＊顧晉文 王耀堂 儲佳佳 周婷婷

（1.上虞京新藥業(yè)有限公司 浙江 312369 2.浙江鴻盛化工有限公司 浙江 312369）

引言

S-環(huán)氧氯丙烷作為關(guān)鍵起始物料，作為醫(yī)藥和化工等相關(guān)領(lǐng)域的重要中間體，在醫(yī)藥中廣泛用于合成手性藥物，在生產(chǎn)中得到廣泛應(yīng)用。比如用于對映選擇性合成羥基異噁唑烷和抗感染類藥物（左奧硝唑、奧硝唑）、前體4-氯-3-羥基丁酸酯（阿伐他?。?、β-腎上腺素拮抗劑（阿替洛爾）、左旋肉堿、利伐沙班等藥物。S-環(huán)氧氯丙烷作為手性起始物料，必須控制其異構(gòu)體雜質(zhì)R-環(huán)氧氯丙烷。檢測S-環(huán)氧氯丙烷常用氣相色譜檢測，但是異構(gòu)體R-環(huán)氧氯丙烷在很多氣相色譜柱上沒有完全分離，難以準(zhǔn)確控制其異構(gòu)體R-環(huán)氧氯丙烷雜質(zhì)含量[1]。

本研究采用手性毛細(xì)管色譜柱[2]，氣相色譜法檢測S-環(huán)氧氯丙烷異構(gòu)體雜質(zhì)，建立的新方法簡單，靈敏高，分離度好，準(zhǔn)確性高。

1.實(shí)驗(yàn)部分

(1)儀器與試藥

Agilent7890B氣相色譜儀器，梅特勒-托利多電子天平XPE105，S-環(huán)氧氯丙烷對照品（TCI批號：P1450590）；R-環(huán)氧氯丙烷對照品（TCI批號：P1450589）；S-環(huán)氧氯丙烷樣品（撫順大恒化工有限公司，批號：SECH- 190601；SECH- 190602；SECH-190603）。

(2)色譜條件

色譜柱及填料：LIPODEX E色譜柱（50m×0.25mm× 0.25μm）；柱溫：50℃保持4min，以5℃/min升溫至110℃，以20℃/min升溫至180℃；進(jìn)樣口：200℃；檢測器類型：FID；檢測器溫度：250℃；分流比：80:1；柱流量：2.0mL/min；進(jìn)樣量：1μL。

(3)溶液配制

空白溶液：正庚烷。

R-環(huán)氧氯丙烷貯備溶液：取R-環(huán)氧氯丙烷約375mg，精密稱定，置50ml量瓶中，用空白溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取上述溶液1ml置于10ml量瓶中，用空白溶液稀釋至刻度，搖勻，作為R-環(huán)氧氯丙烷貯備溶液（約含R-環(huán)氧氯丙烷0.75mg/ml）。

R-環(huán)氧氯丙烷對照品溶液：精密量取R-環(huán)氧氯丙烷貯備溶液10ml，置100ml量瓶中，用空白溶液稀釋并定容，搖勻，作為R-環(huán)氧氯丙烷的100%限度溶液（約含R-環(huán)氧氯丙烷0.075mg/ml）。

系統(tǒng)適用性溶液：取S-環(huán)氧氯丙烷對照品約500mg，精密稱定，置10ml量瓶中，精密量取1ml R-環(huán)氧氯丙烷貯備溶液置同一10ml量瓶，用空白溶液稀釋至刻度，搖勻，作為系統(tǒng)適用性溶液（約含S-環(huán)氧氯丙烷50mg/ml，R-環(huán)氧氯丙烷0.075mg/ml）。

供試品溶液：取S-環(huán)氧氯丙烷供試品約500mg，精密稱定，置10ml量瓶中，用空白溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液（約含S-環(huán)氧氯丙烷50mg/ml）。

2.實(shí)驗(yàn)結(jié)果

(1)氣相手性色譜柱的選擇

文獻(xiàn)[3-4]曾報道Gamaa Dex 225手性色譜柱可以分離 S-環(huán)氧氯丙烷和R-環(huán)氧氯丙烷，但是在這個手性色譜柱下，S-環(huán)氧氯丙烷拖尾嚴(yán)重，R-環(huán)氧氯丙烷在主峰尾巴上，沒有達(dá)到基線分離，難以控制0.15%以下的異構(gòu)體雜質(zhì)。不同氣相色譜柱分離環(huán)氧氯丙烷異構(gòu)體結(jié)果統(tǒng)計(jì)如下表1。

表1 不同手性色譜柱分離S-環(huán)氧氯丙烷異構(gòu)體

因此，最終異構(gòu)體分離的氣相手性色譜柱確定為：LIPODEX E色譜柱50m×0.25mm×0.25μm。

(2)配制樣品溶劑的選擇

環(huán)氧氯丙烷，活潑性強(qiáng)，容易參與反應(yīng)，分別考察甲醇、乙醇、二氯甲烷、正庚烷作稀釋劑，比較環(huán)氧氯丙烷在這些稀釋劑中的穩(wěn)定性，結(jié)果統(tǒng)計(jì)如下表2。

表2 配制樣品溶劑的選擇

甲醇、乙醇作稀釋劑，會與環(huán)氧氯丙烷緩慢反應(yīng)，產(chǎn)生未知峰。二氯甲烷，容易揮發(fā)，色譜分析過程中，重復(fù)進(jìn)樣分析，隨二氯甲烷揮發(fā)，峰面積增大；正庚烷作樣品配制溶劑非常穩(wěn)定，最終選擇正庚烷作S-環(huán)氧氯丙烷的稀釋劑。

(3)系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，檢測限和定量限及回收率

①系統(tǒng)適用性溶液

將系統(tǒng)適用性溶液加入氣相色譜儀器，S-環(huán)氧氯丙烷與異構(gòu)體分離統(tǒng)計(jì)如下表3。

表3 系統(tǒng)適用性溶液結(jié)果

系統(tǒng)適用性譜圖，如圖1，11.54min為S-環(huán)氧氯丙烷，12.43min為R-環(huán)氧氯丙烷。

圖1 S-環(huán)氧氯丙烷系統(tǒng)適用性氣相色譜圖

②方法的檢測限和定量限

將R-環(huán)氧氯丙烷異構(gòu)體雜質(zhì)，采用稀釋劑正庚烷，不斷稀釋下去，到4.45μg/ml、14.85μg/ml，這分別是檢測限和定量限濃度，數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)如下表4。

表4 R-環(huán)氧氯丙烷檢測限和定量限

③線性

用稀釋劑正庚烷，分別配制R-環(huán)氧氯丙烷，LOQ，50%，100%，150%和200%濃度的溶液，依次加入氣相色譜儀器，她們濃度與峰面積的結(jié)果統(tǒng)計(jì)如下表5。

表5 R-環(huán)氧氯丙烷濃度與峰面積結(jié)果

結(jié)論：在20%水平濃度（即LOQ）～200%水平濃度范圍內(nèi)，R-環(huán)氧氯丙烷峰的峰面積與其濃度成立的回歸方程，所得相關(guān)系數(shù)應(yīng)r=0.9999＞0.99，成線性關(guān)系；Y的截距為0.0423，小于100%限度水平的平均峰面積的20%。

④方法的回收率實(shí)驗(yàn)

取供試品約500mg，精密稱定，置10mL量瓶中，依次用LOQ限度濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液，50%限度溶液，100%限度溶液和150%限度溶液使其溶解并稀釋至定容，作為各個濃度加標(biāo)樣品溶液（平行配制3份）；實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表6。

表6 R-環(huán)氧氯丙烷加標(biāo)到樣品中回收率結(jié)果

結(jié)論：各水平濃度回收率均在90%～110%之間，各水平濃度回收率RSD均小于10%。

⑤穩(wěn)定性

將供試品溶液、R-環(huán)氧氯丙烷對照品溶液于常溫下放置，待儀器穩(wěn)定后，進(jìn)樣1針空白溶液（必要時可重復(fù)進(jìn)，直至無干擾峰），進(jìn)行系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，系統(tǒng)適用性符合要求后，以預(yù)定的時間間隔進(jìn)樣（例如：間隔2h、4h、8h、12h、16h、20h和24h），記錄色譜圖。溶液穩(wěn)定性統(tǒng)計(jì)結(jié)果，如表7。

表7 溶液的穩(wěn)定性室驗(yàn)結(jié)果

供試品溶液和對照品溶液分別在常溫條件下放置24h后，與0h相比，均無新增雜質(zhì)。供試品溶液中S-環(huán)氧氯丙烷峰面積相對平均偏差為0.11%，不大于2.0%，供試品中R-環(huán)氧氯丙烷峰面積相對平均偏差為2.3%，不大于10%，R-環(huán)氧氯丙烷對照品溶液中R-環(huán)氧氯丙烷峰面積相對平均偏差為0.8%，不大于10%，異構(gòu)體檢測方法的溶液穩(wěn)定性非常好。

3.樣品檢測及結(jié)論

檢測三批次S-環(huán)氧氯丙烷，它們的異構(gòu)體體結(jié)果，見表8。

表8 S-環(huán)氧氯丙烷異構(gòu)體檢測結(jié)果

結(jié)論：三批樣品中R-環(huán)氧氯丙烷含量均符合規(guī)定。

圖2 S-環(huán)氧氯丙烷異構(gòu)體檢測譜圖

建立的新方法，樣品配制非常簡單,溶液穩(wěn)定性非常好，方法的靈敏度非常高，異構(gòu)體雜質(zhì)的分離度非常好，檢測異構(gòu)體結(jié)果準(zhǔn)確度非常高；新方法檢測S-環(huán)氧氯丙烷中異構(gòu)體雜質(zhì)值得推廣應(yīng)用。