支雄莉 趙娜 田霞 段春梅

高危型人乳頭瘤病毒(HPV)感染是宮頸病變發(fā)生發(fā)展的重要因素[1]。其發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，目前認(rèn)為宮頸上皮內(nèi)瘤變和宮頸癌發(fā)病與機(jī)體細(xì)胞免疫功能低下，腫瘤發(fā)生免疫逃逸密切相關(guān)[2,3]。因此，增強(qiáng)機(jī)體細(xì)胞免疫功能對于清除HPV感染，延緩癌前病變和宮頸癌發(fā)生具有重要價值。本研究采用保婦康栓聯(lián)合瑞貝生治療宮頸高危型HPV感染，探討聯(lián)合用藥對患者細(xì)胞免疫功能的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018年5月至2019年5月于我院就診的宮頸高危型HPV感染患者70例，隨機(jī)分為對照組和聯(lián)合組，每組35例。對照組：年齡28～51歲，平均年齡(40.29±6.12)歲；病程5～18個月，平均(11.60±2.95)月；孕次1～3次，平均(1.94±0.73)次。聯(lián)合組：年齡30～52歲，平均年齡(40.66±5.91)歲；病程6～20個月，平均(12.77±3.65)月；孕次1～4次，平均(1.74±0.92)次。2組年齡、病程和孕次比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合高危型HPV感染診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]；②臨床資料完整；③入組前3個月未接受過抗病毒、抗炎等治療；④患者及家屬簽署知情同意書。

1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn)：①肝腎等重要臟器功能障礙者；②血液系統(tǒng)疾病、自身免疫性疾病患者；③惡性腫瘤患者；④妊娠期或哺乳期；⑤對所研究藥物過敏者;⑥精神疾病。

1.3 治療方法 (1)對照組給予保婦康栓(海南碧凱藥業(yè)有限公司)治療。使用方法：睡前放置于陰道后穹窿處，1次/d。(2)聯(lián)合組在對照組基礎(chǔ)上給予瑞貝生(海南森瑞普生命科學(xué)藥業(yè)股份有限公司)治療。使用方法：將 0.5 g 凍干粉溶于3 ml溶解液中，睡前注入陰道內(nèi)，隔日1次。療程均為6周。

1.4 觀察指標(biāo)

1.4.2 Th1/Th2、Th17/Treg細(xì)胞因子：抽取患者空腹靜脈血5 ml，離心取上清。酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)測定血清γ干擾素(IFN-γ)、白介素4(IL-4)、IL-17、轉(zhuǎn)化生長因子β(TGF-β)水平。

1.4.3 Th1/Th2、Th17/Treg轉(zhuǎn)錄因子：采集患者外周血單個核細(xì)胞(PBMCs)，采用Real time-PCR測定T-bet、Gata-3、Foxp3、RORγt mRNA表達(dá)。

2 結(jié)果

表1 2組患者T淋巴細(xì)胞亞群比較

2.2 2組Th1、Th2細(xì)胞比較 治療前，2組Th1、Th2、Th1/Th2比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；治療后，2組Th1、Th1/Th2均顯著高于治療前，Th2均顯著低于治療前，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，且聯(lián)合組治療后Th1、Th1/Th2高于對照組，Th2低于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 2組患者Th1、Th2細(xì)胞比較

2.3 2組患者Th1/Th2細(xì)胞因子比較 治療前，2組IFN-γ、IL-4比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；治療后，2組IFN-γ均顯著高于治療前，IL-4均顯著低于治療前，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，且聯(lián)合組治療后IFN-γ高于對照組，IL-4低于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表3 2組Th1/Th2細(xì)胞因子比較

2.4 2組Th1/Th2轉(zhuǎn)錄因子比較 治療前，2組T-bet、Gata-3 mRNA表達(dá)比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；治療后，2組T-bet mRNA表達(dá)均顯著高于治療前，Gata-3 mRNA表達(dá)均顯著低于治療前，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，且聯(lián)合組治療后T-bet mRNA表達(dá)高于對照組，Gata-3 mRNA表達(dá)低于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表4。

表4 2組患者Th1/Th2轉(zhuǎn)錄因子比較

2.5 2組患者Th17、Treg細(xì)胞比較 治療前，2組Th17、Treg、Th17/Treg比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；治療后，2組Th17、Treg、Th17/Treg均顯著低于治療前，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，且聯(lián)合組治療后Th17、Treg、Th17/Treg低于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表5。

表5 2組患者Th17、Treg細(xì)胞比較

2.6 2組患者Th17/Treg細(xì)胞因子比較 治療前，2組IL-17、TGF-β比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；治療后，2組IL-17、TGF-β均顯著低于治療前，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，且聯(lián)合組治療后IL-17、TGF-β低于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表6。

表6 2組Th17/Treg細(xì)胞因子比較

2.7 2組患者Th17/Treg轉(zhuǎn)錄因子比較 治療前，2組RORγt、Foxp3 mRNA表達(dá)比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；治療后，2組RORγt、Foxp3 mRNA表達(dá)均顯著低于治療前，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，且聯(lián)合組治療后RORγt、Foxp3 mRNA表達(dá)低于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表7。

表7 2組患者Th17/Treg轉(zhuǎn)錄因子比較

3 討論

輔助性T細(xì)胞(Th)是機(jī)體重要的免疫細(xì)胞，分為Th1、Th2兩個亞群，前者分泌IFN-γ、IL-2等細(xì)胞因子，發(fā)揮促進(jìn)免疫應(yīng)答作用；后者分泌IL-4、IL-10等細(xì)胞因子，能夠抑制Th1細(xì)胞功能，并誘導(dǎo)體液免疫應(yīng)答[8,9]。Th1/Th2平衡在機(jī)體抗HPV感染、抗腫瘤中發(fā)揮重要作用。研究發(fā)現(xiàn)，宮頸HPV感染患者體內(nèi)Th1/Th2免疫失衡，表現(xiàn)為Th1細(xì)胞功能降低，Th2細(xì)胞功能增強(qiáng)，導(dǎo)致IFN-γ等Th1細(xì)胞因子分泌減少，IL-4等Th2細(xì)胞因子分泌增多，機(jī)體處于免疫抑制狀態(tài)，從而導(dǎo)致HPV清除障礙，這是宮頸病變發(fā)生發(fā)展的免疫機(jī)制之一[10]。T-bet、Gata-3是Th1、Th2細(xì)胞特異性表達(dá)的轉(zhuǎn)錄因子，檢測其表達(dá)能夠在一定程度上反映Th1、Th2細(xì)胞因子水平[11,12]。本研究結(jié)果可知，2組治療前Th1、Th2、Th1/Th2、IFN-γ、IL-4及T-bet、Gata-3 mRNA表達(dá)比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；2組治療后Th1、Th1/Th2、IFN-γ及T-bet mRNA表達(dá)均顯著高于治療前，Th2、IL-4及Gata-3 mRNA表達(dá)均顯著低于治療前(P<0.05)，且聯(lián)合組治療后以上指標(biāo)變化更明顯(P<0.05)。說明宮頸高危型HPV感染患者存在Th1/Th2細(xì)胞失衡，保婦康栓聯(lián)合瑞貝生治療宮頸高危型HPV感染通過上調(diào)T-bet表達(dá)并下調(diào)Gata-3表達(dá)改善Th1/Th2細(xì)胞失衡，調(diào)節(jié)Th1、Th2細(xì)胞因子分泌，從而增強(qiáng)細(xì)胞免疫功能。

綜上所述，保婦康栓聯(lián)合瑞貝生治療宮頸高危型HPV感染能夠改善患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群，糾正Th1/Th2、Th17/Treg細(xì)胞失衡，提高細(xì)胞免疫功能。