陳玉芊，王世軍，王 欣，徐修禮

1.西安區(qū)域醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心，陜西西安 710116；2.蘭州市肺科醫(yī)院檢驗(yàn)科，甘肅蘭州 730046；3.甘肅省人民醫(yī)院檢驗(yàn)中心，甘肅蘭州 730013

結(jié)核病已經(jīng)成為一個(gè)全球性公共衛(wèi)生問(wèn)題，且近些年來(lái)其發(fā)病率又呈現(xiàn)出上升趨勢(shì)[1]。根據(jù)發(fā)病部位不同臨床將結(jié)核病分為肺結(jié)核、肺外結(jié)核兩大類，隨著病程的延長(zhǎng)將會(huì)加大并發(fā)癥發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，甚至危及患者生命安全[2]。然而，結(jié)核病并非不可治愈，接受規(guī)范的、系統(tǒng)的抗結(jié)核治療，絕大多數(shù)患者預(yù)后較好，但實(shí)現(xiàn)該目的的前提在于早發(fā)現(xiàn)、早診斷[3]。目前，臨床中采用的痰涂片鏡檢、結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)或靈敏度低，或耗時(shí)長(zhǎng)，難以滿足臨床快速檢測(cè)的需要[4]。即使結(jié)核分枝桿菌DNA檢測(cè)速度更快、靈敏度更高，但依然有50%的結(jié)核病患者無(wú)法通過(guò)該方法確診[5]。干擾素誘導(dǎo)的T細(xì)胞α亞族趨化因子(I-TAC)為近期國(guó)外研究發(fā)現(xiàn)的鑒定結(jié)核病的潛在生物標(biāo)志物之一，能夠準(zhǔn)確區(qū)分結(jié)核病與非結(jié)核病患者，但國(guó)內(nèi)鮮有此方面的臨床研究，故本研究對(duì)此展開分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2019年6月至2020年6月蘭州市肺科醫(yī)院收治的80例結(jié)核病患者為觀察組，同期80例非結(jié)核病患者為對(duì)照組。觀察組中男45例，女35例；年齡48～69歲，平均(56.87±2.43)歲；肺結(jié)核65例(活動(dòng)性肺結(jié)核48例、非活動(dòng)性肺結(jié)核17例)，肺外結(jié)核15例；病程1～3個(gè)月，平均(1.85±0.25)個(gè)月；有吸煙史44例，無(wú)吸煙史36例；有飲酒史35例，無(wú)飲酒史45例。對(duì)照組中男48例，女32例；年齡50～68歲，平均(56.79±2.51)歲；肺癌10例，支氣管擴(kuò)張15例，肺炎21例，慢性阻塞性肺疾病34例；病程1個(gè)月至10年，平均(5.45±1.11)年；有吸煙史45例，無(wú)吸煙史35例；有飲酒史30例，無(wú)飲酒史50例。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)結(jié)核病患者與非結(jié)核病患者均經(jīng)結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)證實(shí)；(2)年齡18歲及以上；(3)具有良好的認(rèn)知能力，能夠配合標(biāo)本采集；(4)知曉研究方案內(nèi)容，且自愿參與。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)研究開始前服用過(guò)影響I-TAC、白細(xì)胞介素(IL)-1家族第7因子、人胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白5(IGFBP-5)檢測(cè)結(jié)果的藥物，如干擾素、生長(zhǎng)因子類藥物、重組蛋白質(zhì)藥物等；(2)血行播散性肺結(jié)核患者；(3)伴有攻擊傾向的精神障礙患者。兩組患者除結(jié)核病類型、病程外的一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，有可比性。本研究通過(guò)蘭州市肺科醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審批。

1.2標(biāo)本采集 采集兩組患者的痰液標(biāo)本，方法為自然咳嗽法，痰液標(biāo)本量≥1 mL。在痰液采集前利用復(fù)方氯己定含漱液反復(fù)漱口。叮囑患者深呼吸后用力咳嗽，盡量將位于氣道深部的痰液排出，將痰液標(biāo)本轉(zhuǎn)移至無(wú)菌培養(yǎng)盒中，精確稱重后按照1∶4比例加入1%二硫蘇糖醇，適度用力混勻后將混合溶液置于FYL-YS-430L恒溫箱中，37 ℃孵育15 min。利用Oven螺旋振蕩器振蕩15 s。再次向混合溶液中加入4倍痰液體積的磷酸鹽緩沖液(0.2 mol/L，pH值為7.4)，混勻后置于TD-5M-I醫(yī)用離心機(jī)中以3 000 r/min離心10 min，收集上清液。

1.3檢測(cè)方法 采用IGFBP-5酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)試劑盒、I-TAC ELISA試劑盒分別對(duì)I-TAC、IGFBP-5進(jìn)行檢測(cè)。IL-1家族第7因子采用人IL-1家族細(xì)胞因子抗體芯片測(cè)定，檢測(cè)方法為雙抗體夾心法。

1.4觀察指標(biāo) 比較兩組患者I-TAC、IL-1家族第7因子、IGFBP-5水平及陽(yáng)性率，并分析3項(xiàng)指標(biāo)診斷結(jié)核病的靈敏度、特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值。靈敏度=真陽(yáng)性例數(shù)/(真陽(yáng)性例數(shù)+假陰性例數(shù))×100%。特異度=真陰性例數(shù)/(真陰性例數(shù)+假陽(yáng)性例數(shù))×100%。陽(yáng)性預(yù)測(cè)值=真陽(yáng)性例數(shù)/(真陽(yáng)性例數(shù)+假陽(yáng)性例數(shù))×100%。陰性預(yù)測(cè)值=真陰性例數(shù)/(真陰性例數(shù)+假陰性例數(shù))×100%。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS25.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計(jì)分析。不符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以M(P25,P75)表示，組間比較采用非參數(shù)秩和檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以例數(shù)或百分率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。以P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1兩組患者3項(xiàng)指標(biāo)水平比較 觀察組的I-TAC、IL-1家族第7因子、IGFBP-5水平均明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

表1 兩組患者3項(xiàng)指標(biāo)水平比較[M(P25,P75)，pg/mL]

2.2兩組患者3項(xiàng)指標(biāo)的陽(yáng)性率比較 觀察組的I-TAC、IL-1家族第7因子、IGFBP-5陽(yáng)性率均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

表2 兩組患者3項(xiàng)指標(biāo)的陽(yáng)性率比較[n(%)]

2.33項(xiàng)指標(biāo)的結(jié)核病診斷效能 I-TAC、IL-1家族第7因子、IGFBP-5診斷結(jié)核病的結(jié)果與結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)結(jié)果的對(duì)照見表3～5，I-TAC診斷結(jié)核病的靈敏度、特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值均高于IL-1家族第7因子和IGFBP-5，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表6。

表3 I-TAC檢測(cè)與結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)結(jié)果比較(n)

表4 IL-1家族第7因子檢測(cè)與結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)結(jié)果對(duì)照(n)

表5 IGFBP-5檢測(cè)與結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)結(jié)果對(duì)照(n)

表6 3項(xiàng)指標(biāo)的結(jié)核病診斷效能(%)

3 討 論

結(jié)核病是一種古老且曾經(jīng)在全球擴(kuò)散傳播的傳染性疾病，由感染結(jié)核分枝桿菌所致，可侵襲人體的多個(gè)組織器官，其中尤以肺部侵襲最為常見，既往被醫(yī)學(xué)界稱之為“白色瘟疫”[6-7]，根據(jù)病變部位可以分為肺結(jié)核及肺外結(jié)核，進(jìn)一步可以細(xì)分為肺結(jié)核、淋巴結(jié)核、骨骼結(jié)核等[8]。人體感染結(jié)核分枝桿菌后并不一定發(fā)病，而是在機(jī)體免疫力下降、細(xì)胞介導(dǎo)的變態(tài)反應(yīng)發(fā)生時(shí)才會(huì)起病，并且絕大多數(shù)患者經(jīng)過(guò)合理的抗結(jié)核治療可以獲得臨床痊愈[9]。然而，結(jié)核病患者的癥狀表現(xiàn)多樣且缺乏特異性，患者自己容易忽視?；顒?dòng)性肺結(jié)核患者的結(jié)核分枝桿菌毒力強(qiáng)、繁殖活躍，容易形成擴(kuò)散及群體性暴發(fā)事件，故及早診斷成為有效治療及預(yù)防結(jié)核病傳播的重中之重[10]。

痰涂片鏡檢、結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)為當(dāng)前臨床診斷結(jié)核病的常用手段，對(duì)指導(dǎo)臨床治療起到了重要作用[11]。然而，痰涂片鏡檢結(jié)果依賴于檢驗(yàn)人員的業(yè)務(wù)技能水平，靈敏度處于較低水平，而結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)則暴露出了耗時(shí)長(zhǎng)的問(wèn)題，使以上兩種方法難以作為常規(guī)檢查項(xiàng)目得到推廣使用[12]。故臨床迫切需要一種操作簡(jiǎn)便、成本低廉、結(jié)果可靠的診斷方法。近年來(lái)，雖然已經(jīng)有結(jié)核病、活動(dòng)性肺結(jié)核相關(guān)的生物標(biāo)志物的研究報(bào)道，但距離臨床應(yīng)用尚需要較長(zhǎng)時(shí)間[13-14]。采集痰液標(biāo)本具有方便、患者依從性高的優(yōu)點(diǎn)，基于痰液標(biāo)本的蛋白質(zhì)檢測(cè)技術(shù)引起了臨床的高度重視，目前已經(jīng)從痰上清液中發(fā)現(xiàn)了640余種人類蛋白質(zhì)，其中不乏與結(jié)核病密切相關(guān)的蛋白質(zhì)[15]。

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，觀察組I-TAC、IL-1家族第7因子、IGFBP-5水平及陽(yáng)性率明顯高于對(duì)照組(P<0.05)，表明以上3種蛋白質(zhì)可以被用于區(qū)分結(jié)核病與非結(jié)核病。在診斷效能方面，I-TAC的靈敏度、特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值均高于IL-1家族第7因子和IGFBP-5(P<0.05)。由以上結(jié)果可知，在結(jié)核病診斷中I-TAC的診斷效能高，能夠滿足臨床診斷需求，不失為一種良好的生物標(biāo)志物，且其所具有的診斷效能較IL-1家族第7因子、IGFBP-5更高?？偨Y(jié)原因如下：IL-1家族第7因子、IGFBP-5水平與痰上清液標(biāo)本量密切相關(guān)，當(dāng)標(biāo)本量較少時(shí)將會(huì)導(dǎo)致以上蛋白質(zhì)難以被檢測(cè)到，削弱了2項(xiàng)指標(biāo)的應(yīng)用價(jià)值。I-TAC為單核細(xì)胞釋放的一種蛋白質(zhì)，結(jié)核病起病后，在炎性反應(yīng)刺激下細(xì)胞因子快速釋放，由此導(dǎo)致外源性腫瘤壞死因子急劇升高，后者將會(huì)激活單核細(xì)胞并源源不斷地釋放出I-TAC。此外，結(jié)核分枝桿菌侵襲重要臟器期間將會(huì)誘發(fā)明顯的感染性病變，類型包括炎癥滲出、增殖或壞死，由此導(dǎo)致內(nèi)源性炎癥因子水平隨之升高[16]。在內(nèi)源性及外源性腫瘤壞死因子雙重刺激下，I-TAC水平明顯上升，且該指標(biāo)水平與痰液標(biāo)本量無(wú)關(guān)，故對(duì)診斷結(jié)核病具有較高的靈敏度及特異度。

綜上所述，在結(jié)核病診斷中I-TAC的診斷效能比IL-1家族第7因子、IGFBP-5高，可作為結(jié)核病診斷的優(yōu)選標(biāo)志物加以使用。