孫傳奇，姚卓亞，高 琦，徐 寧，康品方，高大勝

（蚌埠醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院心內(nèi)科，安徽蚌埠 233000）

心房顫動(dòng)（atrial fibrillation，AF）是以心房電活動(dòng)紊亂繼而導(dǎo)致心房機(jī)械功能減退為特征的一種快速心律失常，其患病率逐年升高，隨著房顫持續(xù)時(shí)間的延長(zhǎng)可導(dǎo)致不同程度的心力衰竭及血栓栓塞［1］。研究表明，非瓣膜病性房顫病人腦卒中發(fā)生率是正常人的4～5 倍［2-4］。但目前對(duì)于房顫的臨床治療仍是難點(diǎn)，其主要原因在于房顫發(fā)生的機(jī)制尚不甚明了，因此尋找能夠影響房顫發(fā)生以及促進(jìn)其進(jìn)展的相關(guān)指標(biāo)，不僅能促進(jìn)對(duì)房顫發(fā)病機(jī)制的理解，還可能為以后的治療提供新思路。

組蛋白去乙酰化酶3（HDAC3）屬于第I 類(lèi)組蛋白去乙?；?，通過(guò)去乙?；揎椨绊懶募〖?xì)胞收縮、促進(jìn)心肌肥厚、纖維化、自噬及凋亡，在心血管疾病的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮著重要的調(diào)控作用［5-11］。研究證實(shí)，HDAC3 與維持心肌細(xì)胞電位穩(wěn)定及能量代謝有關(guān)，其表達(dá)異?？赡軙?huì)導(dǎo)致心肌結(jié)構(gòu)及功能的異常［12-15］；高遷移率蛋白B1（HMGB-1）是一種結(jié)構(gòu)上的非組蛋白染色質(zhì)結(jié)合蛋白，參與調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄、DNA 復(fù)制和修復(fù)等，細(xì)胞外HMGB-1 由壞死組織被動(dòng)釋放或應(yīng)激細(xì)胞主動(dòng)分泌［16-19］。研究證明HMGB-1 能降低心肌細(xì)胞收縮力、誘導(dǎo)心肌肥大、凋亡及促進(jìn)心肌纖維化的形成［20-26］。鑒于上述機(jī)制，我們推測(cè)兩者與心房顫動(dòng)的發(fā)生及心肌重構(gòu)相關(guān)。目前國(guó)內(nèi)外對(duì)此報(bào)道較少，因此本文旨在探討血清HDAC3 及HMGB-1 與非瓣膜性房顫的發(fā)生、發(fā)展及結(jié)構(gòu)重構(gòu)的相關(guān)性，以明確HDAC3 與HMGB1 在房顫發(fā)生中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取本院2019 年9 月～2020 年12 月收住入院，行24 h 動(dòng)態(tài)心電圖確診心房顫動(dòng)病人166 例為實(shí)驗(yàn)組。按照歐洲心臟病學(xué)會(huì)（European Society of Car?diology，ESC）制定的非瓣膜性心房顫動(dòng)及其分型診斷標(biāo)準(zhǔn)［27］，分為陣發(fā)性房顫組（陣發(fā)組，n=42）、持續(xù)性房顫組（持續(xù)組，n=63）、永久性房顫組（永久組，n=61）。選取本院同期體檢健康竇性心律者50 例為對(duì)照組。

1.2 排除標(biāo)準(zhǔn)

（1）先天性心病、風(fēng)濕性心臟病以及其他相關(guān)原因?qū)е碌男呐K瓣膜異常（鈣化、手術(shù)等）；（2）各種類(lèi)型的心肌病、肺源性心臟病；（3）心力衰竭（NTproBNP>125 ng/L）；（4）合并嚴(yán)重感染、創(chuàng)傷、自身免疫性疾病；（5）近期3 個(gè)月內(nèi)曾行手術(shù)者；（6）合并惡性腫瘤；（7）合并嚴(yán)重貧血營(yíng)養(yǎng)不良等。

1.3 方法

采集入組患者靜脈血5 mL，進(jìn)行離心制備血清，并保存于?80°C 冰柜中。采購(gòu)ELISA 試劑盒（上海羽朵），按照說(shuō)明書(shū)測(cè)定HDAC3、HMGB-1 兩者濃度。其它一般基礎(chǔ)資料及心臟彩超由我院檢驗(yàn)科和彩超室測(cè)定。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS25.0 統(tǒng)計(jì)軟件分析采集資料，計(jì)量資料正態(tài)分布以（±s）表示、非正態(tài)分布以M（P25，P75）表示，計(jì)數(shù)資料以百分構(gòu)成比表示。組間比較選擇t檢驗(yàn)、秩和檢驗(yàn)、卡方檢驗(yàn)；相關(guān)性選擇Pear?son 相關(guān)分析；采用多因素二元Logistic 回歸探討影響房顫發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組各臨床資料對(duì)比

在年齡、性別、高血壓、糖尿病、血常規(guī)、肝腎功能、血脂、CRP、EF%、NT-proBNP 等方面兩組未見(jiàn)明顯差異（P>0.05）。與對(duì)照組相比，房顫組在HDAC3、HMGB-1、LAD、LVEDD 的水平均顯著升高；差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表1。

表1 兩組臨床資料對(duì)比Tab 1 Comparison of each clinical data between the control and AF groups

2.2 不同類(lèi)型的房顫患者HDAC3、HMGB-1、LAD、LVEDD 水平對(duì)比

通過(guò)對(duì)不同類(lèi)型的房顫患者HDAC3、HMGB-1、LAD、LVEDD 水平對(duì)比發(fā)現(xiàn)：永久組較持續(xù)組、陣發(fā)組HDAC3、HGMB-1、LAD、LVEDD 水平顯著升高（P<0.05），且持續(xù)組較陣發(fā)組上述指標(biāo)亦顯著升高（P<0.05）。見(jiàn)表2。

表2 不同類(lèi)型房顫患者HDAC3、HMGB?1、LAD、LVEDD 比較（±s）Tab 2 HDAC3，HMGB?1，LAD，LVEDD comparison among the experimental groups（±s）

表2 不同類(lèi)型房顫患者HDAC3、HMGB?1、LAD、LVEDD 比較（±s）Tab 2 HDAC3，HMGB?1，LAD，LVEDD comparison among the experimental groups（±s）

注：與陣發(fā)組比較，aP<0.05；與持續(xù)組比較，bP<0.05。

HMGB-1 85.69±17.51 102.51±18.89a 115.99±21.13ab組別陣發(fā)組持續(xù)組永久組n 42 63 61 LAD 33.74±5.12 37.59±5.91a 43.15±6.24ab LVEDD 48.67±4.92 55.75±7.72a 61.56±6.79ab HADC3 72.96±14.69 96.66±20.09a 110.59±23.38ab

2.3 房顫組HDAC3、HMGB-1、LAD 及LVEDD 間相關(guān)性分析

Pearson 相關(guān)分析顯示，房顫組中HDAC3 水平與 HMGB-1 呈正相關(guān)（r=0.757，P=0.001）；HDAC3 水 平 與 LAD（r=0.635，P=0.000）、LVEDD（r=0.651，P=0.000）呈正相關(guān)；HMGB-1水平與LAD（r=0.658，P=0.002）、LVEDD（r=0.569，P=0.000）亦呈正相關(guān)。見(jiàn)表3。

表3 實(shí)驗(yàn)組HDAC3、HMGB?1、LAD、LVEDD 相關(guān)性分析Tab 3 HDAC3，HMGB?1，LAD，LVEDD correlation analy?sis of the experimental groups

2.4 心房顫動(dòng)有關(guān)危險(xiǎn)因素二元Logistic回歸分析

對(duì)所有入組患者，以是否發(fā)生房顫為因變量，以表1 中存在差異的變量（HDAC3、HMGB-1、LAD、LVEDD）為協(xié)變量，應(yīng)用二元Logistic 回歸分析，顯示HDAC3（OR=1.712，95%CI：1.070～2.739，P<0.05）、HMGB-1（OR=1.287，95%CI：1.008～1.634，P<0.05） 、 LAD （OR=1.709，95%CI：1.095～2.666，P<0.05）是心房顫動(dòng)發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。見(jiàn)表4。

表4 心房顫動(dòng)的多因素二元Logistic 回歸分析Table 4 Multivariate binary Logistic regression analysis of atrial fibrillation

3 討論

房顫作為臨床上最常見(jiàn)的心律失常，其患病率與發(fā)病率逐年升高，因可導(dǎo)致缺血性卒中、體循環(huán)動(dòng)脈栓塞、心力衰竭等危害，嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康［1］。鑒于對(duì)房顫發(fā)病機(jī)制不甚明了，目前房顫臨床治療存在諸多難點(diǎn)。電重構(gòu)及結(jié)構(gòu)重構(gòu)目前認(rèn)為是其發(fā)生、發(fā)展的重要病理基礎(chǔ)，凡是能影響以上任何一個(gè)環(huán)節(jié)都能為房顫的發(fā)生提供病理基礎(chǔ)，兩者可以相互加重形成惡性循環(huán)最終導(dǎo)致疾病的進(jìn)展［28］。早期電重構(gòu)目前可以通過(guò)射頻消融等方法得到改善，但結(jié)構(gòu)重構(gòu)目前尚無(wú)有效的治療方法，這也為術(shù)后復(fù)發(fā)以及治療上帶來(lái)困難，因此積極尋找能夠影響房顫發(fā)生以及促進(jìn)其進(jìn)展的相關(guān)指標(biāo)尤為重要。

HDAC3 屬于第I 類(lèi)組蛋白去乙?；?，近來(lái)大量文獻(xiàn)報(bào)道HDAC3 與心血管疾病的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，其通過(guò)去乙?；揎椨绊懶募〖?xì)胞功能及能量代謝，是心血管疾病的重要調(diào)控因子［8-11］。研究發(fā)現(xiàn)肌動(dòng)蛋白和肌纖維蛋白均是HDAC3 誘導(dǎo)的去乙?；牡孜铮琀DAC3 能夠調(diào)節(jié)肌球蛋白重鏈脫乙?；?，使心肌收縮性能惡化，進(jìn)而導(dǎo)致心肌細(xì)胞肥大結(jié)構(gòu)重構(gòu)；HDAC3 可直接與心肌細(xì)胞中肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白（CapZβ1）及肌原纖維相互作用，直接誘導(dǎo)心肌肥大，與心力衰竭的發(fā)生密切相關(guān)［29］。有研究發(fā)現(xiàn)，HDAC3 參與了鈉鈣交換器（Sodium calcium exchanger，NCX）的調(diào)節(jié)，與維持心肌細(xì)胞及心肌線粒體內(nèi)外Ca2+平衡有關(guān)，HDAC3 過(guò)表達(dá)可使心肌內(nèi)Ca2+濃度過(guò)載，進(jìn)而影響心肌正常的電位活動(dòng)及線粒體功能［13-15］；另外HDAC3 已經(jīng)證實(shí)參與心肌代謝重塑方面的調(diào)節(jié)，通過(guò)與Krüppel 樣因子（KLF5）的相互作用來(lái)調(diào)節(jié)心肌脂肪酸代謝。KLF5 是過(guò)氧化物酶激活受體α（PPAR-α）心臟能量學(xué)的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，HDAC3 的過(guò)表達(dá)抑制了KLF5依賴(lài)的內(nèi)源性下游脂肪酸代謝相關(guān)基因的激活，從而導(dǎo)致脂肪酸攝取、脂肪酸氧化和電子傳遞/氧化磷酸化障礙，最終導(dǎo)致心肌心肌能量供應(yīng)障礙、重構(gòu)以及纖維化的發(fā)生［30］。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)HDAC3 在房顫組中明顯高于對(duì)照組，這提示HDAC3 的過(guò)度表達(dá)與房顫的發(fā)生可能相關(guān)；其內(nèi)在原因可能是HDAC3 的過(guò)度表達(dá)干擾了心肌細(xì)胞內(nèi)的鈣離子平衡及能量代謝，使與之有關(guān)的心肌細(xì)胞電活動(dòng)及結(jié)構(gòu)發(fā)生異常，為房顫的發(fā)生提供病理學(xué)基礎(chǔ)。另外，在不同類(lèi)型的房顫組對(duì)比中，發(fā)現(xiàn)隨著房顫疾病的進(jìn)展HDAC3、LAD、LVEDD 水平逐漸增高且HDAC3 與LAD、LVEDD 呈正相關(guān)，這與國(guó)內(nèi)外研究結(jié)果相符，表明HDAC3 可能通過(guò)介導(dǎo)房顫患者結(jié)構(gòu)重構(gòu)參與房顫疾病的進(jìn)展。有研究顯示，HDAC3 可通過(guò)抑制細(xì)胞周期依賴(lài)性蛋白激酶抑制物（Cdkn1a、Cdkn2a、Cdkn1b）促進(jìn)心肌細(xì)胞增殖肥大，導(dǎo)致心肌重構(gòu)［31］。

HMGB-1 是一種非組蛋白的核蛋白，細(xì)胞內(nèi)外皆可存在。細(xì)胞外的HMGB-1 主要由壞死組織被動(dòng)釋放或應(yīng)激細(xì)胞主動(dòng)分泌，具有炎癥因子的活性，可與不同的受體結(jié)合發(fā)揮促炎作用［16］。其主要受體有包括Toll 樣受體（toll-like receptors，TLR）以及晚期糖氨化末端產(chǎn)物受體（receptor for advanced glycation end products，RAGE）等［17，18］。HMGB-1 與TLR-2 結(jié)合并激活α-平滑肌肌動(dòng)蛋白（SMA）、下游有絲分裂原激活蛋白激酶（mitogen-activated pro?tein kinase，MAPK）、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（TGF-β）和膠原蛋白（I 型和Ⅲ型），參與調(diào)節(jié)心肌成纖維細(xì)胞的增殖及活性，最終導(dǎo)致心肌細(xì)胞炎癥和纖維化［32］。此外，HMGB-1 與RAGE 結(jié)合進(jìn)而激活核因子κB（nuclear factor kappa-B，NF-κB）信號(hào)傳導(dǎo)途徑，可導(dǎo)致心肌細(xì)胞炎癥、纖維化和心臟功能障礙［33-35］。HMGB-1 與受體TLR-4 結(jié)合增加了細(xì)胞凋亡蛋白和caspase-3 的表達(dá)，并減少了抗纖維化/抗炎細(xì)胞因子IL-33，致使心肌細(xì)胞凋亡及纖維化等形成［20］。本研究中房顫病人HMGB-1 水平明顯高于對(duì)照組，說(shuō)明HMGB-1 水平升高與房顫的發(fā)生可能存在一定的相關(guān)性；不同類(lèi)型的房顫組比較，隨著房顫疾病的進(jìn)展其水平依次上升，這提示HMGB-1 與房顫疾病的發(fā)展可能相關(guān)。 且HMGB-1 與LAD、LVEDD 呈正相關(guān)，提示HMGB1 可能與房顫心肌結(jié)構(gòu)重構(gòu)有關(guān)，這與國(guó)內(nèi)外研究結(jié)果相符，其內(nèi)在原因可能是HMGB-1 作為細(xì)胞外炎癥因子通過(guò)與其TLR、RAGA 等受體結(jié)合誘導(dǎo)心肌產(chǎn)生炎癥、促進(jìn)心肌纖維化及誘導(dǎo)心肌凋亡等，最終引起心肌細(xì)胞在組織結(jié)構(gòu)及超微觀結(jié)構(gòu)等方面的異常，繼而引起心肌細(xì)胞電重構(gòu)或結(jié)構(gòu)重構(gòu)，為房顫的發(fā)生和進(jìn)展提供了病理基礎(chǔ)。此外，本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)HDAC3 與HMGB-1 兩者血清濃度存在正相關(guān)，表明兩者在心房顫動(dòng)的發(fā)生及發(fā)展中存在協(xié)同作用，這可能與兩者調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡有關(guān)，有研究證明HDAC3 通過(guò)調(diào)節(jié)HMGB-1 的釋放，抑制凋亡相關(guān)通路［36］。最后行二元Logistic 回歸分析顯示HDAC3、HMGB-1、LAD 是心房顫動(dòng)發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，可作為預(yù)測(cè)心房顫動(dòng)發(fā)生的影響因子。

綜上所述，檢測(cè)HDAC3、HMGB-1 兩種因子對(duì)于探究心房顫動(dòng)發(fā)病機(jī)制及疾病進(jìn)展具有很大幫助，可能為今后房顫的臨床治療及改善預(yù)后提供一種新的方向。另外，本實(shí)驗(yàn)在得出以上研究結(jié)果之外，存在以下缺陷及思考，本次研究中收集的病例樣本數(shù)有限，仍需要足量樣本來(lái)驗(yàn)證；本研究屬于回顧性研究，無(wú)法對(duì)同一個(gè)體進(jìn)行連續(xù)性檢測(cè)其病程節(jié)點(diǎn)中各個(gè)時(shí)期的HDAC3、HMGB-1 的數(shù)值，因此有待于進(jìn)一步完善前瞻性臨床試驗(yàn)研究。

作者貢獻(xiàn)度說(shuō)明：

高大勝、康品方：負(fù)責(zé)提出研究選題、設(shè)計(jì)研究方案、提供研究經(jīng)費(fèi)、指導(dǎo)性支持；孫傳奇、徐寧、高琦：負(fù)責(zé)實(shí)施研究過(guò)程、采集整理數(shù)據(jù)；孫傳奇：負(fù)責(zé)整理文獻(xiàn)、設(shè)計(jì)論文框架、起草論文；高大勝、康品方、孫傳奇、姚卓亞：修訂論文、終審論文。

本研究不存在研究者、倫理委員會(huì)成員、受試者監(jiān)護(hù)人以及與公開(kāi)研究成果有關(guān)的利益沖突。