徐雯琦， 李文博， 郭清霖， 鄭云霄， 陳曉峰

（中國農(nóng)業(yè)大學(xué)煙臺(tái)研究院，山東 煙臺(tái) 264670）

0 引言

葡萄在我國有著較大的種植面積，隨著葡萄栽培的面積、葡萄品種及葡萄栽培區(qū)域的不斷增加，葡萄病蟲害的種類也迅速增加。霜霉病、炭疽病、白粉病及白腐病是葡萄主要病害，其中葡萄霜霉病危害最大，可影響葡萄的整個(gè)生育期，導(dǎo)致果實(shí)脫落，也是釀酒葡萄最嚴(yán)重的病害之一[1-4]。葡萄葉蟬、紅蜘蛛及堅(jiān)蚧是葡萄主要蟲害，其中葡萄葉蟬對(duì)葡萄危害最大，可導(dǎo)致秋季葉片提早脫落、果實(shí)著色差、成熟延遲、含糖量降低等問題[5]。

化學(xué)防治是目前最主要的防治手段，利用化學(xué)藥劑防治雖然見效快、效果好、使用方便，但是存在殺傷天敵、殘毒和污染環(huán)境等問題，如甲霜靈等具有較強(qiáng)內(nèi)吸性的脂溶性農(nóng)藥會(huì)遷移進(jìn)果肉組織、抑菌靈等殺菌劑殘留會(huì)降低酵母菌的豐富度，在葡萄釀酒過程中產(chǎn)生不良影響[1,3]。

豬糞沼液是由豬糞污經(jīng)厭氧發(fā)酵處理產(chǎn)生的有機(jī)廢水，經(jīng)多種微生物的作用，沼液含有許多活性物質(zhì)，其中各類營養(yǎng)元素、氨基酸、植物激素、益菌群及抗生素可以用作葉面噴肥、種子浸泡液、?；ū９麆┘盁o土栽培母液，即提高了產(chǎn)量，又減少了成本，同時(shí)還具有改良土壤性狀、增強(qiáng)作物抗性及防治作物病蟲害等功效[6-11]。已有研究發(fā)現(xiàn)，豬糞沼液對(duì)果樹增強(qiáng)樹勢(shì)和抗逆性有一定作用，其對(duì)西瓜枯萎病、草莓灰霉病、黃瓜霜霉病、大蔥紫斑病和小麥赤霉病等病害有明顯的抑制作用，對(duì)蚜蟲、蘋果紅蜘蛛等蟲害防治也有一定效果[12-17]。但對(duì)其在葡萄（赤霞珠）病蟲害的防治效果還未見研究報(bào)道。

本文以赤霞珠為試驗(yàn)材料，研究沼液對(duì)葡萄葉蟬及霜霉病的防治效果，旨在為葡萄葉蟬、霜霉病的防治提供一種新方法，為減少實(shí)際生產(chǎn)中環(huán)境污染和資源浪費(fèi)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 地點(diǎn)

試驗(yàn)于2021 年3?7 月在中國農(nóng)業(yè)大學(xué)煙臺(tái)研究院試驗(yàn)田及日光溫室進(jìn)行。采用的日光溫室規(guī)格為450 m2（50 m×9 m），露地栽培，試驗(yàn)田土質(zhì)為中壤土，pH值6.24，土地澆灌方便。

1.2 材料

沼液來自于山東民和生物科技有限公司，儲(chǔ)存期>2 年；經(jīng)測(cè)定沼液總養(yǎng)分≥25%，主要成分中氮4.26 g/L、磷0.137 g/L、鉀0.35 g/L，鈣、硼、硒、鋅、維生素B12 及抗生素等養(yǎng)分≥10%，pH 值7.52。

植物材料為中國農(nóng)業(yè)大學(xué)煙臺(tái)研究院提供的赤霞珠幼苗，1 月齡，無毒且未嫁接。日光溫室和露地栽培葡萄株行距均為1.20 m×0.95 m。葡萄栽植后，每隔5～7 d澆水一次，根據(jù)具體情況施肥，保證葡萄正常生長。

1.3 葡萄霜霉菌接種液的制備

供試菌液制備采用試驗(yàn)田中發(fā)病較重且具有較強(qiáng)致病力的葡萄病原株，挑取葉背白色霉層，經(jīng)鏡檢確定為霜霉病病原，再用清水沖洗葉片表面的雜物，然后在黑暗保濕（相對(duì)濕度95%以上）環(huán)境下培養(yǎng)24 h，之后用毛筆蘸取無菌水將背面霉?fàn)钗锵聪?，在血球?jì)數(shù)板下觀察最終配成濃度為1×106cfu/mL 的孢子懸浮液[4]。

1.4 葡萄葉蟬防治分組

沼液原液與清水按照體積比配置成0%（T0，CK）、20%（T1）、40%（T2）、60%（T3）、80%（T4）、100%（T5）6 種不同濃度的處理液，每處理6 株，3 次重復(fù)。從葡萄展葉期開始定期（14 d 一次）噴施不同濃度的沼液，進(jìn)行葉蟬危害試驗(yàn)，調(diào)查記錄并計(jì)算露地栽培條件下植株受葉蟬危害的葉片數(shù)，并按照式（1）和式（2）計(jì)算葉蟬危害率和防治效果。

1.5 葡萄霜霉病防治分組

田間和溫室試驗(yàn)各設(shè)6 個(gè)處理（處理方法同1.4），每處理6 株，3 次重復(fù)。從葡萄展葉期開始定期（7 d一次，共2 次）噴施不同濃度沼液，沼液用量以所有葉片不滴水為準(zhǔn)，最后一次沼液噴施后5 d 進(jìn)行霜霉病病原菌接種試驗(yàn)。

采用噴霧器噴霧法對(duì)田間和溫室各處理的葡萄苗進(jìn)行霜霉病病原菌接種，按照每株10～15 mL 的用量噴至葉片，以不滴水為宜，自然晾干后，在溫度為23～25 ℃、黑暗條件下（RH≥85%）誘發(fā)24 h。5 d 后進(jìn)行霜霉病病情指數(shù)調(diào)查。按照表1 霜霉病的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)來記錄，并按照式（2）和式（3）計(jì)算病情指數(shù)和防治效果。

表1 葡萄葉片霜霉病分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)Tab. 1 Classification standard of downy mildew in grape leaf

1.6 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析使用SPSS Statistics 20.0 與Microsoft Excel 2016 軟件，差異顯著性檢驗(yàn)采用LSD 法，P< 0.05 時(shí)，認(rèn)為差異具有顯著性。

2 結(jié)果與分析

2.1 葡萄葉片田間葉蟬危害

從圖1 可以看出，在露地栽培條件下，噴施沼液處理的試驗(yàn)組（T1～T5）葉蟬危害率均低于未噴施沼液的對(duì)照組（T0），這說明噴施沼液對(duì)防治葉蟬危害有一定作用，葉蟬危害率隨著噴施沼液濃度的提高而逐步下降，T5具有最低的葉蟬危害率，為17.40%。從方差分析可知，噴施沼液試驗(yàn)組與未噴施沼液的對(duì)照組葉蟬危害率差異顯著；T1處理、T2處理、T3處理與T4處理差異不顯著；T5處理與噴施其他濃度沼液處理組差異顯著，并且T5處理葉蟬危害率最低，可顯著降低葉蟬的危害率，因此噴施沼液原液對(duì)于葉蟬具有最好的防治效果。

圖1 不同濃度沼液處理下葡萄葉片葉蟬平均危害Fig. 1 Average damage rate of leaf hopper in grape leaves treated with biogas slurry of different concentrations

2.2 葡萄葉片霜霉病病情指數(shù)

從圖2a 可以看出，在露地栽培條件下，噴施沼液的試驗(yàn)組葡萄霜霉病病情指數(shù)與對(duì)照組相比較低，T4處理具有最低的病情指數(shù)1.53，T5處理病情指數(shù)較T4增高，T1處理病情指數(shù)達(dá)到3.06，但均比對(duì)照組病情指數(shù)低。低于80%濃度范圍內(nèi)，提高沼液濃度，可以使得霜霉病病情指數(shù)逐步下降。從方差分析可以看出，噴施的沼液濃度在60%濃度范圍內(nèi)時(shí)，沼液處理組病情指數(shù)相比T0下降，但是對(duì)于葡萄霜霉病病情指數(shù)的降低差異不顯著；噴施80%濃度沼液的試驗(yàn)組（T4）霜霉病具有最低的病情指數(shù)，并且與T0、T1、T2、T3、T5處理組對(duì)比，顯著降低了病情指數(shù)，說明噴施沼液對(duì)葡萄霜霉病有一定的防治作用，并且沼液噴施濃度為原液濃度的80%處理對(duì)防治葡萄霜霉病具有最顯著的效果，噴施100%濃度沼液反而較噴施80%濃度沼液防治效果下降。

圖2 不同濃度沼液處理下葡萄葉片霜霉病平均病情指數(shù)Fig. 2 Average disease index of downy mildew in grape leaves treated with different concentration of biogas slurry

從圖2b 可以看出，在溫室條件下，沼液處理均比對(duì)照處理霜霉病病情指數(shù)降低，病情指數(shù)呈現(xiàn)逐漸下降的趨勢(shì)（T1～T4處理），以T4處理，病情指數(shù)最低，為1.78，顯著低于對(duì)照組。當(dāng)使用原液處理時(shí)（T5），霜霉病病情指數(shù)呈現(xiàn)上升的趨勢(shì)，但未超過對(duì)照組，說明噴施沼液對(duì)于防治葡萄病效果良好，且噴施80%濃度沼液對(duì)于防治葡萄霜霉病有較好的效果，噴施100%濃度沼液反而較噴施80%濃度沼液防治效果下降。

3 討論

目前對(duì)于沼液在葡萄生產(chǎn)上應(yīng)用的研究主要集中在改善土壤理化性狀、提高葡萄產(chǎn)量與提升產(chǎn)品品質(zhì)方面，對(duì)沼液的防治病蟲害方向研究較少[7-10,18]。沼液中富含抗菌、消化抑制因子和特殊的營養(yǎng)成分，對(duì)農(nóng)作物多種病蟲害均能起到良好的殺滅和抑制作用。郭生虎[14]將其與低能保護(hù)性有機(jī)殺菌劑復(fù)配作為農(nóng)藥的增效劑，對(duì)黃瓜霜霉病的殺菌效果得到顯著提升，農(nóng)藥的使用量得到降低。桑得福等[19]的研究表明，在黃芪上施用沼液對(duì)于根腐病有很好的防治效果，并且增加沼液灌根次數(shù)，防效幅度隨著增大。同時(shí)從尹芳等[20]研究也可以看出，施用沼液之后大多數(shù)植物的病原菌得到了顯著抑制。

本研究發(fā)現(xiàn)，對(duì)于露地栽培，葡萄葉蟬危害率隨沼液濃度提高而降低，葡萄霜霉病病情指數(shù)在沼液濃度0%～80%范圍內(nèi)隨沼液濃度提高而降低，噴灑沼液原液的病情指數(shù)也低于未噴施沼液。說明在露地栽培條件下噴施沼液對(duì)葡萄葉蟬和葡萄霜霉病均有一定的防治效果，這與邵志鵬[21]露地栽培施用沼液可以減少蟲害、降低葡萄病情指數(shù)的研究結(jié)果一致。由于田間條件下試驗(yàn)環(huán)境相對(duì)不穩(wěn)定，易受大風(fēng)、降雨等天氣影響，導(dǎo)致試驗(yàn)數(shù)據(jù)有偏差，因而對(duì)葉蟬和霜霉病防治效果的研究增加了溫室內(nèi)的平行試驗(yàn)，可進(jìn)一步完善數(shù)據(jù)。對(duì)于溫室栽培，試驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)溫室中幾乎沒有葉蟬，不像霜霉病等病害在露地和溫室都普遍發(fā)生，葉蟬危害非常輕，數(shù)據(jù)價(jià)值不高，因此本文未對(duì)溫室葉蟬防治效果進(jìn)行討論。葡萄霜霉病病情指數(shù)在對(duì)照組至沼液濃度為80%范圍內(nèi)隨沼液濃度提高而降低，雖然防治效果較露地稍差，但趨勢(shì)與露地栽培結(jié)果一致，也符合劉艷輝[22]施用沼液可以提高溫室葡萄抗病性的結(jié)論。綜合所有試驗(yàn)結(jié)果，噴施沼液原液對(duì)于葡萄葉蟬的防治效果為49.12%；噴施80%濃度沼液可以顯著降低露地栽培和溫室栽培的霜霉病病情指數(shù)，防治效果均超過50%，與嵇東[10]和沈其林等[6]試驗(yàn)結(jié)果一致，說明沼液對(duì)于霜霉病具有較好的防治效果。

4 結(jié)束語

盡管沼液對(duì)于霜霉病具有較好的防治效果，但由于使用的沼液品種單一，沼液主要成分有差異，以及不同病害蟲害的發(fā)病規(guī)律的不一致，沼液的綜合利用效果很難得以全面評(píng)價(jià)。后續(xù)應(yīng)嚴(yán)格控制沼液成分，針對(duì)不同病蟲害開展試驗(yàn)研究，為沼液的綜合利用奠定技術(shù)基礎(chǔ)。