文/于志深

制藥企業(yè)潔凈環(huán)境監(jiān)控的要點(diǎn)有二——環(huán)境微生物監(jiān)控和懸浮粒子監(jiān)控。目前，制藥企業(yè)潔凈區(qū)懸浮粒子監(jiān)測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)有ISO 14644-1 與國(guó)標(biāo)GB/T 16292-2010，但它們都不是強(qiáng)制標(biāo)準(zhǔn)，那么在實(shí)際生產(chǎn)中到底應(yīng)該執(zhí)行哪個(gè)標(biāo)準(zhǔn)？尤其是ISO 14644-1 在2015 年修訂后，在最少取樣點(diǎn)、結(jié)果判定等方面有了不同規(guī)定，使得標(biāo)準(zhǔn)的適用問(wèn)題更加突出，本文從標(biāo)準(zhǔn)的歷史沿革進(jìn)行梳理，解決制藥企業(yè)在標(biāo)準(zhǔn)適用方面的疑惑，以更好地指導(dǎo)實(shí)踐工作。

ISO14644-1 標(biāo)準(zhǔn)簡(jiǎn)介

國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化組織簡(jiǎn)稱ISO，是由多個(gè)國(guó)家聯(lián)合成立的非政府性國(guó)際組織，是世界上最大的國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化機(jī)構(gòu)，目前有正式成員國(guó)120 多個(gè)，中國(guó)也是成員國(guó)之一。ISO 的宗旨是在世界范圍內(nèi)促進(jìn)標(biāo)準(zhǔn)化工作及其有關(guān)活動(dòng)的開(kāi)展，以利于國(guó)際間的物資交流和相互服務(wù)，并且發(fā)展在科技界及經(jīng)濟(jì)活動(dòng)方面的合作。ISO 制定的標(biāo)準(zhǔn)僅是推薦給世界各國(guó)采用，是非強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)。但是由于ISO 頒布的標(biāo)準(zhǔn)在世界上具有很強(qiáng)的權(quán)威性、指導(dǎo)性和通用性，對(duì)世界標(biāo)準(zhǔn)化進(jìn)程起著十分重要的作用，所以各國(guó)都非常重視ISO 標(biāo)準(zhǔn)。

ISO 14644 的總標(biāo)題是“潔凈室和相關(guān)受控環(huán)境”，其對(duì)潔凈室的定義為：塵埃粒子數(shù)量、濃度受控并被分級(jí)的房間，房間在建設(shè)和使用時(shí)需控制室內(nèi)污染物的引入、產(chǎn)生和滯留。ISO 14644 適用于在產(chǎn)品或工藝完整性的保護(hù)方面均需要污染控制的行業(yè)，如航天、微電子、醫(yī)藥、醫(yī)療器械、保健品及食品行業(yè)。ISO 14644 共由10個(gè)部分組成，其中ISO 14644-1 是第一部分：根據(jù)粒子濃度對(duì)空氣潔凈度分級(jí)。ISO 14644-1 采用統(tǒng)一的微粒濃度標(biāo)準(zhǔn)值衡量了不同工業(yè)領(lǐng)域的潔凈間。藥品生產(chǎn)中的潔凈室除要對(duì)環(huán)境中的塵粒進(jìn)行控制外，還要對(duì)房間（區(qū)域）內(nèi)的微生物數(shù)量進(jìn)行控制。我國(guó)《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》（以下簡(jiǎn)稱“GMP”）的“無(wú)菌藥品”附錄中對(duì)潔凈級(jí)別確認(rèn)，其規(guī)定的懸浮粒子測(cè)試方法就參照了ISO 14644-1；另外，歐盟GMP、美國(guó)cGMP（動(dòng)態(tài)藥品生產(chǎn)管理規(guī)范）等也都調(diào)用了ISO 14644-1 標(biāo)準(zhǔn)。由此可見(jiàn)，ISO 14644-1 雖是推薦性標(biāo)準(zhǔn)，但仍具有很高的權(quán)威性。

ISO 14644-1 根據(jù)粒徑在0.1～5μm 范圍的粒子濃度的不同，將潔凈室劃分為9 級(jí)，現(xiàn)在我國(guó)制藥行業(yè)普遍采用4 個(gè)級(jí)別的分法，分別對(duì)應(yīng)ISO 的4.8、5、7、8 級(jí)。ISO 14644-1 中 規(guī)定了潔凈級(jí)別確認(rèn)時(shí)的取樣規(guī)則，包括最少取樣點(diǎn)、最小取樣量的確定。ISO 14644-1 最初制定于1999 年，經(jīng)過(guò)多年應(yīng)用后，根據(jù)ISO 系統(tǒng)化回顧和用戶、專家的反饋，于2015 年進(jìn)行了修訂，最顯著的改變是對(duì)取樣點(diǎn)的選擇和數(shù)量采用了一個(gè)更加連續(xù)的統(tǒng)計(jì)方法：評(píng)估數(shù)據(jù)的收集。ISO 14644-1：2015 附錄A“根據(jù)粒子濃度對(duì)空氣潔凈度進(jìn)行分級(jí)的基準(zhǔn)方法”中對(duì)取樣點(diǎn)的最小數(shù)量用表格進(jìn)行了規(guī)定，不同面積對(duì)應(yīng)不同的最少取樣點(diǎn)，取消了原來(lái)的計(jì)算公式及95% 置信區(qū)間的計(jì)算。

GB/T 16292 的歷史沿革

GB/T 16292-2010，即《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）懸浮粒子的測(cè)試方法》，也對(duì)最少取樣點(diǎn)、最小取樣量進(jìn)行了規(guī)定；其中對(duì)最少取樣點(diǎn)的確定提供了兩種方法，其中一種是引自ISO 14644-1：1999 的公式法，即對(duì)潔凈室面積開(kāi)根號(hào)，并對(duì)采樣點(diǎn)數(shù)小于9 的潔凈室計(jì)算置信區(qū)間；另外一種是查表法，即根據(jù)不同的潔凈區(qū)面積和潔凈級(jí)別由表格給出對(duì)應(yīng)的不同的取樣點(diǎn)數(shù)目。追溯這一標(biāo)準(zhǔn)的歷史，GB/T 16292-2010的前一個(gè)版本是GB/T 16292-1996，而這一舊版本標(biāo)準(zhǔn)前言中明確說(shuō)明了“本標(biāo)準(zhǔn)等效采用美國(guó)聯(lián)邦標(biāo)準(zhǔn)FS-209E-1992《潔凈室和潔凈區(qū)內(nèi)空氣浮游粒子等級(jí)》，并參考JGJ71-90《潔凈室施工及驗(yàn)收規(guī)范》制定”，上文提到的這兩種標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)最少采樣點(diǎn)數(shù)目的確定方法便是查表法。GB/T 16292-2010 前言中明確說(shuō)明“本標(biāo)準(zhǔn)參考了ISO 14644-1《潔凈間以及相關(guān)環(huán)境控制 第1 部分：空氣潔凈度級(jí)別》和JGJ 71-90《潔凈室施工及驗(yàn)收規(guī)范》而制定”，內(nèi)容中增加了確定最少取樣點(diǎn)數(shù)目的方法，也就是增加了ISO 14644-1：1999 中的公式法。因此可以看出，GB/T 16292-2010中最少取樣點(diǎn)數(shù)目確定的依據(jù)來(lái)源有二，其一是ISO 14644-1，其二是美國(guó)聯(lián)邦標(biāo)準(zhǔn)FS-209E。按照標(biāo)準(zhǔn)引用的慣例，凡是不注日期的引用文件，都應(yīng)該適用其最新版本。ISO 14644-1：2015 是國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)ISO 14644-1 的第二版，明確指出此第二版取消并代替了第一版ISO 14644-1：1999，這次技術(shù)修訂的改動(dòng)是比較大的。從其對(duì)最少取樣點(diǎn)的確定原則可以看出，與第一版有很大的不同。因此，GB/T 16292-2010 中最少采樣點(diǎn)數(shù)目確定規(guī)章中的第一個(gè)方法——依據(jù)ISO 14644-1：1999制定的公式法——應(yīng)該被新方法代替。

另外，我國(guó)1998 版GMP對(duì)潔凈級(jí)別的劃分參照了美國(guó)聯(lián)邦標(biāo)準(zhǔn)FS-209E，分為100、10 000、100 000、300 000 四級(jí)，自2010 年修訂后改為與歐盟cGMP、世界衛(wèi)生組織GMP 相同的A、B、C、D 四級(jí)的分法。而GB/T 16292-2010 是參照美國(guó)標(biāo)準(zhǔn)制定的，因此它在發(fā)布后不久便出現(xiàn)了適用問(wèn)題。GB/T 16292-2010 是2010年9月2日發(fā)布，2011 年2 月1 日開(kāi)始實(shí)施。GMP（2010 年修訂）是2011 年1 月17日衛(wèi)生部令第79 號(hào)公布,自2011年3 月1 日起施行。GB/T 16292-2010 制定時(shí)我國(guó)2010 版GMP 還未公布，而新版GMP 公布實(shí)施后，GB/T 16292-2010 中的第二種方法查表法就已經(jīng)不適用于藥品生產(chǎn)企業(yè)了，不過(guò)我國(guó)的醫(yī)療器械行業(yè)對(duì)潔凈級(jí)別的劃分還是與美國(guó)標(biāo)準(zhǔn)相同，因此GB/T 16292-2010在醫(yī)療器械生產(chǎn)中仍適用。

到2021年為止，GB/T 16292-2010實(shí)施已有11 年，卻未見(jiàn)修訂，不過(guò)2021 年8 月20日，國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局、中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)發(fā)布了GB/T 25915.1-2021《潔凈室及相關(guān)受控環(huán)境 第1 部分：按粒子濃度劃分空氣潔凈度等級(jí)》，代替GB/T 25915.1-2010 《潔凈室及相關(guān)受控環(huán)境 第1 部分：空氣潔凈度等級(jí)》，并 于2022 年3 月1 日起開(kāi)始實(shí)施，制藥企業(yè)可參考這一新標(biāo)準(zhǔn)。

法規(guī)要求

《中華人民共和國(guó)標(biāo)準(zhǔn)化法》（以下簡(jiǎn)稱《標(biāo)準(zhǔn)化法》）規(guī)定“標(biāo)準(zhǔn)包括國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)、地方標(biāo)準(zhǔn)和團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)、企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)分為強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)、推薦性標(biāo)準(zhǔn)，行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)、地方標(biāo)準(zhǔn)是推薦性標(biāo)準(zhǔn)”。GB/T 16292-2010 是推薦性國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，是“國(guó)家鼓勵(lì)采用”的標(biāo)準(zhǔn)。《標(biāo)準(zhǔn)化法》還規(guī)定“國(guó)家積極推動(dòng)參與國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化活動(dòng)，開(kāi)展標(biāo)準(zhǔn)化對(duì)外合作與交流，參與制定國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)合國(guó)情采用國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)，推進(jìn)中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)與國(guó)外標(biāo)準(zhǔn)之間的轉(zhuǎn)化運(yùn)用”，ISO 14644-1 也 是我國(guó)眾多行業(yè)采用的國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)之一，并被轉(zhuǎn)化運(yùn)用為國(guó)內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)，如前文提到的GB/T 16292-2010、GB/T 25915.1-2021。同時(shí)，我國(guó)的GMP 是以局令形式發(fā)布的部門規(guī)章，關(guān)于空氣懸浮粒子的測(cè)定方法，在其無(wú)菌附錄中被描述為“測(cè)試方法可參照ISO 14644-1”。

標(biāo)準(zhǔn)制定都是建立在科學(xué)技術(shù)研究成果和社會(huì)實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)的基礎(chǔ)上的，科學(xué)技術(shù)總在不斷進(jìn)步，因此標(biāo)準(zhǔn)也需要不斷完善提高，因此我們應(yīng)與時(shí)俱進(jìn)，使用現(xiàn)行的標(biāo)準(zhǔn)。2016 年9 月24 日，國(guó)家藥品審核查驗(yàn)中心針對(duì)企業(yè)提出的ISO 14644-1:2015 出臺(tái)后版本適用的問(wèn)題，回復(fù)稱：企業(yè)在進(jìn)行測(cè)試時(shí)應(yīng)使用現(xiàn)行的ISO標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行測(cè)試，基于現(xiàn)行ISO 標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行變更控制，評(píng)估變更影響，制定并落實(shí)變更計(jì)劃?？梢?jiàn)國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)是值得參照?qǐng)?zhí)行的合法有效標(biāo)準(zhǔn)。GB/T 16292-2010 與ISO 14644-1:2015 都不是強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)，但在企業(yè)沒(méi)有更優(yōu)的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行參照時(shí)，還是要選定一個(gè)來(lái)作為企業(yè)的執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)企業(yè)產(chǎn)生強(qiáng)制約束性。

采用不同標(biāo)準(zhǔn)時(shí)還需要把握一個(gè)原則：我國(guó)的GMP 附錄是強(qiáng)制執(zhí)行的標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范，遇到其他非強(qiáng)制標(biāo)準(zhǔn)與GMP 附錄不一致的情況時(shí)，需執(zhí)行附錄規(guī)定。如對(duì)潔凈區(qū)的分級(jí)，我國(guó)GMP 附錄中A級(jí)既要求靜態(tài)符合規(guī)定，又要求動(dòng)態(tài)符合規(guī)定，既考慮0.5 μm 粒徑的粒子又考慮5.0 μm 粒徑的粒子，而ISO 14644-1:2015 中對(duì)5.0 μm 粒徑的粒子的規(guī)定與我國(guó)GMP 附錄不一致，此時(shí)就必須執(zhí)行GMP 附錄規(guī)定。

潔凈級(jí)別確認(rèn)與監(jiān)測(cè)

潔凈室隔離系統(tǒng)內(nèi)的懸浮粒子在線監(jiān)測(cè)設(shè)備

潔凈區(qū)懸浮粒子的監(jiān)測(cè)可以分為兩種情況：一種是潔凈區(qū)級(jí)別確認(rèn)，通常是在潔凈區(qū)投入使用前對(duì)空調(diào)凈化系統(tǒng)進(jìn)行驗(yàn)證時(shí)，以及在使用一段時(shí)間后進(jìn)行再驗(yàn)證時(shí)需要確認(rèn)；另一種是潔凈區(qū)的日常監(jiān)測(cè)。

歐盟GMP 附錄1“無(wú)菌藥品的生產(chǎn)”中，將潔凈室和潔凈通風(fēng)設(shè)備的級(jí)別確認(rèn)與監(jiān)測(cè)分開(kāi)進(jìn)行描述，明確潔凈室和潔凈通風(fēng)設(shè)備應(yīng)按ISO 14644-1 劃分級(jí)別，級(jí)別的劃分應(yīng)明確區(qū)別于工藝的環(huán)境監(jiān)測(cè)。我國(guó)的GMP 附錄1“無(wú)菌藥品”的第三章“潔凈度級(jí)別及監(jiān)測(cè)”的第九條講明了潔凈級(jí)別的劃分，第十條規(guī)定了潔凈區(qū)懸浮粒子的監(jiān)測(cè)，雖然我國(guó)GMP 未將這兩者區(qū)分在不同章節(jié)，但也明確了日常監(jiān)測(cè)的采樣量可與進(jìn)行潔凈度級(jí)別和空氣凈化系統(tǒng)確認(rèn)時(shí)的空氣采樣量有所不同。而在國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局藥品認(rèn)證管理中心編寫(xiě)的《藥品GMP指南》無(wú)菌藥品分冊(cè)中則明確指出：潔凈區(qū)的潔凈級(jí)別確認(rèn)是設(shè)施驗(yàn)證的 一 部 分，并需要定期進(jìn)行再確認(rèn)；潔凈級(jí)別確認(rèn)和潔凈區(qū)監(jiān)測(cè)是兩個(gè)環(huán)節(jié)，應(yīng)該明確予以區(qū)分并分別進(jìn)行管理；潔凈級(jí)別的確認(rèn)可以按照ISO 14644-1的有關(guān)要求實(shí)施；潔凈區(qū)（室）監(jiān)測(cè)中的取樣點(diǎn)和取樣量可以比進(jìn)行潔凈級(jí)別確認(rèn)時(shí)的取樣點(diǎn)和取樣量少，應(yīng)該通過(guò)正式的風(fēng)險(xiǎn)分析研究和對(duì)監(jiān)測(cè)結(jié)果的分析（至少要有6 個(gè)月以上的運(yùn)行數(shù)據(jù)作為分析基礎(chǔ)），來(lái)確定監(jiān)測(cè)頻次和限度；同時(shí)，監(jiān)測(cè)頻次和限度的確定也要考慮到生產(chǎn)工藝因素，對(duì)于監(jiān)測(cè)限度及取樣點(diǎn)應(yīng)該定期進(jìn)行回顧驗(yàn)證，以保證監(jiān)測(cè)行為的有效性。

涉及醫(yī)藥潔凈廠房監(jiān)測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)還有2020 年12 月31 日發(fā)布的T/ZAPA 0001-2020，即《醫(yī)藥潔凈廠房運(yùn)行維護(hù)技術(shù)規(guī)范》。這一標(biāo)準(zhǔn)由鄭州市空氣凈化協(xié)會(huì)組織編寫(xiě)，實(shí)施日期為2021 年1 月1日，屬于我國(guó)《標(biāo)準(zhǔn)化法》中規(guī)定的團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)。其引用的文件包括GB/T 16292、GB/T 25915、ISO 14644-1 等標(biāo)準(zhǔn)，該標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定“潔凈區(qū)內(nèi)的懸浮粒子的潔凈度、濃度限值的測(cè)試應(yīng)按ISO 14644-1 標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定；測(cè)試采樣點(diǎn)、位置次數(shù)、測(cè)試方法及所需用的測(cè)試儀器應(yīng)按GB/T 16292 的規(guī)定”。

結(jié)語(yǔ)

綜上所述，潔凈區(qū)級(jí)別確認(rèn)時(shí)懸浮粒子的監(jiān)測(cè)需符合我國(guó)GMP“無(wú)菌藥品”附錄中的規(guī)定，附錄未規(guī)定的內(nèi)容則可參照ISO 14644-1:2015 執(zhí)行。對(duì)于潔凈區(qū)日常監(jiān)測(cè)，制藥企業(yè)可根據(jù)生產(chǎn)線的設(shè)置情況，針對(duì)不同的潔凈級(jí)別，并結(jié)合產(chǎn)品生產(chǎn)風(fēng)險(xiǎn)控制要求，制定合理的取樣點(diǎn)數(shù)目及布置，具體可以參照ISO 14644-1:2015、GB/T 16292-2010 的要求；同時(shí)，也可以參照?qǐng)?zhí)行符合科學(xué)性、規(guī)范性的其他推薦性標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)、地方標(biāo)準(zhǔn)及團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)。