田小海 常亮 王莘

(1長春醫(yī)學高等?？茖W?；A醫(yī)學部，吉林 長春 130000；2吉林農業(yè)大學)

奧拉西坦是吡咯烷酮衍生物，即是一種新型的y-氨基丁酸環(huán)化衍生物，其有效成分不僅能調節(jié)腦組織氧代謝、能量代謝，還能通過保護、修復及激活神經(jīng)元細胞，發(fā)揮其腦組織抗氧化等保護功能，臨床常用于治療神經(jīng)功能損傷、空間記憶功能缺失及障礙〔1～4〕。石菖蒲是多年生天南星科草本植物，其性溫、味辛苦、歸心胃經(jīng)，主要化學成分有多種如苯丙素類、木脂素類、氨基酸類等，在阿爾茨海默癥治療中主要作用是抗氧化應激、鎮(zhèn)靜、抗神經(jīng)細胞凋亡、抗炎癥反應及改善空間學習記憶功能等〔5～9〕。 本文擬分析奧拉西坦聯(lián)合石菖蒲對AD大鼠氧化應激能力及空間學習記憶功能的影響。

1 材料與方法

1.1實驗動物分組與造模 75只Wistar雄性SPF級大鼠，體重(228±22)g，由長春市億斯實驗動物技術有限責任公司提供。實驗分為對照組10只，實驗組65只。造模的65只Wistar大鼠(實驗組)均腹腔注射D-半乳糖(100 mg/kg)6 w，通過Morris水迷宮實驗篩選出50只造模成功的大鼠，分為模型組、奧拉西坦組、奧拉西坦+低劑量石菖蒲組、奧拉西坦+中劑量石菖蒲組和奧拉西坦+高劑量石菖蒲組各10只。

1.2實驗試劑與檢測設備 中藥石菖蒲購買后自制成細粉使用(毫州市佰林堂藥業(yè)有限公司)；奧拉西坦膠囊購于石藥集團歐意藥業(yè)有限公司-國藥準字H20031033；D-半乳糖購自長春市南關區(qū)金萊博生物實驗服務部(美國，Invitrogen)；超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)檢測試劑盒購于南京建成生物工程公司。Morris水迷宮(上海，XR-XM101-Z)和Biotek Epoch酶標儀(山東，JD-SY96A)。

1.3給藥方法、藥物配制和劑量 給藥方式：灌胃，每天上午1次，連續(xù)灌胃5 w。配制奧拉西坦(20 ml，160 mg/ml)、奧拉西坦+低劑量石菖蒲(20 ml，奧拉西坦160 mg+2 g石菖蒲/ml)、奧拉西坦+中劑量石菖蒲(20 ml，奧拉西坦160 mg/ml+4 g石菖蒲/ml)和奧拉西坦+高劑量石菖蒲(20 ml，奧拉西坦160 mg/ml+8 g石菖蒲/ml)，現(xiàn)用現(xiàn)配。對照組、模型組分別給予5 ml/kg生理鹽水，各實驗組給予等劑量相關藥物。

1.4Morris水迷宮實驗 造模6 w(治療前)和給藥4 w(治療后)均進行Morris水迷宮測試，記錄大鼠逃避潛伏期、總路程、經(jīng)過平臺象限次數(shù)及目標象限游泳時間占總時間比，檢測大鼠空間學習記憶功能。Morris水迷宮測試共7 d，其中1～6 d是定位航行試驗記錄大鼠逃避潛伏期，第7天是空間探索實驗，撤掉平臺記錄第1次穿越目標區(qū)域時間、穿越目標區(qū)域次數(shù)、穿越中心區(qū)域及中環(huán)區(qū)域的百分比。

1.5檢測各組血清和腦組織中SOD和MDA含量 Morris水迷宮測試結束第2天采集血清和腦組織海馬區(qū)待檢測，采用生物化學方法嚴格遵守試劑盒操作步驟檢測各組血清和腦組織中SOD和MDA含量。

1.6統(tǒng)計學分析 采用SPSS20.0軟件進行多因素方差分析。

2 結 果

2.1定位航行試驗記錄結果比較 治療前實驗各組逃避潛伏期和總路程均高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；與模型組比較，實驗各組差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。治療后與治療前比較實驗各給藥組逃避潛伏期和總路程均降低，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；治療后與模型組比較，治療各組逃避潛伏期和總路程均降低，聯(lián)合用藥優(yōu)于單純奧拉西坦給藥，且聯(lián)合用藥隨劑量增加效果更佳，組間差異均有統(tǒng)計學意義(均P<0.05)，見表1。

2.2空間探索實驗結果比較 治療前實驗各組第1次穿越目標區(qū)域時間、穿越目標區(qū)域次數(shù)、穿越中心區(qū)域及中環(huán)區(qū)域的百分比均低于對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；與模型組比較，實驗各組組間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。治療后與治療前比較實驗各給藥組均提高；治療后與模型組比較，治療各組均提高，聯(lián)合用藥優(yōu)于單純奧拉西坦給藥，且聯(lián)合用藥隨劑量增加效果更佳，組間差異均有統(tǒng)計學意義(均P<0.05)，見表2。

表1 定位航行試驗各組逃避潛伏期和總路程的比較

1)與對照組比較，2)與治療前比較，3)與模型組比較，4)與奧拉西坦組比較，5)與奧拉西坦+石菖蒲低劑量組比較，6)與奧拉西坦+石菖蒲中劑量組比較：均P<0.05；表2同

表2 各組空間探索實驗結果比較

2.3各組血清和腦組織中SOD和MDA含量比較 與對照組比較，實驗組各組血清和腦組織中SOD含量均降低，MDA含量均升高，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；與模型組比較，各給藥組血清和腦組織中SOD含量均升高、MDA含量降低，且石菖蒲呈劑量依賴性，各組差異均有統(tǒng)計學意義(均P<0.05)，見表3。

表3 各組血清和腦組織中SOD和MDA含量比較

3 討 論

隨著社會發(fā)展世界人口老齡化趨勢日益明顯，老年病的形式、種類多樣和嚴重性受到醫(yī)務工作者的廣泛關注，AD是老年人常見的一種癡呆性疾病，不但影響患者自身生存質量、加重家庭與社會的醫(yī)療負擔，還是老年人死亡的重要因素〔10〕。

奧拉西坦是一種營養(yǎng)神經(jīng)類藥物，臨床常用于促智、腦卒中等腦血管疾病的治療；其可直接或間接性作用于腦組織各個分區(qū)，通過提高腦組織抗氧化能力、降低腦組織氧化應激損傷、活化乙酰膽堿等作用，保護修復腦組織神經(jīng)細胞，從而改善大腦的學習記憶功能〔11～13〕。由于西藥作用有限且靶點單一，而中藥品種豐富且具有多靶點優(yōu)勢，因此中西藥結合治療AD是國際性趨勢，有廣闊的臨床應用前景〔14〕。石菖蒲在《漢武帝內傳》和《神農本草經(jīng)》記載中都有益智功效，臨床已廣泛用于癲癇、癡呆、中風、心悸及健忘等〔14～16〕。

因此結合兩種藥物的作用機制，將其共同應用于AD疾病的治療；本實驗結果說明聯(lián)合用藥更有助于提高AD大鼠的空間學習記憶功能和氧化應激能力。

綜上，中藥石菖蒲聯(lián)合奧拉西坦治療能明顯改善AD大鼠空間學習記憶功能，效果優(yōu)于單純奧拉西坦，其作用機制有待進一步探討。