唐文浩 張養(yǎng)東 鄭 楠 王加啟

(中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所，動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部奶及奶制品質(zhì)量安全控制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室(北京)，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部奶產(chǎn)品質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估實(shí)驗(yàn)室(北京)，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部奶及奶制品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試中心(北京)，北京 100193)

隨著畜牧業(yè)生產(chǎn)集約化水平和養(yǎng)殖水平的不斷提高，人們對(duì)優(yōu)質(zhì)牧草的需求日益增加。富含蛋白質(zhì)、常量和微量礦物質(zhì)元素的苜蓿被廣泛應(yīng)用于畜牧業(yè)[1]。苜蓿的粗蛋白質(zhì)含量較高，是在相同生長(zhǎng)環(huán)境條件下的禾本科牧草粗蛋白質(zhì)含量的2.5倍，礦物質(zhì)含量是相同生長(zhǎng)環(huán)境條件下的禾本科牧草的6倍；苜蓿的干物質(zhì)含量約18.5%，并且氨基酸組成平衡，葉酸含量達(dá)4.36 mg/kg、β-胡蘿卜素含量達(dá)94.60 mg/kg，且消化率可達(dá)70%～80%，是世界公認(rèn)的牧草之王[2-3]。將苜蓿進(jìn)行青貯處理制作成苜蓿青貯供動(dòng)物飼用不僅能有效地保存其營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)并延長(zhǎng)其保存時(shí)間，還可以提高其適口性和消化率[4]。苜蓿青貯是奶牛飼養(yǎng)中必不可少的優(yōu)質(zhì)粗飼料，因此科學(xué)地評(píng)價(jià)苜蓿青貯的飼料品質(zhì)，找到適合飼喂奶牛的苜蓿青貯飼料對(duì)奶牛的健康生長(zhǎng)具有非常重要的意義。

1 苜蓿青貯品質(zhì)的評(píng)價(jià)方法

根據(jù)青貯飼料品質(zhì)評(píng)定通用方法，苜蓿青貯品質(zhì)評(píng)價(jià)方式大體上可以分為物理學(xué)評(píng)價(jià)、化學(xué)評(píng)價(jià)和生物學(xué)評(píng)價(jià)3種方法[5]，每種評(píng)價(jià)方法都有其特點(diǎn)和優(yōu)勢(shì)，但僅僅從單一的某一方面來評(píng)價(jià)苜蓿青貯的品質(zhì)是不科學(xué)的，需要通過綜合評(píng)價(jià)所得出的結(jié)論才更準(zhǔn)確，也更具有說服力。

1.1 物理學(xué)評(píng)價(jià)方法

苜蓿青貯的物理學(xué)評(píng)價(jià)主要是對(duì)苜蓿青貯進(jìn)行感官鑒定，在苜蓿青貯的品質(zhì)評(píng)價(jià)中，具有簡(jiǎn)便易行的特點(diǎn)，是評(píng)價(jià)苜蓿青貯最常用的一種評(píng)價(jià)方式[6]。感官觀察法是依靠評(píng)價(jià)人的視覺、嗅覺和觸覺對(duì)苜蓿的顏色、氣味、水分含量、雜草比例和刈割時(shí)期等性狀進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)[7]。品質(zhì)較好的苜蓿青貯顏色與青貯前苜蓿原色相近呈現(xiàn)青綠色或者黃綠色；品質(zhì)中等的苜蓿青貯顏色呈現(xiàn)暗褐色；顏色呈現(xiàn)黑色或者褐色的苜蓿青貯與青貯前苜蓿原料差異較大，品質(zhì)較差，不適宜進(jìn)行飼喂。對(duì)苜蓿青貯的氣味進(jìn)行辨別評(píng)價(jià)，良好的苜蓿青貯氣味較柔，具有酸香味；品質(zhì)中等的苜蓿青貯酸香味道不明顯并出現(xiàn)酒精味；較差品質(zhì)的苜蓿青貯氣味難聞刺鼻，多呈腐敗味，該類型苜蓿青貯多已腐敗變質(zhì)，不能飼喂動(dòng)物。制作良好的苜蓿青貯，拿在手中質(zhì)地柔軟，葉片莖花皆保持青貯前的狀態(tài)，能清晰地看出莖葉的葉脈，葉片結(jié)構(gòu)保持良好；質(zhì)量較差的苜蓿青貯，用手握緊多呈現(xiàn)凝集成團(tuán)或過分松散干燥，凝集狀態(tài)越明顯表示其腐敗的可能性越大，造成這種現(xiàn)象的原因多是因水分過多或過少造成，這種苜蓿青貯不能進(jìn)行利用。

在國(guó)際上，德國(guó)農(nóng)業(yè)協(xié)會(huì)對(duì)青貯的氣味、結(jié)構(gòu)和色澤3項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行評(píng)分，制定的DLG評(píng)分法[8]，將青貯分為優(yōu)良、尚好、中等和腐敗4個(gè)級(jí)別(表1)。

表1 德國(guó)農(nóng)業(yè)協(xié)會(huì)青貯飼料感官評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)

目前我國(guó)還未對(duì)苜蓿青貯的感官評(píng)價(jià)制定統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)，現(xiàn)行多為地方標(biāo)準(zhǔn)，各地執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)不同，如需對(duì)苜蓿青貯進(jìn)行進(jìn)一步的評(píng)價(jià)，還應(yīng)針對(duì)苜蓿青貯進(jìn)行化學(xué)性評(píng)價(jià)。

1.2 化學(xué)評(píng)價(jià)方法

苜蓿青貯的化學(xué)評(píng)價(jià)是指運(yùn)用化學(xué)分析方法對(duì)苜蓿青貯進(jìn)行分析，通過其所含營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)含量的不同，對(duì)苜蓿青貯品質(zhì)進(jìn)行評(píng)價(jià)。

1.2.1 概略養(yǎng)分分析法

目前國(guó)內(nèi)外對(duì)飼料的化學(xué)成分分析方法，主要都是對(duì)苜蓿青貯飼料進(jìn)行概略養(yǎng)分分析，測(cè)定出六大概略養(yǎng)分(水分、粗蛋白質(zhì)、粗纖維、粗脂肪、粗灰分和無氮浸出物)，在根據(jù)其含量，對(duì)苜蓿青貯品質(zhì)進(jìn)行分級(jí)。用概略養(yǎng)分分析法對(duì)苜蓿青貯的評(píng)價(jià)過于單一，后來Van Soest對(duì)粗纖維的測(cè)定進(jìn)行了改進(jìn)，提出了中性洗滌纖維和酸性洗滌纖維的概念[9]，這克服了傳統(tǒng)方法測(cè)得的粗纖維含量低于實(shí)際含量的弊端，進(jìn)一步提升了概略養(yǎng)分分析法對(duì)苜蓿青貯品質(zhì)評(píng)定的準(zhǔn)確性。但對(duì)于復(fù)雜的反芻動(dòng)物，只通過評(píng)判苜蓿青貯的常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分來對(duì)其進(jìn)行評(píng)價(jià)是不夠全面的，因此只考慮苜蓿青貯的概略養(yǎng)分來評(píng)價(jià)苜蓿青貯是不準(zhǔn)確的。

我國(guó)苜蓿青貯品質(zhì)主要依靠2018年頒布的內(nèi)蒙古地方標(biāo)準(zhǔn)——《苜蓿青貯飼料質(zhì)量分級(jí)》(DB15/T 1455—2018，表2)和2019年頒布的河南省地方標(biāo)準(zhǔn)——《苜蓿青貯料質(zhì)量分級(jí)》(DB41/T 1906—2019，表3)來評(píng)價(jià)。

1.2.2 康奈爾凈碳水化合物-凈蛋白質(zhì)體系(CNCPS)分析法

20世紀(jì)90年代，美國(guó)康奈爾大學(xué)提出一種基于反芻動(dòng)物瘤胃降解特征的動(dòng)態(tài)評(píng)價(jià)體系，稱CNCPS，現(xiàn)廣泛用于對(duì)飼料品質(zhì)的評(píng)價(jià)，在美國(guó)和加拿大應(yīng)用較多[10]。CNCPS分析法將飼料的化學(xué)成分與反芻動(dòng)物的消化相結(jié)合，并對(duì)飼料的成分進(jìn)行更詳細(xì)的分類，精確地反映出反芻動(dòng)物對(duì)飼料營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的利用。該方法對(duì)評(píng)定苜蓿青貯的品質(zhì)有著指導(dǎo)作用，為合理利用苜蓿青貯提供了依據(jù)。

1.2.3 近紅外反射光譜(NIRS)分析法

NIRS技術(shù)最早用于谷物的干物質(zhì)和粗蛋白質(zhì)含量的測(cè)定，由美國(guó)農(nóng)業(yè)部的Norris開發(fā)[11]。隨著NIRS技術(shù)的成熟與發(fā)展，我國(guó)在20世紀(jì)80年代也對(duì)NIRS技術(shù)有了初步研究，并在我國(guó)農(nóng)業(yè)領(lǐng)域廣泛應(yīng)用[12]。NIRS的原理是根據(jù)每種飼料的成分及含量差異對(duì)近紅外光線的吸收波長(zhǎng)不同，從而預(yù)測(cè)飼料中有機(jī)成分的含量，對(duì)飼料營(yíng)養(yǎng)價(jià)值進(jìn)行評(píng)價(jià)[13-14]。NIRS技術(shù)有著快速、精準(zhǔn)和簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)，可以實(shí)現(xiàn)飼料營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)檢測(cè)快速化[15]。目前，NIRS技術(shù)在青貯飼料的品質(zhì)評(píng)價(jià)上已經(jīng)廣泛應(yīng)用，并且建立了苜蓿青貯飼料的纖維消化數(shù)學(xué)模型。Nousiainen等[16]運(yùn)用NIRS技術(shù)，對(duì)青貯飼料中難消化中性洗滌纖維(INDF)和可消化中性洗滌纖維(DNDF)含量進(jìn)行預(yù)測(cè)，將青貯飼料的品質(zhì)進(jìn)行分級(jí)。S?rensen[17]還通過NIRS技術(shù)預(yù)測(cè)青貯飼料中乳酸、乙酸和氨態(tài)氮含量以及pH。NIRS技術(shù)有很大的前景，但在測(cè)定青貯飼料實(shí)際操作過程中，還需要建立可靠的樣本模型庫(kù)，并建立穩(wěn)定準(zhǔn)確的校正模型。

表2 苜蓿青貯飼料質(zhì)量分級(jí)

表3 苜蓿青貯料質(zhì)量分級(jí)

1.2.4 乙酸丁酸含量評(píng)價(jià)法

Kaiser等[18]認(rèn)為，青貯過程中產(chǎn)生的乙酸含量的高低，表示青貯飼料有氧穩(wěn)定性的好壞以及青貯飼料的保存情況；丁酸的含量代表青貯飼料的發(fā)酵品質(zhì)，將兩者綜合評(píng)分，提出用乙酸和丁酸作為指標(biāo)對(duì)青貯飼料進(jìn)行評(píng)價(jià)。該方法適用于包含苜蓿青貯在內(nèi)的所有青貯飼料的品質(zhì)評(píng)定(表4)，我國(guó)曾經(jīng)制定的青貯飼料質(zhì)量評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)(試行)也將乙酸和丁酸含量作為評(píng)價(jià)指標(biāo)[19]。

表4 乙酸丁酸含量評(píng)價(jià)法

1.2.5 安全性指標(biāo)評(píng)價(jià)

對(duì)于青貯飼料的安全性評(píng)價(jià)，主要是對(duì)青貯飼料原料本身和在青貯過程中產(chǎn)生的有害毒素進(jìn)行評(píng)價(jià)。目前我國(guó)的飼料衛(wèi)生評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)(GB 13078—2017)僅僅對(duì)部分飼料原料和飼料產(chǎn)品中的有害毒素進(jìn)行規(guī)定，并沒有對(duì)苜蓿青貯類飼料中的有害毒素進(jìn)行限制規(guī)定。

苜蓿在青貯過程中可能產(chǎn)生影響其安全使用的霉菌毒素，種類主要有黃曲霉毒素、毛霉烯、赭曲霉毒素A、伏馬菌素和玉米赤霉烯酮[20]。Ogunade等[21]研究發(fā)現(xiàn)，若制作青貯過程緩慢，裝填壓實(shí)不充分，密封不良等多種原因，出現(xiàn)非厭氧條件，會(huì)創(chuàng)造有利于霉菌和霉菌毒素產(chǎn)生的微環(huán)境。當(dāng)反芻動(dòng)物與霉菌毒素長(zhǎng)期接觸時(shí)，會(huì)對(duì)接觸動(dòng)物的健康產(chǎn)生嚴(yán)重的影響，如食欲不振、共濟(jì)失調(diào)和免疫抑制等，還會(huì)降低其生產(chǎn)性能，造成經(jīng)濟(jì)損失。霉菌毒素也會(huì)影響動(dòng)物副產(chǎn)品，受污染的畜產(chǎn)品被人食用后也會(huì)對(duì)人造成危害。我國(guó)為保證食品安全對(duì)于乳及乳制品中的黃曲霉毒素限定小于0.5 μg/kg[《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中真菌毒素限量》(GB 2761—2017)]。

苜蓿青貯是反芻動(dòng)物飼糧的一種重要組成成分，其安全性關(guān)系著反芻動(dòng)物的健康、畜產(chǎn)品的安全以及人類的健康，所以我們亟需對(duì)苜蓿青貯的安全指標(biāo)評(píng)價(jià)作出限定。

1.3 生物學(xué)評(píng)價(jià)方法

苜蓿青貯的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值評(píng)定除了上述的物理學(xué)評(píng)價(jià)和化學(xué)評(píng)價(jià)外，還需對(duì)其的消化利用效果進(jìn)行評(píng)價(jià)。苜蓿青貯消化效率的高低可以直接反映動(dòng)物對(duì)其養(yǎng)分的吸收利用，從而對(duì)苜蓿青貯自身的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值進(jìn)行評(píng)價(jià)，因此苜蓿青貯的消化率評(píng)價(jià)對(duì)苜蓿青貯的品質(zhì)評(píng)定有十分重要的指導(dǎo)意義。常用的苜蓿青貯消化率的評(píng)價(jià)方法有體內(nèi)飼養(yǎng)試驗(yàn)法、半體內(nèi)尼龍袋法和體外法3種。

1.3.1 飼養(yǎng)試驗(yàn)法

飼養(yǎng)試驗(yàn)是在動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)研究中評(píng)價(jià)飼料最常用、最直觀的評(píng)價(jià)方法，是指在相同條件下因某一不同因素影響，產(chǎn)生不相同的結(jié)果，即不同結(jié)果的產(chǎn)生是由于某一因素的變化所引起的。通過對(duì)比不同組間在生產(chǎn)性能方面的差異，進(jìn)而評(píng)定苜蓿青貯飼料的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值及對(duì)其他飼料的相對(duì)價(jià)值。常用的動(dòng)物飼養(yǎng)消化試驗(yàn)有全收糞法，即通過比較苜蓿青貯中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的攝入量與排出量的差值，來評(píng)價(jià)苜蓿青貯在動(dòng)物體內(nèi)的吸收轉(zhuǎn)化效率。該試驗(yàn)需要準(zhǔn)確測(cè)得試驗(yàn)動(dòng)物食入的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)量，還需要準(zhǔn)確采集試驗(yàn)動(dòng)物排出的糞便，并測(cè)得糞便中的剩余營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)量，根據(jù)公式苜蓿青貯養(yǎng)分表觀消化率=100×[(食入苜蓿青貯中養(yǎng)分含量-糞中養(yǎng)分含量)/食入苜蓿青貯中養(yǎng)分含量]，計(jì)算苜蓿青貯的表觀消化率。

1.3.2 半體內(nèi)尼龍袋法

半體內(nèi)尼龍袋法是一種借助活體瘺管動(dòng)物，將苜蓿青貯飼料裝入特定的尼龍袋中，放入瘺管動(dòng)物瘤胃內(nèi)消化，定時(shí)從瘤胃內(nèi)取出，清洗烘干后，對(duì)尼龍袋中樣品進(jìn)行化學(xué)分析，最后計(jì)算出苜蓿青貯的營(yíng)養(yǎng)成分消化率[22]。20世紀(jì)30年代，Quin等[23]在測(cè)定飼料消化情況時(shí)，把飼料裝入天然絲袋中，放入羊的瘤胃中，進(jìn)行試驗(yàn)。后經(jīng)過?rskov等[24-25]的不斷摸索和改良，最終逐漸推廣應(yīng)用，成為反芻動(dòng)物評(píng)價(jià)飼料營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的常用方法之一[26]。半體內(nèi)尼龍袋法的優(yōu)點(diǎn)是將苜蓿青貯的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值評(píng)定與反芻動(dòng)物瘤胃內(nèi)的微生物進(jìn)行動(dòng)態(tài)結(jié)合，能夠反映飼料在動(dòng)物瘤胃內(nèi)的消化情況，更真實(shí)可靠，更接近飼養(yǎng)試驗(yàn)法。但尼龍袋法受試驗(yàn)動(dòng)物、試驗(yàn)飼糧和技術(shù)操作等不確定因素的影響，造成其結(jié)果的差異性較大,應(yīng)盡早完善制定統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)[27]。

1.3.3 體外法

對(duì)于評(píng)價(jià)苜蓿青貯品質(zhì)的體外研究方法主要可分為批次培養(yǎng)法和連續(xù)培養(yǎng)法。

批次培養(yǎng)法是將飼料樣品與瘤胃液相結(jié)合，在體外模擬瘤胃消化飼料過程，最后對(duì)底物進(jìn)行分析或收集產(chǎn)氣量，主要包括兩步法和產(chǎn)氣法[28-29]。兩步法模擬反芻動(dòng)物消化方式，首先將苜蓿青貯與采集的新鮮瘤胃液進(jìn)行混合進(jìn)行體外消化，然后再向其加入胃蛋白酶和鹽酸對(duì)飼料樣品進(jìn)一步消化，最后對(duì)飼料殘?jiān)M(jìn)行分析，測(cè)定體外消化后苜蓿青貯中營(yíng)養(yǎng)成分含量和消化率評(píng)定其品質(zhì)[30]。Murphy等[31]研究發(fā)現(xiàn)，用兩步法與尼龍袋法測(cè)得結(jié)果的相關(guān)系數(shù)為0.81。兩步法更全面地模擬了動(dòng)物消化飼料的過程，包含動(dòng)物的瘤胃消化、真胃與部分小腸的消化，對(duì)苜蓿青貯消化率的預(yù)測(cè)準(zhǔn)確性更高，應(yīng)用更廣，但兩步法不能反映苜蓿青貯在反芻動(dòng)物中的動(dòng)態(tài)降解信息，還存在一些弊端。

體外產(chǎn)氣法是由Menke等[32]建立的一種通過測(cè)定飼料樣品在體外與瘤胃液混合消化后所產(chǎn)生的氣體的多少及計(jì)算產(chǎn)生氣體(二氧化碳和甲烷)的比例，來評(píng)估飼料品質(zhì)的快速方法。另有大量研究表明，體外產(chǎn)氣法不僅用于飼料的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值評(píng)定，還可利用此法評(píng)價(jià)飼草間的組合效應(yīng)[33]，預(yù)測(cè)動(dòng)物采食量和甲烷排放量[34]。體外產(chǎn)氣法根據(jù)測(cè)定產(chǎn)氣方式的不同，分為注射器式產(chǎn)氣記錄方法和壓力傳感器轉(zhuǎn)換產(chǎn)氣量測(cè)定方法[35]。德國(guó)霍恩海姆(Hohenheim)大學(xué)的研究人員將飼料樣品與瘤胃液裝入100 mL的注射器中進(jìn)行發(fā)酵，通過測(cè)量注射器活塞被推動(dòng)的情況，記錄產(chǎn)氣量，取得了良好效果；后經(jīng)過不斷的發(fā)展進(jìn)步，并隨著計(jì)算機(jī)程序的融合，產(chǎn)氣法逐漸由手動(dòng)記錄到半自動(dòng)記錄再到全自動(dòng)記錄的發(fā)展[36-38]。我國(guó)應(yīng)用產(chǎn)氣法也進(jìn)行了大量的試驗(yàn)研究，自1990年以來，取得了巨大的發(fā)展，由中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)楊紅建教授自主研發(fā)的AGRS-Ⅲ型體外發(fā)酵自動(dòng)記錄裝置(國(guó)家發(fā)明專利授權(quán)號(hào)：ZL200610011301.X)對(duì)我國(guó)應(yīng)用產(chǎn)氣法評(píng)價(jià)苜蓿青貯品質(zhì)提供了良好的試驗(yàn)條件[39]。

體外產(chǎn)氣法操作簡(jiǎn)單，重復(fù)性好，也能較真實(shí)地模擬瘤胃環(huán)境，但此方法和兩步法都屬于靜態(tài)發(fā)酵，試驗(yàn)過程中底物與產(chǎn)物不能分離，可能會(huì)引起試驗(yàn)條件下微生物環(huán)境的改變，造成產(chǎn)物抑制，而且此方法也不能反映瘤胃的動(dòng)態(tài)降解信息，造成對(duì)苜蓿青貯的品質(zhì)評(píng)價(jià)不準(zhǔn)確[40]。有研究發(fā)現(xiàn)，在用體外法評(píng)價(jià)青貯飼料時(shí)，對(duì)青貯飼料進(jìn)行烘干前處理會(huì)造成發(fā)酵產(chǎn)物的損失，低估青貯的營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)[41]。此外，飼料的碳水化合物與體外產(chǎn)氣關(guān)系密切，但與飼料粗蛋白質(zhì)含量關(guān)系小，故在評(píng)價(jià)蛋白質(zhì)含量高的青貯時(shí)，不能只注重產(chǎn)氣量來評(píng)價(jià)青貯品質(zhì)，還需要結(jié)合揮發(fā)性脂肪酸等指標(biāo)綜合判定，才能更準(zhǔn)確地評(píng)價(jià)青貯品質(zhì)。

連續(xù)培養(yǎng)法是一種將飼料樣品連續(xù)的與瘤胃液、人工唾液相混合，使其保持一種持續(xù)發(fā)酵狀態(tài)，在體外模擬瘤胃環(huán)境的裝置。我國(guó)對(duì)于連續(xù)培養(yǎng)法的研究探索最早是20世紀(jì)80年代，施學(xué)仕[42]設(shè)計(jì)的一種半自動(dòng)人工瘤胃系統(tǒng)，用來進(jìn)行體外試驗(yàn)的初步探索，在此方法出現(xiàn)之前國(guó)內(nèi)的研究多是使用批次培養(yǎng)法[43]。1995年，連續(xù)培養(yǎng)法進(jìn)一步發(fā)展，由王加啟等[44]設(shè)計(jì)了一種可同時(shí)進(jìn)行6組試驗(yàn)的連續(xù)培養(yǎng)人工模擬瘤胃裝置(RSI系統(tǒng))。1999年，孟慶翔[45]總結(jié)前人經(jīng)驗(yàn)，設(shè)計(jì)了DFCCS-Ⅱ型雙外流連續(xù)培養(yǎng)系統(tǒng)，該系統(tǒng)將發(fā)酵罐增加到了12個(gè)，提高了試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。2012年，沈維軍等[46]在前人的基礎(chǔ)上設(shè)計(jì)了雙外流連續(xù)培養(yǎng)裝置，該裝置克服了連續(xù)培養(yǎng)法在發(fā)酵罐的溫度控制和產(chǎn)物外流過程容易堵塞等問題，能準(zhǔn)確地模擬瘤胃內(nèi)環(huán)境，穩(wěn)定性更好[47]。但各個(gè)實(shí)驗(yàn)室在連續(xù)培養(yǎng)法操作過程中的運(yùn)行參數(shù)不一，設(shè)計(jì)也存在較大差異，這限制了連續(xù)培養(yǎng)法在苜蓿青貯評(píng)價(jià)上的推廣應(yīng)用。在實(shí)際應(yīng)用中，應(yīng)統(tǒng)一優(yōu)化人工瘤胃模擬技術(shù)，使其能更好地運(yùn)用在苜蓿青貯的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值評(píng)價(jià)上。

2 苜蓿青貯品質(zhì)評(píng)定綜合指標(biāo)

苜蓿青貯品質(zhì)評(píng)定綜合指標(biāo)，已經(jīng)成為確定苜蓿青貯品質(zhì)的另一大關(guān)鍵因素。我國(guó)尚未有只針對(duì)于苜蓿青貯品質(zhì)評(píng)定的綜合評(píng)判指標(biāo)，目前多應(yīng)用粗飼料的綜合評(píng)定指標(biāo)粗飼料相對(duì)質(zhì)量(relative feed quality，RFQ)[48]和粗飼料分級(jí)指數(shù)(grading index，GI)[49]來評(píng)價(jià)苜蓿青貯品質(zhì)。

RFQ指標(biāo)是根據(jù)飼料相對(duì)價(jià)值(relative feed value，RFV)[50]的基礎(chǔ)上建立的通過可消化營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)預(yù)測(cè)粗飼料的可利用能來對(duì)牧草品質(zhì)進(jìn)行劃分，其計(jì)算公式為：

RFQ=DMI(% BW)×TDN(% DM)/1.23。

式中：DMI為干物質(zhì)隨意采食量(% BW)；TDN為總可消化營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)含量(% DM)；除數(shù)1.23是根據(jù)Moore等[51]測(cè)得的29種牧草的數(shù)據(jù)得出，將RFV除數(shù)1.29乘以0.95得到RFQ除數(shù)1.23。

GI是根據(jù)我國(guó)粗飼料現(xiàn)狀由紅敏等[52]提出的一個(gè)全新的品質(zhì)評(píng)價(jià)綜合指數(shù)，其計(jì)算公式為：

GI(MJ/d)=NEL×DMI×DCP/(1-pef)×NDF。

式中：NEL為產(chǎn)奶凈能；DMI為干物質(zhì)隨意采食量(kg/d)；DCP為可消化粗蛋白質(zhì)含量(% DM)；pef為物理有效因子；NDF為中性洗滌纖維含量(% DM)。

GI法的優(yōu)點(diǎn)是在評(píng)價(jià)飼料時(shí)綜合考慮能量和可消化粗蛋白質(zhì)，并考慮物理有效中性洗滌纖維含量，使其評(píng)定更合理準(zhǔn)確，更符合實(shí)際情況。

3 小結(jié)與展望

隨著我國(guó)畜牧業(yè)對(duì)苜蓿青貯的使用越來越廣泛，對(duì)苜蓿青貯品質(zhì)評(píng)定的準(zhǔn)確與否成為其合理利用的關(guān)鍵性限制因素。運(yùn)用單一指標(biāo)難以準(zhǔn)確真實(shí)的對(duì)苜蓿青貯進(jìn)行品質(zhì)評(píng)定，不但應(yīng)將苜蓿青貯的營(yíng)養(yǎng)成分、消化率和發(fā)酵指標(biāo)等綜合考慮，還應(yīng)該考慮苜蓿青貯飼喂動(dòng)物后對(duì)動(dòng)物健康的影響。動(dòng)物的健康是苜蓿青貯品質(zhì)評(píng)價(jià)的基礎(chǔ)，因此建立起一套適合我國(guó)的苜蓿青貯品質(zhì)綜合評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)我國(guó)草業(yè)和畜牧業(yè)的高速高質(zhì)發(fā)展至關(guān)重要。