.3 數(shù)據(jù)處理

所有實(shí)驗(yàn)均重復(fù)操作3 次，采用Excel 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行整理繪圖，采用SPSS18.0 計(jì)算IC50。

2 結(jié)果與分析

2.1 紅果參果樣品含量測(cè)定結(jié)果

多糖、黃酮、多酚和花色苷是植物果實(shí)的重要大類成分，因此本研究考察了紅果參果提取物中各大類成分的含量。5 批粗多糖多糖的含量分別為27.59%±1.89%、33.20%±2.62%、34.62%±2.06%、37.59%±2.34%和33.47%±2.51%，含量范圍在27.59%～37.59%，其中4-A-12 批次多糖含量最高，為37.59%；1-A-7 批次多糖含量較低，為27.59%，與其他4 批樣品存在顯著性差異（P＜0.05），紅果參果乙醇提取物的測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 紅果參果乙醇提取物的總黃酮、總花色苷及總多酚含量（，n=3）Table 1 Contents of total flavonoids,total anthocyanins and total phenols in ethanol extracts of HGSG (,n=3)

表1 紅果參果乙醇提取物的總黃酮、總花色苷及總多酚含量（，n=3）Table 1 Contents of total flavonoids,total anthocyanins and total phenols in ethanol extracts of HGSG (,n=3)

注：同列不同小寫(xiě)字母表示差異顯著（P＜0.05）。

由表1 可見(jiàn)，不同批次紅果參提取樣品的總黃酮、總花色苷和總多酚含量存在一定的差異。5 批紅果參果提取物的總黃酮含量為1.22%～1.77%，其中5-B-5 批次黃酮含量較低，1.22%，4-A-12 批次黃酮含量最高，為1.77%；總花色苷含量為0.90%～1.14%，5-B-5 花色苷含量最低為0.90%，4-A-12 批次花色苷含量最高，為1.14%；總多酚含量在13.11～18.85 gGAE/100 g 之間，其中2-A-9 總多酚含量最低為13.11 gGAE/100 g，4-A-12 批次總多酚含量最高，為18.85 gGAE/100 g。5 批紅果參果提取物中4-A-12 批次的多糖、總黃酮、總花色苷和總多酚含量均最高，其中多酚比桑葚、藍(lán)莓及黑加侖等漿果更高，黃酮含量相當(dāng)[35]；2-A-9 批次提取物與其他批次的提取物相比含量差異相對(duì)較小，因此，后續(xù)選擇來(lái)源于2-A-9 的粗多糖和乙醇提取物做后續(xù)的研究。

2.2 紅果參果乙醇提取物的化學(xué)成分結(jié)構(gòu)鑒定分析

采用Waters ACQUITY UPLC HSS T3 色譜柱，以添加0.1%甲酸的水溶液-乙腈為洗脫流動(dòng)相來(lái)增加花色苷的穩(wěn)定性和分離度[36]，建立UPLC-QTOFMS 分析方法。由于紅果參乙醇提取物所含化學(xué)成分在正、負(fù)離子模式下有一定差異，因此本研究在正、負(fù)離子模式下，對(duì)2-A-9 紅果參果乙醇提取物進(jìn)行數(shù)據(jù)采集，其質(zhì)譜基峰離子色譜圖見(jiàn)圖1。

采用Waters Masslynx 軟件和UNIFI 數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)對(duì)質(zhì)譜數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，通過(guò)精確分子量、質(zhì)譜碎片裂解規(guī)律、化合物極性及保留時(shí)間分析，并結(jié)合參考文獻(xiàn)及對(duì)照品比對(duì)，在紅果參果乙醇提取物中共鑒定出21 個(gè)化合物，包括10 個(gè)黃酮、3 個(gè)有機(jī)酸、3 個(gè)花色苷、3 個(gè)酚酸、1 個(gè)氨基酸和1 個(gè)聚炔，見(jiàn)表2。從表2 中可見(jiàn)紅果參果實(shí)化學(xué)成分種類豐富，富含多種活性成分。矢車菊素-3-O-葡萄糖苷、矢車菊素-3-O-蕓香糖苷和飛燕草素-3-O-蕓香糖苷為三種花色苷成分，已被證實(shí)具有良好的降糖活性[45-46]。鑒定的非花色苷類酚性成分以黃酮和酚酸類成分為主，其中黃酮類成分最為豐富，10 個(gè)黃酮類成分中8 個(gè)為黃酮糖苷，主要是木犀草素的糖苷類成分，糖基以葡萄糖、蕓香糖為主，同時(shí)還檢測(cè)到木犀草素和芹菜素游離的苷元。3 個(gè)酚酸類物質(zhì)為咖啡酸和綠原酸類成分。這些天然來(lái)源的黃酮類物質(zhì)和酚酸類物質(zhì)均具有一定的降糖作用[47-49]，這為后續(xù)的深入研究提供了科學(xué)依據(jù)。此外，從紅果參果中首次鑒定出具有抗炎、抗癌等藥理活性的聚炔類黨參炔苷成分[50]。

2.3 α-糖苷酶抑制活性

本研究采用pNPG 法，以2-A-9 紅果參果乙醇提取物、2-A-9 粗多糖及其主要代表成分為代表考察紅果參果的體外α-葡萄糖苷酶抑制活性。如表3 所示，紅果參果乙醇提取物和粗多糖在2.00 mg/mL 下顯示出較強(qiáng)的抑制活性，抑制率在80%以上；在1.00 mg/mL 的濃度下，木犀草素對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制率超過(guò)90%，顯示出較強(qiáng)抑制活性；在1.00 mg/mL的濃度下矢車菊素-3-O-蕓香糖苷的α-葡萄糖苷酶抑制活性較弱，抑制率為30%；黨參炔苷對(duì)α-葡萄糖苷酶無(wú)抑制作用。

表3 樣品α-糖苷酶抑制活性實(shí)驗(yàn)Table 3 α-Glycosidase inhibitory activity test

進(jìn)一步考察紅果參果乙醇提取物、紅果參果粗多糖和代表黃酮成分木犀草素在不同濃度下的α-葡萄糖苷酶的活性抑制能力，見(jiàn)圖2，陽(yáng)性對(duì)照阿卡波糖的抑制能力見(jiàn)圖3?？梢?jiàn)各實(shí)驗(yàn)樣品在一定的質(zhì)量濃度（紅果參粗多糖6.72～107.5 μg/mL、紅果參乙醇提取物質(zhì)量濃度2.79～89.25 μg/mL、木犀草素0.75～12.06 μg/mL）范圍內(nèi)對(duì)α-糖苷酶活性的抑制呈現(xiàn)質(zhì)量濃度依賴，隨著各樣品質(zhì)量濃度的增加對(duì)α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用加強(qiáng)。采用SPSS18.0 軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)算出實(shí)驗(yàn)樣品的半數(shù)抑制濃度IC50，紅果參果乙醇提取物、粗多糖、木犀草素和阿卡波糖對(duì)α-葡萄糖苷酶半數(shù)抑制濃度IC50分別為7.52、37.43、8.03 和616.17 μg/mL，4 個(gè)實(shí)驗(yàn)樣品對(duì)α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用強(qiáng)度：紅果參果乙醇提取物＞木犀草素＞粗多糖＞阿卡波糖，三個(gè)樣品的抑制活性均顯著高于臨床糖尿病常用的藥物阿卡波糖（P＜0.05），紅果參乙醇提取物的IC50與木犀草素相當(dāng)，約為阿卡波糖的82 倍，具有更強(qiáng)的抑制作用。藍(lán)莓乙醇提取物α-糖苷酶抑制活性（IC50=13.0 mg/mL），阿卡波糖（IC50=3.09±0.14 mg/mL）[51]；桑葚乙酸乙酯提取物（IC50=72.01±4.18 μg/mL），阿卡波糖（IC50=77.05±6.10 μg/mL）[52]；藍(lán)果忍冬多糖HEP-2（IC50=1.56 mg/mL），阿卡波糖（IC50=10.13 mg/mL）[53]，與這些漿果提取物相比紅果參果提取物對(duì)α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用更有優(yōu)勢(shì)。

圖2 木犀草素和紅果參果樣品的α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用Fig.2 α-Glucosidase inhibition of luteolin and HGSG samples

圖3 阿卡波糖的α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用Fig.3 α-Glucosidase inhibition of acarbose

3 結(jié)論

本文采用經(jīng)典的紫外分光光度法測(cè)定紅果參果乙醇提取物中總黃酮、總花色苷和總多酚等大類成分含量，進(jìn)一步通過(guò)UPLC-QTOF-MS 技術(shù)對(duì)其化學(xué)成分進(jìn)行分析和結(jié)構(gòu)鑒定，結(jié)果顯示紅果參果乙醇提取物富含花色苷、酚酸、木犀草素及其糖苷黃酮類等多種酚類活性成分。本研究首次對(duì)紅果參果乙醇提取物和粗多糖的體外α-葡萄糖苷酶抑制活性進(jìn)行考察，對(duì)紅果參果降糖作用的藥理價(jià)值進(jìn)行評(píng)估。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示紅果參果乙醇提取物和粗多糖均對(duì)α-葡萄糖苷酶活性有良好的抑制作用，紅果參果乙醇提取物在7.52 μg/mL 質(zhì)量濃度下與木犀草素（8.03 μg/mL）抑制作用相當(dāng)，具有更強(qiáng)的α-葡萄糖苷酶抑制作用。紅果參果乙醇提取物α-葡萄糖苷酶抑制活性優(yōu)于粗多糖以及木犀草素、黨參炔苷和矢車菊素-3-O-葡萄糖苷等三個(gè)不同結(jié)構(gòu)類別的代表化合物，可能是多成分協(xié)同作用的結(jié)果，初步推斷黃酮類、酚酸類等酚類成分可能是紅果參果抑制α-葡萄糖苷酶活性的重要藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。酚類物質(zhì)作為小漿果代謝過(guò)程中重要的次生代謝產(chǎn)物，存在于漿果的莖葉、果肉以及種皮中，其含量?jī)H次于纖維素、半纖維素和木質(zhì)素，具有多種藥理活性[54]。黃酮類化合物又是酚類中的重要組成部分，眾多研究顯示其具有良好的抗糖尿病活性作用，有望成為用于調(diào)節(jié)2 型糖尿病中的餐后高血糖更安全的替代品[55]。

本研究結(jié)果豐富了紅果參果的化學(xué)成分庫(kù)并首次報(bào)道其潛在的天然降糖能力。后續(xù)尚需要對(duì)紅果參果的α-葡萄糖苷酶的抑制類型及抑制作用機(jī)理進(jìn)行深入研究，進(jìn)一步明確其藥效物質(zhì)成分群，為紅果參果開(kāi)發(fā)為降糖功能性食品提供更多的實(shí)驗(yàn)依據(jù)，為新型的天然α-糖苷酶抑制劑的開(kāi)發(fā)提供新的來(lái)源。