巴羊，賀順忠，季艾娜，宋仁德

(青海省玉樹(shù)藏族自治州動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，玉樹(shù) 815099)

牦牛是青藏高原特有的畜種，對(duì)于生長(zhǎng)在海拔3 000～5 000 m高寒、缺氧和牧草低矮、枯草期達(dá)半年以上的惡劣生存條件有著其他家畜難以比擬的適應(yīng)性，其所提供之畜產(chǎn)品，對(duì)當(dāng)?shù)啬撩竦囊隆⑹?、住和行起著無(wú)可替代之作用，為青藏高原最主要當(dāng)家畜種之一。青海省是牦牛主要生產(chǎn)區(qū)，約占全國(guó)牦?？倲?shù)的35%。硒(Se)是谷胱苷肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)的構(gòu)成成份，這種酶能催化過(guò)氧化氫和不飽和脂肪酸的過(guò)氧化物使谷胱甘肽氧化，從而防止細(xì)胞內(nèi)的許多種重要活性物質(zhì)不受強(qiáng)氧化劑的損害，是家畜必需微量元素[1]。硒具有多種的生理機(jī)能，能影響免疫系統(tǒng)的特殊組分和防止子畜腹瀉及白肌癥的發(fā)生等[2-4]，青海省各地放牧草地植物中的硒(Se)含量較低[5]，僅靠采食天然野草而生存的牦牛，處于嚴(yán)重缺硒的狀態(tài)[6-8]，給妊娠末期母牦牛進(jìn)行補(bǔ)充Se和VE后，對(duì)所產(chǎn)犢牦牛的血清中Se，VE濃度增加有效[9]，能夠促進(jìn)犢牦牛生長(zhǎng)發(fā)育[10]。牦牛屬于季節(jié)性繁殖家畜，從妊娠到分娩正處于漫長(zhǎng)的冬季，在野草中主要營(yíng)養(yǎng)成分損失，Se低下的同時(shí)VE含量處于最低時(shí)期，初生后犢牛的Se，VE含量低下是引起白肌病發(fā)病率較高的原因[3]，本研究為了取得Se和VE對(duì)犢牦牛白肌病的預(yù)防效果的基礎(chǔ)參數(shù)，給妊娠末期母牦牛進(jìn)行補(bǔ)充Se和VE后，對(duì)幾種被認(rèn)為與白肌病有關(guān)的血清中活性酶的濃度的影響進(jìn)行了探討。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)期間及供試動(dòng)物

實(shí)驗(yàn)于2011年4月至10月底期間在玉樹(shù)藏族自治州國(guó)營(yíng)牧場(chǎng)進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)采用了母牦牛14頭及其所產(chǎn)犢牦牛14頭，共28頭。實(shí)驗(yàn)用牦牛按牧民的飼養(yǎng)習(xí)慣進(jìn)行終年放牧，其采食牧草全部為天然牧草，試驗(yàn)期間只進(jìn)行了1次人工補(bǔ)鹽，母牦牛日擠奶2次。

1.2 供試藥劑

實(shí)驗(yàn)用1 mL中含有亞硒酸鈉5.48 mg(其中含硒2.5 mg)及醋酸d-α-tocopherol 50 mg(其中含VE 68 IU)的Se-VE制劑。

1.3 實(shí)驗(yàn)分組

實(shí)驗(yàn)分為Se-VE劑試驗(yàn)組(以下簡(jiǎn)稱試驗(yàn)組)與空白組(以下簡(jiǎn)稱對(duì)照組)，兩組各有母牦牛7頭及其所產(chǎn)犢牦牛7頭(對(duì)照組的1頭犢牦牛出生后第3日死亡)。實(shí)驗(yàn)組的母牦牛，在分娩預(yù)定日前約1個(gè)月將Se-VE制劑按8 mL/頭經(jīng)肌肉注射給藥。

1.4 采血及分析項(xiàng)目

分析用樣本的采集：對(duì)母牦牛在投藥前(分娩前第4周)，分娩當(dāng)日，第8周(分娩后第4周)，犢牦牛在出生當(dāng)日和生后第4周分別從頸靜脈進(jìn)行采血，用3 000 rpm，10 min進(jìn)行離心分離血清供分析用。

谷草轉(zhuǎn)氨酶(Glutamic oxaloacetic transaminase，GOT)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(Glutamic pyruvic transaminase，GPT)和肌酸磷酸激酶(Creatine phosphokinase，CPK)，分別用酶活性測(cè)定試劑盒進(jìn)行了測(cè)定。

1.5 統(tǒng)計(jì)處理

以處理區(qū)及時(shí)間為變動(dòng)因子進(jìn)行了二元配置方差分析及students’T-test法進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 血清GOT活性

實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組牦牛GOT活性值如表1所示。

表1 給妊娠后期母牦牛注射E-SE劑后母子牦牛血清中GOT活性的變化 (U/L)

出生當(dāng)日實(shí)驗(yàn)組犢牦牛的血清中GOT活性值顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，而4周齡時(shí)雖呈低值，但兩區(qū)間無(wú)顯著差異。

2.2 血清GPT活性

實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組牦牛血清GPT活性值如表2所示。

表2 給妊娠后期母牦牛注射E-SE劑后母子牦牛血清中GPT活性的變化 (U/L)

犢牦牛的血清中GPT活性在出生當(dāng)日和4周齡時(shí)均低于對(duì)照組，但無(wú)顯著差異。

2.3 血清CPK活性

實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組牦牛血清中CPK活性如表3所示。

表3 給妊娠后期母牦牛注射E-SE劑后母子牦牛血清中CPK活性的變化 (U/L)

3 討論

給妊娠末期母牦牛進(jìn)行補(bǔ)充Se和VE后，對(duì)所產(chǎn)犢牦牛的血清中Se，VE濃度增加有效[9]，能夠促進(jìn)犢牦牛生長(zhǎng)發(fā)育[10]，而白肌病作為硒缺乏癥在很早以前就被證明，Itijo等[2]曾報(bào)告，作為白肌病的診斷指標(biāo)，可使用當(dāng)肌肉及臟器等受到損害時(shí)漏入血清中的酶的活性來(lái)診斷。Amer HA等[11]提出，血清GPT、GOT和LDH活性變化是衡量肌肉組織硒營(yíng)養(yǎng)和損傷程度的敏感指標(biāo)，李敬璽等[12]指出CPK活性變化作為肌肉營(yíng)養(yǎng)或損傷的指標(biāo)更為可靠和敏感，血硒濃度與CPK活性的負(fù)相關(guān)表明了硒對(duì)肌肉組織的營(yíng)養(yǎng)作用，加VE后更為明顯。本次試驗(yàn)中雖然母牦牛的血清中GOT，GPT和CPK 的活性值在兩區(qū)之間沒(méi)有顯著差異，但是，在分娩當(dāng)日及第4周時(shí)對(duì)照組的CPK活性均呈高值。而在犢牦牛上實(shí)驗(yàn)組的GOT，GPT，CPK的活性值在出生當(dāng)日和4周齡時(shí)均低于對(duì)照組，4周齡時(shí)實(shí)驗(yàn)組的PGT顯著低于對(duì)照組。對(duì)照組的1頭犢牦牛出生當(dāng)日的CPK活性呈939U/l的顯著高值，出生后第3日死亡，死亡前出現(xiàn)食欲不振、行走困難，頸、脊部肌肉腫脹等疑似白肌病癥狀，由于實(shí)驗(yàn)現(xiàn)場(chǎng)條件的限制，未能采集到其內(nèi)臟的試樣，非常遺憾。但確認(rèn)其出生當(dāng)日母子牦牛的血清中Se值均呈極端低值，并確認(rèn)了其母牦牛的血清中CPK活性在產(chǎn)后第4周時(shí)仍呈高值，為李鑑軒等[12]所測(cè)定的成年母牦牛的血清CPK活性值97.8U/L的3倍以上的實(shí)驗(yàn)結(jié)果相似。加上實(shí)驗(yàn)組的犢牦牛的血清中GOT、GPT和CPK的活性值均在李鑑軒等[13]測(cè)定的活性值范圍之內(nèi)的結(jié)果來(lái)看，支持了因Se缺乏而潛在的白肌病牛的識(shí)別以CPK為中心的血清酶的活性檢查更加有效的觀點(diǎn)[12]。一般來(lái)說(shuō)，Se缺乏的同時(shí)VE的缺乏是白肌病發(fā)病的原因，但如前所述，雖然VE濃度不在缺乏值的范圍，對(duì)照組的犢牦牛中仍出現(xiàn)了白肌病的征兆，這從犢牦牛出生后不得不馬上隨群奔走的一面來(lái)看，可能是突然的運(yùn)動(dòng)脅迫等又成為白肌病發(fā)病的引子。含硒量和含硒酶活性降低是免疫器官發(fā)生病理變化的條件，免疫器官的病理變化導(dǎo)致機(jī)體免疫異常。王旭東報(bào)道[14]缺硒對(duì)機(jī)體的生理功能和形態(tài)結(jié)構(gòu)有廣泛的影響，犢牛缺硒，機(jī)體免疫功能下降，引起細(xì)胞膜損傷，細(xì)胞介導(dǎo)免疫功能受損，導(dǎo)致?tīng)I(yíng)養(yǎng)不良，消化功能紊亂；臨床上出現(xiàn)腹瀉脫水，姿勢(shì)異常，運(yùn)動(dòng)功能障礙等，補(bǔ)硒有顯著地治療效果，而且在缺硒帶，應(yīng)用硒或者硒化合物和抗菌素等藥物混合，治療犢牛細(xì)菌性腹瀉亦有效果，其原因是硒缺乏，導(dǎo)致機(jī)體抵抗力低下，使大腸桿菌等微生物感染所致。

綜上所述，說(shuō)明通過(guò)肌注對(duì)妊娠末期牦牛補(bǔ)充Se與VE可以提高母牦牛在分娩時(shí)及哺乳期時(shí)兩成分的血清中濃度，可以提高犢牦牛在出生及哺乳期間兩成分的血清中濃度，抑制血清活性酶濃度的增加，對(duì)防止?fàn)訇笈５陌准〔“l(fā)生有效。