梁 塏 賈海全 王皓穎 劉 鵬 史 源

河南省安陽(yáng)市腫瘤醫(yī)院 河南科技大學(xué)第四附屬醫(yī)院 455000

乳腺癌是常見(jiàn)的女性疾病，其發(fā)病率在全球女性所有惡性腫瘤中位于第一位并在逐年上升，也是女性癌癥死亡最主要原因，據(jù)統(tǒng)計(jì)每年全球超過(guò)60萬(wàn)女性死于乳腺癌，占癌癥死亡人數(shù)6.6%，給女性生命健康和生活質(zhì)量帶來(lái)了巨大威脅[1]。有研究報(bào)道[2]，腫瘤轉(zhuǎn)移是乳腺癌致死的一個(gè)重要因素，癌細(xì)胞能夠從淋巴轉(zhuǎn)移至其他臟器，導(dǎo)致病情惡化。癌細(xì)胞浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移涉及細(xì)胞與細(xì)胞、細(xì)胞與基質(zhì)之間的相互作用，上皮—間質(zhì)轉(zhuǎn)化(Epithelial-mesenchymal transition，EMT)、黏附因子、蛋白酶等均是參與其中的分子基礎(chǔ)，起到重要的作用。EMT過(guò)程中上皮性鈣粘蛋白(E-cadherin)、神經(jīng)性鈣粘蛋白(N-cadherin)表達(dá)水平發(fā)生變化，進(jìn)而通過(guò)信號(hào)通路調(diào)節(jié)CD44V6等黏附因子的表達(dá)，使癌細(xì)胞形態(tài)、腫瘤微環(huán)境發(fā)生變化，增強(qiáng)癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移侵襲能力[3]。本研究通過(guò)檢測(cè)E-cadherin與N-cadherin及CD44V6的表達(dá)，探討E-cadherin、N-cadherin及CD44V6聯(lián)合檢測(cè)在乳腺癌發(fā)生發(fā)展中的意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018年1月—2020年8月在我院確診為乳腺癌的105例女性患者，取癌組織及癌旁組織和正常乳腺組織30例制作病理切片，其中年齡30～75歲，平均年齡(54.42±13.86)歲；腫瘤直徑>2cm 57例，≤2cm 48例，平均腫瘤直徑(3.45±0.86)cm；浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌73例，非浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌32例；乳腺癌分級(jí)：Ⅰ級(jí)(低分化)29例、Ⅱ級(jí)(中度分化)37例、Ⅲ級(jí)(高度分化)39例；TNM分期：Ⅰ期21例、Ⅱ期43例、Ⅲ期41例；無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移44例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移61例；癌旁組織選取與癌組織相對(duì)應(yīng)的距乳腺癌腫塊邊緣>5cm的乳腺組織，正常乳腺組織取自乳腺導(dǎo)管上皮增生病理確診為正常乳腺組織的樣本，均為女性，年齡25～48歲，平均年齡(35.12±6.34)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)經(jīng)病理或影像學(xué)證實(shí)診斷為乳腺癌，符合WHO腫瘤國(guó)際組織學(xué)分類(lèi)；(2)符合美國(guó)癌癥聯(lián)合會(huì)(AJCC)、國(guó)際抗癌聯(lián)盟(UICC)指南中乳腺癌分級(jí)Ⅰ～Ⅲ級(jí)及TNM分期Ⅰ～Ⅲ期標(biāo)準(zhǔn)；(3)未見(jiàn)遠(yuǎn)處腫瘤轉(zhuǎn)移；(4)首次患病，且術(shù)前未接受其他任何治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并其他惡性腫瘤；(2)合并其他系統(tǒng)性疾病；(3)男性乳腺癌患者。本研究所有病例均資料完備，且經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)，病患及家屬簽署知情同意書(shū)。

1.2 方法

1.2.1 試劑：10%福爾馬林；E-cadherin兔抗人多抗、CD44V6兔抗人多抗、N-cadherin兔抗人多抗均購(gòu)于美國(guó)Cell Signaling Technology公司；通用SP試劑盒(小鼠/兔鏈霉卵白素—生物素法檢測(cè)系統(tǒng))購(gòu)于北京中杉金橋生物技術(shù)公司。

1.2.2 標(biāo)本常規(guī)取材：以10%福爾馬林溶液進(jìn)行固定，石蠟包埋處理切片。免疫組化檢測(cè)E-cadherin、CD44V6及N-cadherin，嚴(yán)格按照SP試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。

1.3 判斷標(biāo)準(zhǔn) E-cadherin、CD44V6及N-cadherin表達(dá)陽(yáng)性物質(zhì)均位于細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)，陽(yáng)性染色呈棕黃色顆粒。染色陽(yáng)性細(xì)胞百分比評(píng)分：無(wú)細(xì)胞染色為0分，25%以下細(xì)胞染色為1分，25%～50%細(xì)胞染色為2分，50%以上細(xì)胞染色為3分；染色深淺評(píng)分：不顯色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；根據(jù)染色陽(yáng)性細(xì)胞百分比評(píng)分和染色深淺評(píng)分乘積作為陽(yáng)性評(píng)分結(jié)果：陰性為2分以下，弱陽(yáng)性為2～3分，中度陽(yáng)性為4～6分，強(qiáng)陽(yáng)性為6分以上。

2 結(jié)果

2.1 E-cadherin、CD44V6及N-cadherin在乳腺癌、癌旁組織及正常乳腺組織中的表達(dá)陽(yáng)性率比較 E-cadherin在乳腺癌組織、癌旁組織及正常乳腺組織中的表達(dá)陽(yáng)性率分別為31.43%、88.57%、100.00%，癌組織陽(yáng)性率明顯較低(P<0.05)；CD44V6在乳腺癌組織、癌旁組織及正常乳腺組織中的表達(dá)陽(yáng)性率分別為56.19%、8.57%、0.00%，癌組織陽(yáng)性率明顯較高(P<0.05)；N-cadherin在乳腺癌組織、癌旁組織及正常乳腺組織中的表達(dá)陽(yáng)性率分別為78.10%、20.95%、0.00%，癌組織陽(yáng)性率明顯較高(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 E-cadherin、CD44V6及N-cadherin在乳腺癌、癌旁組織及正常乳腺組織中的表達(dá)[n(%)]

2.2 E-cadherin、CD44V6及N-cadherin表達(dá)與乳腺癌臨床病理特征的相關(guān)性 E-cadherin、CD44V6及N-cadherin表達(dá)均與乳腺癌腫瘤大小、分級(jí)、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)(P<0.05)，乳腺癌腫瘤大小、分級(jí)、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與E-cadherin表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，與CD44V6及N-cadherin表達(dá)呈正相關(guān)，與乳腺癌組織學(xué)類(lèi)別無(wú)相關(guān)性(P>0.05)。見(jiàn)表2。

表2 E-cadherin、CD44V6及N-cadherin表達(dá)與乳腺癌臨床病理特征的相關(guān)性[n(%)]

2.3 E-cadherin表達(dá)與CD44V6及N-cadherin表達(dá)相關(guān)性 相關(guān)分析結(jié)果顯示，乳腺癌組織中E-cadherin表達(dá)與CD44V6表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.137，P=0.034)，與N-cadherin表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.213，P=0.001)；CD44V6表達(dá)與N-cadherin表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.329，P=0.000)。

3 討論

女性乳腺癌大約10%在確診時(shí)發(fā)生轉(zhuǎn)移，40%發(fā)展為轉(zhuǎn)移性乳腺癌，70%的淋巴結(jié)陽(yáng)性乳腺癌患者預(yù)后發(fā)生復(fù)發(fā)，這些都是造成乳腺癌患者死亡的主要原因[4]。因此，對(duì)乳腺癌開(kāi)展疾病監(jiān)測(cè)意義重大。

研究發(fā)現(xiàn)[5]， EMT與乳腺癌、泌尿上皮腫瘤、口腔鱗狀上皮癌等多種上皮性惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。EMT參與的過(guò)程中重要的標(biāo)志為E-cadherin表達(dá)上調(diào)、N-cadherin表達(dá)下調(diào)，E-cadherin廣泛存在于成熟的上皮細(xì)胞中，可調(diào)節(jié)胚胎組織發(fā)育、形成，還參與了細(xì)胞之間的信號(hào)傳遞交流，促進(jìn)細(xì)胞黏附、聚集、維持細(xì)胞形態(tài)。乳腺癌細(xì)胞會(huì)分泌Twist1、Snail1、Six1等多種轉(zhuǎn)錄因子，通過(guò)調(diào)控TGF-β、WNTs、NOTCH等信號(hào)通路抑制E-cadherin等編碼上皮細(xì)胞特異性蛋白的表達(dá)，促進(jìn)黏附連接的降解，同時(shí)E-cadherin等蛋白被N-cadherin、波形蛋白、纖維連接蛋白等具有更大連接活性的蛋白取代，從而增強(qiáng)細(xì)胞運(yùn)動(dòng)型，導(dǎo)致細(xì)胞分離[6]。本研究結(jié)果顯示，在正常乳腺組織中E-cadherin所有樣本中都存在表達(dá)，N-cadherin幾乎都不表達(dá)，而在乳腺癌組織中相反，E-cadherin表達(dá)明顯下調(diào)，N-cadherin表達(dá)明顯上調(diào)，說(shuō)明乳腺癌患者中存在EMT過(guò)程。通過(guò)對(duì)病理結(jié)果的分析發(fā)現(xiàn)，E-cadherin、N-cadherin表達(dá)與腫瘤大小、分級(jí)(分化程度)、分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，表現(xiàn)為腫瘤直徑越大，E-cadherin陽(yáng)性表達(dá)越低，N-cadherin陽(yáng)性表達(dá)越高；乳腺癌分化程度越高、TNM分期越高，E-cadherin陽(yáng)性表達(dá)越低，N-cadherin陽(yáng)性表達(dá)越高；在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者中，E-cadherin陽(yáng)性表達(dá)低，N-cadherin陽(yáng)性表達(dá)高，提示E-cadherin、N-cadherin參與乳腺癌的發(fā)展和轉(zhuǎn)移，且有負(fù)相關(guān)性。

在乳腺癌細(xì)胞病變轉(zhuǎn)移過(guò)程中，細(xì)胞黏附因子起到重要作用。細(xì)胞黏附因子存在于細(xì)胞表面，作用于細(xì)胞與細(xì)胞之間、細(xì)胞與外基質(zhì)之間，作為細(xì)胞骨架的功能。CD44V6是CD44的變異體，是高度異質(zhì)性的單鏈跨膜糖蛋白，可作為透明質(zhì)酸、纖維連接蛋白等受體，與細(xì)胞外基質(zhì)的透明質(zhì)酸、纖維連接蛋白等結(jié)合，改變細(xì)胞的形態(tài)和運(yùn)動(dòng)，使癌細(xì)胞逃避免疫系統(tǒng)的識(shí)別和殺傷，進(jìn)入淋巴結(jié)生長(zhǎng)分化形成轉(zhuǎn)移灶，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的直接擴(kuò)散，與乳腺癌的轉(zhuǎn)移和預(yù)后復(fù)發(fā)有密切聯(lián)系[7]。本研究結(jié)果顯示，在乳腺癌組織中的CD44V6表達(dá)要顯著高于癌旁組織及正常組織，而且CD44V6的陽(yáng)性表達(dá)率與乳腺癌的腫瘤大小、乳腺癌分級(jí)、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況顯著相關(guān)，具體表現(xiàn)為腫瘤直徑越大、乳腺癌分化程度越高、TNM分期越高、癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移，CD44V6的陽(yáng)性表達(dá)率越高，提示CD44V6參與了乳腺癌發(fā)生發(fā)展及癌細(xì)胞淋巴結(jié)侵襲轉(zhuǎn)移過(guò)程，同時(shí)與E-cadherin、N-cadherin陽(yáng)性表達(dá)率比較，CD44V6與E-cadherin陽(yáng)性表達(dá)率呈負(fù)相關(guān)，與N-cadherin陽(yáng)性表達(dá)率呈正相關(guān)，預(yù)示著CD44V6、E-cadherin、N-cadherin可能共同促進(jìn)了乳腺癌的發(fā)展和轉(zhuǎn)移。

綜上所述，E-cadherin、N-cadherin、CD44V6在乳腺癌發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移中起到了重要的作用，且彼此之間密切相關(guān)，聯(lián)合檢測(cè)對(duì)乳腺癌的防治、診斷、預(yù)后有重要意義。