張 輝，何慶雄，黃燕平，陳宇航，王正義，周小藝*

（1.四川省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，四川 成都 610041；2.四川省綿陽(yáng)市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，四川 綿陽(yáng) 621000）

1 材料與方法

1.1 試劑及儀器 高致病性禽流感H5、H7 檢測(cè)抗原，均為哈爾濱維科生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)。豬瘟病毒抗體檢測(cè)試劑盒，口蹄疫免疫抗體檢測(cè)競(jìng)爭(zhēng)ELISA 試劑盒，羊小反芻獸疫抗體檢測(cè)試劑盒，均為武漢科前生物股份有限公司生產(chǎn)。酶標(biāo)儀型號(hào)及廠家：iMark?Microplate Reader，美國(guó)伯樂(lè)（Bio-Rad）公司生產(chǎn)。

1.2 樣品采集與檢測(cè)

1.2.1 研究類型 橫斷面研究。

1.2.2 抽樣策略 本次監(jiān)測(cè)采用分層抽樣的策略，按規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)、散養(yǎng)戶、活禽交易場(chǎng)所分為3個(gè)層，在各個(gè)縣分別對(duì)規(guī)模場(chǎng)、散養(yǎng)戶、交易場(chǎng)所等地點(diǎn)隨機(jī)采樣。

每個(gè)縣抽查2 個(gè)規(guī)模養(yǎng)禽場(chǎng)（1 個(gè)雞場(chǎng)、1 個(gè)水禽場(chǎng)），2 個(gè)規(guī)模養(yǎng)畜場(chǎng)（原則上1 個(gè)豬場(chǎng)、1 個(gè)牛場(chǎng)或羊場(chǎng)），每個(gè)規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)采集血清樣品15份；每個(gè)縣抽查2個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)，每個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)隨機(jī)抽查至少5 個(gè)散養(yǎng)戶，分別采集牛（羊）、禽血清樣品各10份，對(duì)抽查的散養(yǎng)戶逐戶登記采樣；每個(gè)縣抽查2個(gè)活禽交易場(chǎng)所，每個(gè)交易場(chǎng)所采集家禽血清樣品10份。本次監(jiān)測(cè)剔除編號(hào)不規(guī)范、包裝不合格的樣品后共計(jì)血清樣品1 248份。

1.2.3 抗體檢測(cè)及結(jié)果判定 通過(guò)ELISA 試驗(yàn)對(duì)豬瘟、口蹄疫、小反芻獸疫進(jìn)行抗體檢測(cè)，通過(guò)血凝與血凝抑制試驗(yàn)對(duì)高致病性禽流感進(jìn)行抗體檢測(cè)。高致病性禽流感根據(jù)《高致病性禽流感診斷技術(shù)》（GB/T 18936-2020）標(biāo)準(zhǔn)，采用血凝抑制試驗(yàn)（HI）方法進(jìn)行抗體檢測(cè)，抗體效價(jià)≥24判為合格。豬瘟根據(jù)《豬瘟診斷技術(shù)》（GB/T 16551-2020）標(biāo)準(zhǔn)，采用單抗酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)進(jìn)行檢測(cè)，按照試劑廠商說(shuō)明書判定是否合格。口蹄疫根據(jù)《口蹄疫診斷技術(shù)》（GB/T 18935-2018）標(biāo)準(zhǔn)，采用間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)進(jìn)行檢測(cè)，按照試劑廠商說(shuō)明書判定是否合格。小反芻獸疫按照《小反芻獸疫診斷技術(shù)》（GB/T 27982-2011）標(biāo)準(zhǔn)，采用單抗酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)進(jìn)行檢測(cè)，按照試劑廠商說(shuō)明書判定是否合格。

1.2.4 抗體水平合格率 合格數(shù)與檢測(cè)數(shù)的比值即為合格率，再使用@Risk 軟件通過(guò)β分布進(jìn)行仿真模擬（@Risk 版本7.52，仿真迭代10 000次）取得95%置信區(qū)間（95%CI）上下限。P＜0.01表示差異極顯著，P＜0.05表示差異顯著，P＞0.05表示無(wú)顯著差異。

2 結(jié)果

2.1 規(guī)模場(chǎng)抗體合格率 綿陽(yáng)市規(guī)模場(chǎng)免疫抗體總體合格率達(dá)到87.57%（95%CI：83.80%～92.50%）。其中，抗體合格率最高的是雞H5亞型高致病性禽流感，合格率為98.46%（95%CI：95.60%～99.40%），最低的是水禽H7亞型高致病性禽流感，合格率為70.83%（95%CI：66.70%～74.20%），達(dá)到農(nóng)業(yè)農(nóng)村部規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)（表1）。

表1 規(guī)模場(chǎng)抗體合格率

2.2 散養(yǎng)戶抗體合格率 綿陽(yáng)市散養(yǎng)戶免疫抗體總體合格率達(dá)到82.66%（95%CI：75.10%～88.40%）。其中，抗體合格率最高的病種是牛O型口蹄疫，合格率為95.50%（95%CI：89.90%～98.00%），最低的是牛A 型口蹄疫，合格率為74.73%（95%CI：64.90%～82.50%），達(dá)到農(nóng)業(yè)農(nóng)村部規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)（表2）。

表2 散養(yǎng)戶抗體合格率

2.3 活禽交易場(chǎng)所的抗體合格率 綿陽(yáng)市活禽交易場(chǎng)所的免疫抗體總體合格率達(dá)到90.88%（95%CI：86.40%～95.00%）。其中，抗體合格率最高的病種是雞HPAI（H5），合格率為93.63%（95%CI：88.70%～96.50%），最低的是水禽HPAI（H7），合格率為76.92%（95%CI：73.00%～80.10%）。經(jīng)計(jì)算，不同病種抗體合格率方差為0.05，離散情況較明顯（表3）。

表3 活禽交易場(chǎng)所的抗體合格率

2.4 群間分布 表4中，按照抗體合格率由高到低排序，活禽交易場(chǎng)所（90.88%）＞規(guī)模場(chǎng)（87.57%）＞散養(yǎng)戶（82.66%）。3個(gè)類型養(yǎng)殖單元間的抗體合格率在統(tǒng)計(jì)學(xué)上有差異（P＜0.05）。

表4 不同類型養(yǎng)殖單元抗體合格率的群間分布

表5中，按照抗體合格率由高到低排序，高致病性禽流感（88.00%）＞羊小反芻獸疫（87.05%）＞口蹄疫（83.84%）＞豬瘟（81.58%）。4個(gè)動(dòng)物病種的抗體合格率在統(tǒng)計(jì)學(xué)上有差異（P＜0.05）。

表5 不同病種抗體合格率的群間分布

3 討論

3.1 整體抗體合格率達(dá)到規(guī)定標(biāo)準(zhǔn) 重大動(dòng)物疫病嚴(yán)重威脅我國(guó)畜禽養(yǎng)殖業(yè)平穩(wěn)發(fā)展，目前國(guó)家、省級(jí)要求對(duì)口蹄疫、高致病性禽流感、豬瘟、小反芻獸疫等動(dòng)物疫病進(jìn)行強(qiáng)制免疫，通過(guò)提高個(gè)體免疫抗體水平、提升群體免疫密度的方式減少易感動(dòng)物感染率。及時(shí)掌握免疫抗體情況，對(duì)科學(xué)評(píng)估本地區(qū)的強(qiáng)制免疫效果十分重要［1-2］。根據(jù)相關(guān)要求，重大動(dòng)物疫病群體免疫密度應(yīng)常年維持在90%以上，免疫抗體合格率保持在70%以上。從檢測(cè)結(jié)果看，綿陽(yáng)市4 個(gè)強(qiáng)制免疫病種的抗體合格率均在70%以上，達(dá)到國(guó)家規(guī)定要求，表明全市2021 年春季集中免疫工作達(dá)到了預(yù)期效果。

3.2 規(guī)模場(chǎng)免疫效果好于散養(yǎng)戶 監(jiān)測(cè)結(jié)果顯示，規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)均有較高的抗體合格率，其中規(guī)?；B(yǎng)牛場(chǎng)、養(yǎng)羊場(chǎng)和養(yǎng)禽場(chǎng)的免疫抗體平均合格率為88.41%，比散養(yǎng)戶高出5.75 個(gè)百分點(diǎn)，規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)的免疫效果明顯好于散養(yǎng)戶。一方面原因是相較于中小養(yǎng)殖場(chǎng)，規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)具有高效益、精細(xì)化管理和科學(xué)化飼養(yǎng)等方面的優(yōu)勢(shì)［3-4］；第二方面原因是規(guī)模化養(yǎng)殖場(chǎng)有較強(qiáng)的生物安全防護(hù)意識(shí)，而散養(yǎng)戶的防疫主體意識(shí)較為淡薄，科學(xué)養(yǎng)殖意識(shí)不足［5］；第三方面原因是規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)的駐場(chǎng)獸醫(yī)師的年齡結(jié)構(gòu)、專業(yè)知識(shí)和技術(shù)水平都優(yōu)于村級(jí)動(dòng)物防疫員，從側(cè)面反映出基層動(dòng)物防疫體系建設(shè)亟待加強(qiáng)。

3.3 禽流感多價(jià)滅活疫苗顯示出不同的免疫效果 監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)顯示，禽類H5 亞型的免疫抗體合格率明顯高于H7 亞型。經(jīng)調(diào)查，綿陽(yáng)市各地高致病性禽流感強(qiáng)制免疫均使用重組禽流感病毒（H5＋H7）三價(jià)滅活疫苗，說(shuō)明此疫苗中H5 亞型的免疫原性更佳。謝向萌等［6］進(jìn)行的重組禽流感（H5＋H7）二價(jià)滅活疫苗田間試驗(yàn)表明，在免疫后21 d，H5 亞型和H7 亞型的抗體合格率分別為93%、53%，但在免疫后35 d（加強(qiáng)免疫后14 d），二者均達(dá)到100%，說(shuō)明在免疫21 d 后再加強(qiáng)免疫的效果明顯。

3.4 水禽禽流感免疫效果尚有差距 高致病性禽流感的總體抗體合格率為88.00%，其中雞的合格率為90.37%，水禽的合格率為80.12%。水禽免疫抗體合格率較低是由于肉鴨等飼養(yǎng)周期短，且平時(shí)放養(yǎng)于稻田及水塘，導(dǎo)致免疫工作開(kāi)展難度大［7］，另外，綿陽(yáng)市位于野鳥(niǎo)遷徙路線，轄區(qū)內(nèi)涪江流域是野鳥(niǎo)棲息地，存在一定的禽流感傳播風(fēng)險(xiǎn)［10］。

4 小結(jié)

從總體情況來(lái)看，2021 年春季綿陽(yáng)市重大動(dòng)物疫病強(qiáng)制免疫抗體水平超過(guò)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)（70%）。不同類型養(yǎng)殖單元的抗體水平差異較大，不同病種之間免疫效果的差異也較大。在今后的防控策略制定中，應(yīng)重點(diǎn)加強(qiáng)村級(jí)動(dòng)物防疫員的業(yè)務(wù)技術(shù)培訓(xùn)和散養(yǎng)戶防疫主體意識(shí)的養(yǎng)成教育，免疫工作應(yīng)強(qiáng)化林下養(yǎng)殖、水禽養(yǎng)殖、家禽散養(yǎng)等薄弱環(huán)節(jié)?！?/p>