武麗達(dá)，沈雪梅，楊鑫，魏超，王琪，

陳 影1，盧宗梅1，李義1，2，佟毅1，2，楊凱3，金渭武3，4*

（1.中糧生物科技股份有限公司，安徽蚌埠 233010；2.玉米深加工國(guó)家工程研究中心，吉林長(zhǎng)春 130033；3.中糧營(yíng)養(yǎng)健康研究院有限公司，北京 102209；4.中糧生物科技（北京）有限公司，北京 102209）

丁酸梭菌能夠調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)平衡，產(chǎn)生益生物質(zhì)，增強(qiáng)免疫功能，促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)，在畜禽生產(chǎn)中被廣泛應(yīng)用（張自杰等，2021；張善亭等，2013）。劉婷婷（2011）研究發(fā)現(xiàn)，在日糧中添加丁酸梭菌可以降低肉雞盲腸中大腸桿菌、沙門氏菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌的數(shù)量，顯著改善肉雞腸道菌群和提高日增重。周奕含（2021）在肉雞日糧中添加不同比例的丁酸梭菌，結(jié)果顯示丁酸梭菌能有效調(diào)節(jié)肉仔雞的血脂水平，減少炎癥反應(yīng)發(fā)生并提高紅細(xì)胞和血紅蛋白含量，增強(qiáng)肉雞的免疫功能。但是，不同丁酸梭菌菌株在養(yǎng)殖中的作用效果存在差異，新開(kāi)發(fā)的丁酸梭菌菌劑在規(guī)?；瘧?yīng)用前仍需要進(jìn)行動(dòng)物飼喂評(píng)價(jià)。

黑曲霉作為生物技術(shù)領(lǐng)域中重要的微生物之一，已被廣泛應(yīng)用于發(fā)酵生產(chǎn)胞外酶和檸檬酸（Cairns等，2018）。黑曲霉發(fā)酵生產(chǎn)檸檬酸會(huì)產(chǎn)生大量的廢棄菌絲體，其具有附加值高、來(lái)源廣泛、品質(zhì)穩(wěn)定等特點(diǎn)，在動(dòng)物養(yǎng)殖中具有良好應(yīng)用前景。但目前酶解黑曲霉菌絲體的工藝及其在動(dòng)物養(yǎng)殖中的進(jìn)展仍比較緩慢，用于肉雞養(yǎng)殖試驗(yàn)的報(bào)道也不多。因此，本研究以白羽肉雞為研究對(duì)象，在基礎(chǔ)日糧中添加丁酸梭菌菌劑或黑曲霉菌絲體（酶解處理或不處理），探究其對(duì)肉雞生產(chǎn)性能、抗氧化及免疫功能和腸道形態(tài)方面的影響，為丁酸梭菌和酶解黑曲霉菌絲體在肉雞養(yǎng)殖中的應(yīng)用提供試驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 丁酸梭菌菌劑1 由中糧生物科技股份有限公司采購(gòu)，活菌數(shù)含量為20 億cfu/g；丁酸梭菌菌劑2 由中糧生物科技股份有限公司制備，活菌數(shù)含量為16 億cfu/g。黑曲霉菌絲體由中糧生物科技股份有限公司提供，酶解黑曲酶菌絲體（含水量10%）由中糧營(yíng)養(yǎng)健康研究院基于自主研發(fā)的專利技術(shù)制備（劉穎慰等，2021），即采用酶解液處理廢棄黑曲霉菌絲體，所得產(chǎn)物中平均可溶性還原糖含量為5.90 mg/mL，寡糖含量為12.16 mg/mL。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 試驗(yàn)采用單因子完全隨機(jī)試驗(yàn)設(shè)計(jì)，將480 只健康A(chǔ)A 白羽肉雞公雛隨機(jī)分為5 個(gè)處理，每個(gè)處理6 個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)16 只肉雛雞，各組間初始重差異均不顯著（P ＞0.05）。對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)日糧，試驗(yàn)1 組在基礎(chǔ)日糧中添加130 mg/kg 丁酸梭菌1（20 億cfu/g）；試驗(yàn)2 組在基礎(chǔ)日糧中添加160 mg/kg 丁酸梭菌2（16 億cfu/g），試驗(yàn)3 組在基礎(chǔ)日糧中添加0.6%黑曲霉菌絲體（酶解處理）；試驗(yàn)4 組在基礎(chǔ)日糧中添加0.6%黑曲霉菌絲體。試驗(yàn)分兩階段進(jìn)行，即1～ 21 d 和22～ 42 d。

1.3 試驗(yàn)日糧 參照我國(guó)肉雞營(yíng)養(yǎng)需要（NY/T 33-2004）和美國(guó)NRC（1994）肉仔雞營(yíng)養(yǎng)需要標(biāo)準(zhǔn)配制玉米-豆粕型基礎(chǔ)日糧，分前期（1～21 d）和后期（22～42 d）兩個(gè)階段，其原料組成和營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)）

1.4 飼養(yǎng)管理 本試驗(yàn)在中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院飼料研究所南口中試基地試驗(yàn)雞場(chǎng)進(jìn)行，時(shí)間為2020年9 月28 日到2020 年11 月9 日。采用單層式籠養(yǎng)，自由采食和飲水。雛雞1～4 日齡24 h 光照，其后23 h 光照?？刂粕醿?nèi)溫度和濕度，定時(shí)舍內(nèi)消毒。每日觀察試驗(yàn)雞的精神狀態(tài)、食欲及糞便情況，記錄死亡只數(shù)。按常規(guī)程序進(jìn)行預(yù)防免疫。飼養(yǎng)管理參照《愛(ài)拔益加肉雞飼養(yǎng)管理規(guī)程》進(jìn)行。

1.5 測(cè)定指標(biāo)與方法

1.5.1 生長(zhǎng)性能 分別在1、21、42 日齡以重復(fù)為單位對(duì)肉雞進(jìn)行稱重，統(tǒng)計(jì)肉仔雞1～21、22～42、1～42 日齡采食量，并計(jì)算平均日采食量（ADFI）、平均日增重（ADG）、料重比（F/G）和平均體重（BW）。

1.5.2 血清采集及生化指標(biāo)測(cè)定 分別在21、42日齡時(shí)，每個(gè)重復(fù)挑選接近平均體重的肉雞1只，屠宰采集頸動(dòng)脈血5 mL，4 ℃、3000 r/min 離心10 min，取上層血清，置于-20 ℃保存?zhèn)溆?。選用南京建成生物功能研究所試劑盒測(cè)定血清中免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白G（IgG）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）的含量。

1.5.3 腸道形態(tài)測(cè)定 采集十二指腸和空腸，標(biāo)本按梯度乙醇系列脫水，用二甲苯清洗并包埋在石蠟中。然后，從石蠟塊上切下三片5 μm 厚的切片，用蘇木精-伊紅染色，并在光學(xué)顯微鏡下觀察。隨機(jī)選擇視野來(lái)測(cè)量絨毛高度（VH）和隱窩深度（CD），并計(jì)算絨毛高度與隱窩深度之比。使用觀測(cè)值的平均值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

1.6 統(tǒng)計(jì)分析 試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SAS 8.0 中one way ANOVA 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，各處理間平均值比較采用Duncan’s 多重比較進(jìn)行差異顯著性檢驗(yàn)，結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，以P <0.05 作為差異顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 丁酸梭菌或黑曲霉菌絲體對(duì)肉仔雞生長(zhǎng)性能的影響 由表2 可知，各試驗(yàn)組的平均日增重、料重比都要優(yōu)于對(duì)照組，其中酶解黑曲霉菌絲體組在平均日采食量、平均日增重、平均體重都有顯著提高（P <0.05），且都優(yōu)于其他試驗(yàn)組。與對(duì)照組相比，酶解黑曲霉菌絲體組1～ 42 d 肉雞平均日增重提高9.6%，料重比降低5.2%。與未處理的黑曲霉菌絲體相比，酶解黑曲霉菌絲體中可溶性還原糖含量增加4.61%，為5.90 mg/mL；寡糖含量增加9.59%，為12.16 mg/mL。寡糖含量增加，可以促進(jìn)肉雞生長(zhǎng)，這與閆冰雪等（2019）用殼寡糖飼喂肉雞顯著提高其1～42 d 體增重的結(jié)果一致，表明酶解黑曲霉菌絲體可以促進(jìn)肉雞生長(zhǎng)。兩組丁酸梭菌處理組在平均日增重、料重比等方面都要優(yōu)于對(duì)照組，全程日增重提高4.6%和6.0%，全程料重比降低2.9%和4.6%，從數(shù)值上看，丁酸梭菌2 的作用效果要好于丁酸梭菌1（但差異不顯著），這與徐明霞等（2021）在飼糧中添加400、600 mg/kg 丁酸梭菌極顯著提高肉雞平均日增重和降低料重比（P <0.01）的結(jié)果相似，表明丁酸梭菌有提高飼料轉(zhuǎn)化率、促進(jìn)肉雞生長(zhǎng)的作用。

2.2 丁酸梭菌或黑曲霉菌絲體對(duì)肉仔雞血清免疫指標(biāo)的影響 由表3 可知，在21 d，兩添加丁酸梭菌組中肉仔雞血清中IgA、IgG 含量均顯著高于對(duì)照組（P <0.05），而添加酶解黑曲霉菌絲體組的肉仔雞，其血清中的IgG 含量也較高。而在42 d，血清中IgA、IgG 在各組之間均無(wú)顯著性差異（P ＞0.05）。由此可知，在早期肉雞日糧中添加丁酸梭菌可以有效提升肉雞免疫能力，維護(hù)機(jī)體健康。

表3 日糧中添加丁酸梭菌菌劑或黑曲霉菌絲體對(duì)肉仔雞免疫球蛋白的影響mg/mL

2.3 丁酸梭菌或黑曲霉菌絲體對(duì)肉仔雞血清抗氧化指標(biāo)的影響 由表4 可知，在21 d，各組肉仔雞血清中的丙二醛含量都非常接近；而兩丁酸梭菌處理組血清中SOD 活力均高于對(duì)照組，但各組之間SOD 水平均無(wú)顯著差異（P ＞0.05）。在42 d，各試驗(yàn)組血清中MDA 含量都顯著低于對(duì)照組（P ＜0.05），而兩添加丁酸梭菌組，其血清中MDA的含量降低最多。除丁酸梭菌1 組雞血清中SOD的活力較高外，其他組都很接近，且各組之間均無(wú)顯著差異（P ＞0.05）。由此可知，在肉雞日糧中添加丁酸梭菌對(duì)其血清中的SOD 水平具有提高的作用，同時(shí)42 d 血清中丙二醛的水平顯著下降，說(shuō)明丁酸梭菌對(duì)肉雞抗氧化性能的提高具有較好的作用。

表4 日糧中添加丁酸梭菌菌劑或黑曲霉菌絲體對(duì)肉仔雞血清抗氧化指標(biāo)的影響

2.4 丁酸梭菌菌劑和黑曲霉菌絲體對(duì)肉仔雞腸道形態(tài)的影響 小腸作為仔雞營(yíng)養(yǎng)成分吸收的主要場(chǎng)所，在營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化吸收過(guò)程中發(fā)揮重要作用。小腸絨毛作為腸黏膜結(jié)構(gòu)的重要組成部分，其高度的變化直接影響小腸消化、吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的能力；絨毛高度的增加會(huì)使小腸接觸營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的面積增大，從而增強(qiáng)小腸對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收。隱窩是腸上皮細(xì)胞分化的部位，其深度反映了隱窩細(xì)胞的增殖率和成熟度，隱窩變淺分泌功能增強(qiáng)。絨毛高度和隱窩深度的比值（V/C）綜合反映了小腸的功能狀況，其下降表明小腸消化、吸收功能下降。

由表5 可知，在21 d，各試驗(yàn)組十二指腸絨毛高度沒(méi)有顯著性差異（P >0.05），添加丁酸梭菌和酶解黑曲霉菌絲體組肉仔雞十二指腸隱窩深度變淺。而相對(duì)于對(duì)照組，添加丁酸梭菌1 組肉仔雞十二指腸隱窩深度顯著變淺（P ＜0.05）。同時(shí)，各處理組相對(duì)于對(duì)照組，十二指腸絨隱比均有提高，且酶解黑曲霉菌絲體組十二指腸絨隱比顯著提高（P ＜0.05）。此外，在21 d，各處理組空腸絨毛高度都有所增長(zhǎng)，但組間差異不明顯（P ＜0.05）；各組間空腸隱窩深度差異不顯著，但添加丁酸梭菌組的空腸隱窩深度變淺。而在42 d，無(wú)論是十二指腸還是空腸，各組小腸形態(tài)指標(biāo)均無(wú)顯著差異（P ＜0.05）。因此，試驗(yàn)表明丁酸梭菌在早期肉仔雞腸道發(fā)育有促進(jìn)作用。

表5 日糧中添加丁酸梭菌菌劑和黑曲霉菌絲體對(duì)肉仔雞腸道形態(tài)的影響

3 結(jié)論

飼料中添加約2.5×105cfu/g 的丁酸梭菌（130 mg/kg 菌劑，含丁酸梭菌20 億cfu/g）可有效提高白羽肉雞的日增重，降低料重比，改善動(dòng)物生長(zhǎng)性能，提高養(yǎng)殖收益。丁酸梭菌還顯著提高了21 日齡肉雞血清中IgG、IgA 的含量，顯著降低了21 日齡肉雞十二指腸隱窩深度，提高絨隱比，表明丁酸梭菌在早期可以提高肉仔雞的免疫力，并改善腸道形態(tài)。同時(shí)，丁酸梭菌還顯著降低了42 日齡肉雞血清中的MDA 含量，提升了SOD 的活性，表明丁酸梭菌在肉雞養(yǎng)殖后期提高機(jī)體抗氧化能力。此外，日糧中添加酶解黑曲霉菌絲體顯著提高了白羽肉雞的生長(zhǎng)性能，表明酶解黑曲霉菌絲體可以促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)。