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        微小RNA-9在子宮內(nèi)膜癌組織中表達(dá)及意義

        2022-08-01 06:05:30陳小霞謝環(huán)李曉蘭
        安徽醫(yī)藥 2022年8期
        關(guān)鍵詞:因素研究

        陳小霞,謝環(huán),李曉蘭

        作者單位:三峽大學(xué)宜昌市第二人民醫(yī)院婦產(chǎn)科,湖北 宜昌 443000

        子宮內(nèi)膜癌發(fā)病率呈上升趨勢、發(fā)病年齡出現(xiàn)年輕化[1],對女性生命安全構(gòu)成了嚴(yán)重威脅。盡管現(xiàn)有的臨床診療手段不斷進(jìn)步,早期子宮內(nèi)膜癌病人經(jīng)規(guī)范化治療后,總體生存期不斷延長[2],但對于進(jìn)展期或轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)的病人,預(yù)后依然較差,病死率較高[3]。因此,積極探討影響子宮內(nèi)膜癌發(fā)生、進(jìn)展的早期標(biāo)志物,對該腫瘤早期診療及預(yù)后改善具有重要意義。微小RNA(micro RNA,miRNA)是一種在轉(zhuǎn)錄后水平通過與mRNA 靶序列結(jié)合而實現(xiàn)對靶基因的負(fù)性調(diào)控的非編碼RNA,可在多種生理、病理過程中發(fā)揮重要作用[4]。近年來發(fā)現(xiàn)[5],miRNA 與多種惡性腫瘤發(fā)生及進(jìn)展密切相關(guān)。有研究指出[6],子宮內(nèi)膜癌干細(xì)胞分化過程中部分miRNA的表達(dá)具有顯著性變化。miR-9 作為一種miRNA,可在體內(nèi)多種組織中表達(dá)并發(fā)揮重要作用[7]。本研究檢測了miR-9 在子宮內(nèi)膜癌組織中表達(dá)情況,分析了與臨床病理指標(biāo)及預(yù)后的相關(guān)性。

        1 資料與方法

        1.1 一般資料 選取2012 年4 月至2014 年4 月在三峽大學(xué)宜昌市第二人民醫(yī)院行手術(shù)治療的子宮內(nèi)膜癌病人,納入標(biāo)準(zhǔn):術(shù)前未接受放化療、內(nèi)分泌治療;術(shù)后病理明確為子宮內(nèi)膜癌;術(shù)前無內(nèi)分泌、免疫、代謝性疾病;未失訪,資料完善。排除標(biāo)準(zhǔn):轉(zhuǎn)移性子宮內(nèi)膜癌;合并有其他惡性腫瘤。共納入97例,年齡(54.67±9.67)歲,范圍為34~73歲。體重指數(shù)(BMI)(25.35±2.67)kg/m2,按照國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO)2009 年標(biāo)準(zhǔn):Ⅰ~Ⅱ期56 例,Ⅲ~Ⅳ期41例;36 例出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。同期,留取因子宮肌瘤、脫垂等良性病變行子宮切除手術(shù)的正常子宮內(nèi)膜組織46 份,年齡(55.39±10.15)歲,范圍為32~74歲。本研究通過宜昌市第二人民醫(yī)院醫(yī)院倫理委員 會 批 準(zhǔn)( 批 準(zhǔn) 文 號 :HBSYCSDERMYY201108061136),所有病人均行知情同意。

        1.2 方法

        1.2.1 實時熒光定量PCR 術(shù) 用外科剪將子宮內(nèi)膜癌及正常子宮內(nèi)膜組織剪碎,加入組織研磨機(jī)勻漿,按Trizol總RNA 提取試劑說明(購自美國Invitrogen 公司)提取總RNA。利用紫外分光光度計檢測總RNA 濃度和純度,合格標(biāo)準(zhǔn):OD260/OD280在1.80~2.20。按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(購自日本TaKaRa 公司)說明將總RNA 逆轉(zhuǎn)錄為cDNA,根據(jù)PCR 擴(kuò)增試劑盒(購自日本TaKaRa 公司)操作步驟,用CFX96 型實時熒光定量PCR 儀(購自美國Bio-Rad 公司)對引物序列進(jìn)行擴(kuò)增,引物序列:miR-9 正向5’-GCGCGTCTTTGGTTATCTAGCTGTATG-3’,反向5’-GCTGTCAACGATACGCTACG-3’;U6 正向5’-CTGCTTCGGCAGCACATATACT-3’,反向5’-ACGCTTCACGAATTTGCGTGTC-3’。反應(yīng)條件:94 ℃3 min,94 ℃30 s,58 ℃30 s,73 ℃30 s,循環(huán)38 次。采用2-ΔΔCt法計算組織中miR-9相對表達(dá)量。

        1.2.2 隨訪 術(shù)后第1天開始,對病人進(jìn)行隨訪,包括門診、電話等,隨訪至2019 年4 月30 日,隨訪2~84個月,記錄病人死亡情況。

        1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 21.0 統(tǒng)計軟件,計量資料采用±s,組間比較采用獨立樣本t 檢驗,生存分析采用Kaplan-Meier 法和Log-Rank 檢驗,多因素因素分析采用Cox 比例風(fēng)險回歸模型,P<0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        2.1 子宮內(nèi)膜癌及正常子宮內(nèi)膜組織中miR-9 表達(dá)比較 miR-9 在子宮內(nèi)膜癌組織相對表達(dá)量為(0.25±0.10),在正常子宮內(nèi)膜組織中則為(1.02±0.14),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=38.42,P<0.001)。

        2.2 不同臨床病理指標(biāo)的子宮內(nèi)膜癌組織中miR-9 表達(dá)比較 相比于FIGO 分期Ⅰ~Ⅱ期、組織學(xué)分級G1~G2 期、浸潤深度<1/2 肌層、未淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,miR-9相對表達(dá)量在Ⅲ~Ⅳ期、G3期、≥1/2肌層、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著降低(P<0.05),見表1。

        表1 子宮內(nèi)膜癌病人不同臨床病理指標(biāo)中miR-9表達(dá)比較/±s

        表1 子宮內(nèi)膜癌病人不同臨床病理指標(biāo)中miR-9表達(dá)比較/±s

        指標(biāo)年齡<55歲≥55歲是否絕經(jīng)例數(shù)miR-9相對表達(dá)量t值1.36 P值0.177 43 54 0.23±0.10 0.26±0.10 1.82 0.073是否40 57 0.23±0.09 0.26±0.10病理學(xué)類型子宮內(nèi)膜腺癌非子宮內(nèi)膜腺癌FIGO分期Ⅰ~Ⅱ期Ⅲ~Ⅳ期組織學(xué)分級G1~G2期G3期浸潤深度<1/2肌層≥1/2肌層雌激素受體陽性陰性孕激素受體陽性陰性淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移1.44 0.154 77 20 0.25±0.10 0.22±0.08 3.84<0.001 56 41 0.28±0.10 0.20±0.09 3.76<0.001 59 38 0.28±0.10 0.20±0.08 3.89<0.001 55 42 0.28±0.10 0.21±0.09 1.63 0.106 66 31 0.26±0.10 0.22±0.10 1.78 0.078 61 36 0.23±0.10 0.27±0.10 3.46 0.001是否36 61 0.20±0.08 0.27±0.10

        2.3 miR-9 表達(dá)對子宮內(nèi)膜癌病人生存時間的影響 選取miR-9 相對表達(dá)量的P25值(0.16),病人分成低表達(dá)組(<0.16)16 例及高表達(dá)組(≥0.16)71 例,生存分析示,低表達(dá)組生存時間低于高表達(dá)組[(34.82±5.96)個月比(69.23±3.12)個月],累積生存率低于高表達(dá)組(24.00% 比75.00%),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=28.37,P<0.001)。

        2.4 影響病人預(yù)后的因素 FIGO 分期Ⅲ~Ⅳ期、浸潤深度≥1/2 肌層、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和miR-9 低表達(dá)是病人預(yù)后的風(fēng)險因素(HR=2.44、2.75、2.26 和0.31,P<0.05)。

        表2 子宮內(nèi)膜癌97例預(yù)后影響因素的Cox比例風(fēng)險回歸模型

        3 討論

        子宮內(nèi)膜癌誘發(fā)因素較多,發(fā)病率僅次于宮頸癌,位女性生殖道惡性腫瘤第二位[8]。臨床上對于早期子宮內(nèi)膜癌病人的治療主要以手術(shù)切除輔以放化療,多數(shù)病人病情得到很好控制,5 年生存率不斷提高[9],但對于晚期及發(fā)生復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的病人,死亡率較高,5 年生存率不超過30%[10]。目前,對于子宮內(nèi)膜癌發(fā)生、進(jìn)展機(jī)制及診療標(biāo)志物研究尚處于起步階段,積極尋找有效的分子標(biāo)志物或靶基因?qū)γ鞔_子宮內(nèi)膜癌發(fā)生、進(jìn)展機(jī)制及診療具有重要意義。有研究指出,miRNAs 功能及表達(dá)異常與人類腫瘤發(fā)生、進(jìn)展密切相關(guān)[11]。miRNAs 可在腫瘤發(fā)生中起促癌或抑癌基因功能[12]。有研究指出,miRNAs 基因譜在子宮內(nèi)膜癌組織中出現(xiàn)異常[13]。miR-9 是近年來被發(fā)現(xiàn)在多種惡性腫瘤組織中表達(dá)異常的miRNA[7],且在不同類型的惡性腫瘤中既可以扮演癌基因的作用而促進(jìn)腫瘤發(fā)生及血管生成[14],又可以作為抑癌基因參與腫瘤細(xì)胞增殖和運動[15]。本研究中,miR-9 在子宮內(nèi)膜癌組織中相對表達(dá)量顯著降低,提示可能發(fā)揮抑癌基因參與了子宮內(nèi)膜癌發(fā)生。本研究中,相比于FIGO 分期Ⅰ~Ⅱ期、組織學(xué)分級G1~G2 期、浸潤深度<1/2 肌層、未淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,miR-9 相對表達(dá)量在Ⅲ-Ⅳ期、G3 期、≥1/2 肌層、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著降低,說明隨著子宮內(nèi)膜癌惡性程度增加,miR-9 表達(dá)量降低,提示miR-9 低表達(dá)可能參與了子宮內(nèi)膜癌惡性化過程。

        有研究指出,miR-9 低表達(dá)與結(jié)直腸癌病人不良預(yù)后相關(guān),是影響病人預(yù)后的因素[16]。亦有研究指出,miR-9 是膀胱癌切除術(shù)后病人預(yù)后的影響因素[17]。本研究結(jié)果表明,低表達(dá)組生存時間和累積生存率均低于高表達(dá)組,說明提示miR-9 表達(dá)水平與病人預(yù)后有關(guān)。本研究結(jié)果進(jìn)一步表明,miR-9低表達(dá)是病人預(yù)后的風(fēng)險因素,可能是病人預(yù)后評估的潛在標(biāo)志物。

        綜上所述,miR-9 在子宮內(nèi)膜癌組織中低表達(dá),且是病人預(yù)后的風(fēng)險指標(biāo),但其作用的分子機(jī)制尚需開展研究明確。

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