郭繼娜，劉圣紅

（1.新疆巴音郭楞蒙古自治州食品藥品檢驗(yàn)所，新疆 庫(kù)爾勒 841000；2.新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測(cè)技術(shù)研究所，新疆烏魯木齊 830091）

紅花為菊科紅花屬植物紅花（Carthamus tinctorius L.）的干燥花[1]，具有活血、化瘀和止痛等功效[2]，是我國(guó)傳統(tǒng)中藥材，主要分布于河南、新疆、四川、內(nèi)蒙古、甘肅和云南等地[3]。紅花的化學(xué)成分有黃酮類、生物堿和脂肪酸類等物質(zhì)[4]。目前，研究紅花的栽培技術(shù)[5]、加工技術(shù)[6]、化學(xué)成分[7]以及藥理作用[8]的報(bào)道比較多，但是在對(duì)不同產(chǎn)地紅花的化學(xué)成分比較研究較少。

本文以不同產(chǎn)地的紅花為研究對(duì)象，采用高效液相色譜法對(duì)羥基紅花黃色素A、槲皮素、蘆丁和山柰素等4種化學(xué)成分進(jìn)行測(cè)定和對(duì)比分析，以期為紅花的質(zhì)量評(píng)價(jià)提供參考。

1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器

1.1 樣品

采自河南、云南、新疆和四川等產(chǎn)地的紅花材料，經(jīng)由新疆巴音郭楞蒙古自治州食品藥品檢驗(yàn)所鑒定。樣品編號(hào)和采集地見表1。

表1 紅花樣品來(lái)源信息Table 1 Carthamus tinctorius sample source information

1.2 儀器

Agilent 1220 LC高效液相色譜儀（DAD檢測(cè)器），十萬(wàn)分之一電子分析天平（梅特勒-托利多），KQ-250V型超聲清洗儀（昆山市超聲儀器有限公司）。對(duì)照品羥基紅花黃色素A（批號(hào)：111637-200905，中國(guó)藥品生物制品檢定所）；蘆?。ㄅ?hào)：0080-9705，中國(guó)藥品生物制品檢定所）；槲皮素（批號(hào)：100081-200907，中國(guó)藥品生物制品檢定所）；山柰酚（批號(hào)：110861-200405，中國(guó)藥品生物制品檢定所）；甲醇為色譜純，磷酸為優(yōu)級(jí)純，水為超純水。

2 試驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 制備

取不同產(chǎn)地的紅花樣品，干燥，研磨成粉末，備用。

2.1.1 對(duì)照品溶液的制備 分別精密稱取羥基紅花黃色素A、槲皮素、蘆丁、山柰素對(duì)照品適量，加入甲醇配置成含對(duì)羥基紅花黃色素A 77.6g/mL、槲皮素6.4g/mL、蘆丁46.0g/mL、山柰素12.8g/mL的混合對(duì)照品溶液，經(jīng)0.45m微孔濾膜過濾，備用。

2.1.2 供試品溶液的制備 取1～9號(hào)紅花藥材粉末，精密稱重1.0 g置于具塞錐形瓶?jī)?nèi)，加50 mL甲醇，精密稱定重量，超聲40 min，再次精密稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，經(jīng)0.45m微孔濾膜過濾，備用。

2.2 色譜條件

色譜柱：Waters Symmetry C18（250 mm 4.6 mm，5m）；柱溫為30℃；流動(dòng)相：甲醇-0.75%磷酸溶液；檢測(cè)波長(zhǎng)：360 nm；流速：0.8 mL/min；進(jìn)樣量：10L；梯度洗脫程序見表2。色譜圖見圖1，在此色譜條件下，理論塔板數(shù)按羥基紅花黃色素A峰計(jì)算不低于3 000。

表2 流動(dòng)相線性梯度Table 2 Linear gradient of mobile phase

圖1 紅花中4種化學(xué)成分的色譜圖Fig.1 Chromatogram diagran of four chemical components in Carthamus tinctorius

2.3 線性關(guān)系研究

量取對(duì)照品混合溶液0.5 mL、1.0 mL、2.0 mL、3.0 mL、4.0 mL、8.0 mL分別置于10mL容量瓶中，加甲醇定容，混勻，按“2.2”色譜條件進(jìn)行測(cè)定。以對(duì)照品濃度（g/mL）為橫坐標(biāo)x，以對(duì)應(yīng)峰面積為縱坐標(biāo)y，繪制回歸曲線，結(jié)果見表3。

表3 線性回歸方程及相關(guān)數(shù)據(jù)Table 3 Linear regression equation and related data

2.4 精密度試驗(yàn)

取制備的混合對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，根據(jù)峰面積計(jì)算羥基紅花黃色素A、槲皮素、蘆丁和山柰素的RSD值分別為0.68%、0.87%、0.57%和0.62%，表明儀器的精密度良好。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

稱取紅花樣品（編號(hào)4）1份，按“2.1.2”制備供試品溶液，分別在0 h、2 h、4 h、6 h、8 h、16 h和24 h進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，計(jì)算羥基紅花黃色素A、槲皮素、蘆丁和山柰素的RSD值分別為1.78%、1.98%、1.86%和2.03%，結(jié)果表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

分別稱取1.0 g紅花樣品（編號(hào)4）6份，按“2.1.2”制備供試品溶液，進(jìn)行色譜測(cè)定，計(jì)算4種成分的RSD值。羥基紅花黃色素A平均含量為6.02 mg，RSD=1.12%；槲皮素平均含量為0.27 mg，RSD=1.27%、蘆丁平均含量為2.13 mg，RSD=1.83%、山柰素平均含量為0.45 mg，RSD=1.64%，結(jié)果表明方法重復(fù)性良好。

2.7 回收率試驗(yàn)

稱取6份已知含量的紅花樣品（編號(hào)4），每份約0.50 g，分別加入一定量的羥基紅花黃色素A、槲皮素、蘆丁及山柰素對(duì)照品，按“2.1.2”制備供試品溶液，測(cè)定含量，計(jì)算回收率，結(jié)果見表4。

表4 紅花加樣回收試驗(yàn)Table 4 Carthamus tinctorius sample recovery test

2.8 樣品含量測(cè)定

取9種不同產(chǎn)地的紅花樣品，各3個(gè)重復(fù)，按“2.1.2”制備供試品溶液，在“2.2”色譜條件下測(cè)定峰面積，代入線性回歸方程，計(jì)算對(duì)羥基紅花黃色素A、槲皮素、蘆丁和山柰素4種成分含量，結(jié)果取平均值，見表5。

表5 不同產(chǎn)地紅花樣品中的4種成分含量測(cè)定Table 5 Determination of four components in Carthamus tinctorius samples from different producing areas

續(xù)表

3 討論

關(guān)于紅花成分含量檢測(cè)的多為同省份不同產(chǎn)地的紅花多種成分檢測(cè)或建立成分含量的檢測(cè)方法。黃壯壯等[9]檢測(cè)了新疆不同產(chǎn)區(qū)的紅花藥材的6-羥基山柰酚-3,6,7-三-O-葡萄糖苷、羥基紅花黃色素A和脫水紅花黃色素B 3種化學(xué)成分含量，發(fā)現(xiàn)各個(gè)產(chǎn)區(qū)的紅花成分含量存在差異；還有報(bào)道云南不同產(chǎn)地紅花揮發(fā)性成分的研究方法[10]；耿維鳳[11]對(duì)河南、四川、內(nèi)蒙、新疆和云南5個(gè)產(chǎn)區(qū)的紅花中黃色素和紅色素進(jìn)行對(duì)比分析，不同產(chǎn)區(qū)的含量存在明顯差異；吳晶等[12]建立了HPLC雙波長(zhǎng)同時(shí)檢測(cè)紅花中沒食子酸、羥基紅花黃色素A、原兒茶酸、蘆丁和槲皮素5種化學(xué)成分含量的方法，靈敏度高；何婷等[3]建立了同時(shí)測(cè)定紅花中4種化學(xué)成分含量的方法，該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，靈敏度高。

紅花作為藥食同源的中藥材，富含多種活性成分，如黃酮類、生物堿類、甾醇類和聚乙炔類等，其中黃酮類成分是紅花的主要活性成分，有抗炎、抗凝血和抗血栓等功效，主要發(fā)揮活血化瘀、保護(hù)急性缺血心肌等作用[13]。黃酮類成分主要包括羥基紅花黃色素A、山柰素、槲皮素、蘆丁、腺苷和芹菜素等。其中，《中國(guó)藥典》2020版中將羥基紅花黃色素A和山柰素列為紅花藥材的質(zhì)量指標(biāo)成分，可用于對(duì)紅花藥材質(zhì)量評(píng)價(jià)[14]。為對(duì)比不同產(chǎn)地的紅花藥材質(zhì)量，本試驗(yàn)選取了河南、云南、新疆和四川等4個(gè)紅花主產(chǎn)區(qū)的共9批紅花藥材進(jìn)行成分含量檢測(cè)，采用準(zhǔn)確度和靈敏度高的HPLC法同時(shí)對(duì)的羥基紅花黃色素A、槲皮素、蘆丁和山柰素4種成分含量進(jìn)行測(cè)定，對(duì)比分析不同產(chǎn)區(qū)的紅花藥材中4種化學(xué)成分的含量，發(fā)現(xiàn)不同產(chǎn)地的紅花中的成分含量存在差異[15-18]。在本試驗(yàn)中，紅花中的4種化學(xué)成分含量因產(chǎn)地不同而存在較大差異，羥基紅花黃色素A含量在12.183 9～24.972 7 mg/g范圍內(nèi)變化，槲皮素含量在0.072 1～6.122 3 mg/g范圍內(nèi)變化，蘆丁含量在0.787 8～1.347 2 mg/g范圍內(nèi)變化，山柰素含量在0.161 0～0.286 3 mg/g范圍內(nèi)變化。以新疆地區(qū)的紅花藥材中含有的羥基紅花黃色素A含量最高，其次為河南產(chǎn)區(qū)、云南產(chǎn)區(qū)，四川產(chǎn)區(qū)最低；河南產(chǎn)區(qū)的槲皮素含量較高，四川產(chǎn)區(qū)的蘆丁含量較高。這可能是由于受到不同環(huán)境因素、土壤條件和氣候條件等多方面的影響導(dǎo)致不同產(chǎn)區(qū)紅花樣品中的成分含量不同[9,12,19]。本試驗(yàn)檢測(cè)對(duì)比了4個(gè)不同產(chǎn)區(qū)紅花中羥基紅花黃色素A、槲皮素、蘆丁和山柰素4種成分含量，以期為研究不同產(chǎn)區(qū)紅花質(zhì)量評(píng)價(jià)提供參考。