■李建房 王汝都 趙鵬力 王雪瑩 張 才 李元曉 楊自軍 劉宗平*

（1.揚(yáng)州大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院，江蘇 揚(yáng)州 225009；2.河南農(nóng)業(yè)職業(yè)學(xué)院，河南 鄭州 451450；3.河南科技大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，河南 洛陽(yáng) 471023；4.河南省動(dòng)物福利與健康養(yǎng)殖國(guó)際聯(lián)合實(shí)驗(yàn)室，河南 洛陽(yáng) 471023）

斷奶仔豬容易受到各種應(yīng)激和病原體感染。這種情況通常會(huì)引起氧化損傷，導(dǎo)致腸道功能障礙，影響其免疫功能。斷奶后應(yīng)激源會(huì)降低仔豬的飼料攝入量和生長(zhǎng)性能，增加腹瀉等疾病的發(fā)病率?？股卦陴B(yǎng)豬業(yè)中通常用于抑制腸道病原體和改善生長(zhǎng)性能，但自2020年起，我國(guó)飼料中全面禁止添加抗生素，因此，尋找綠色安全可靠的飼料添加劑，降低仔豬斷奶應(yīng)激，提高仔豬生產(chǎn)性已能成為畜牧業(yè)的研究熱點(diǎn)[1]。植物性飼料添加劑（如多糖、精油和多酚）被認(rèn)為是改善仔豬生長(zhǎng)性能的可選替代品，可用于保持腸道健康或抑制病原體。近年來(lái)，植物源多糖因其對(duì)正常健康細(xì)胞毒性低、對(duì)動(dòng)物的免疫調(diào)節(jié)活性無(wú)明顯副作用而日益受到學(xué)術(shù)界和生產(chǎn)者的關(guān)注[2]。研究表明，在飼料中添加多糖可以增強(qiáng)仔豬、肉雞和家兔的生長(zhǎng)性能，改善胃腸道微環(huán)境，提高飼料利用率，增強(qiáng)免疫功能[3-5]。甘草多糖（glyeynhiza polysaeeharide，GCP）是從中藥甘草中提取的一種天然植物多糖，其被證明具有免疫調(diào)節(jié)[6]、抗腫瘤[7]、抗氧化[8]和抗炎活性[9]，作為飼料添加劑在養(yǎng)殖業(yè)中廣泛使用[10]。河南科技大學(xué)獸醫(yī)營(yíng)養(yǎng)代謝病課題組的研究表明，在飼料中添加甘草多糖可以增強(qiáng)肉雞和哺乳仔豬的免疫力，提高生長(zhǎng)性能[11-13]。目前尚無(wú)研究甘草多糖對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能及其飼糧適宜添加量的影響。因此，試驗(yàn)在斷奶仔豬基礎(chǔ)飼糧中添加不同濃度的甘草多糖，研究對(duì)其生長(zhǎng)性能、血常規(guī)、血清生化及抗氧化性能的影響，為甘草多糖作為抗生素的一種新替代品提供一定理論依據(jù)和參考[14]。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

甘草多糖由洛陽(yáng)藍(lán)斯利有限公司提供，多糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)24%。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)采用單因子試驗(yàn)設(shè)計(jì)，選用體重接近、健康狀況良好的35日齡“長(zhǎng)×大”二元雜交斷奶仔豬300頭，各組試驗(yàn)仔豬初始體重（10.33±0.62）kg，完全隨機(jī)分為5組，每組6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10頭豬，公母各半。對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)飼糧，試驗(yàn)組分別在基礎(chǔ)飼糧中添加500、1 000、2 000 mg/kg和5 000 mg/kg的甘草多糖。試驗(yàn)預(yù)試期5 d，正試期16 d。

飼養(yǎng)試驗(yàn)在河南銀發(fā)牧業(yè)有限公司辛店豬場(chǎng)進(jìn)行。仔豬于全封閉豬舍的半漏縫地板上飼養(yǎng)，試驗(yàn)前對(duì)圈舍進(jìn)行徹底清掃消毒。各組每天5：30、9：30、13：30、17：30 飼喂，自由采食和飲水，舍內(nèi)溫度穩(wěn)定維持在25 ℃左右，日常管理及防疫按豬場(chǎng)常規(guī)程序進(jìn)行?；A(chǔ)飼糧參照NRC（2012）斷奶仔豬營(yíng)養(yǎng)需求配制，基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平[12-13]見(jiàn)表1。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)）

1.3 樣品的采集

試驗(yàn)結(jié)束后，隨機(jī)在每個(gè)重復(fù)組中挑選1頭體重接近的仔豬，一次性注射器前腔靜脈采血10 mL 左右，注入抗凝管1 mL混勻，2 h內(nèi)測(cè)定血常規(guī)，其余注入不含抗凝血的真空管中，4 000 r/min 離心15 min，吸出血清，EP管分裝，-80 ℃保存，待測(cè)。

1.4 測(cè)定指標(biāo)及方法

1.4.1 生長(zhǎng)性能

在試驗(yàn)開(kāi)始和結(jié)束時(shí)測(cè)量每頭仔豬的體重，并在試驗(yàn)期間記錄每欄仔豬的飼料消耗量。計(jì)算各組的平均日增重（ADG）、平均日采食量（ADFI）和料重比（F/G）。試驗(yàn)期間觀察仔豬的肛門和排糞情況，計(jì)算試驗(yàn)仔豬的腹瀉率。

腹瀉率（%）=100×[（每天腹瀉頭數(shù)×腹瀉天數(shù)）/（每組仔豬頭數(shù)×試驗(yàn)天數(shù)）]

1.4.2 血常規(guī)指標(biāo)

采用四分類全自動(dòng)血液分析儀（Mindray BC-30 Vet）測(cè)定血液中白細(xì)胞數(shù)（WBC）、淋巴細(xì)胞數(shù)（Lym#）、中性粒細(xì)胞數(shù)（Neut#）、單核細(xì)胞數(shù)（Mon#）、嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)（Eos#）、紅細(xì)胞數(shù)（RBC）、血紅蛋白（HGB）、血小板數(shù)（PLT）。

1.4.3 血清生化指標(biāo)

使用全自動(dòng)生化分析儀（DOTOP-8018）測(cè)定血清中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、球蛋白（GLB）、總膽紅素（TBIL）、堿性磷酸酶（ALP）、總膽固醇（CHO）、三酰甘油（TG）、尿素氮（UA）、肌酐（CREA）、尿酸（URCA）含量和葡萄糖（GLU）含量。

1.4.4 血清抗氧化指標(biāo)

血清中丙二醛（MDA）含量采用硫代巴比妥酸法測(cè)定；血清過(guò)氧化氫酶（CAT）活性采用鉬酸銨法測(cè)定[15]；谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px）活性采用比色法測(cè)定；總抗氧化能力（T-AOC）及超氧化物歧化酶（SOD）活性采用微板法測(cè)定。以上試劑盒均購(gòu)自南京建成生物工程研究所有限公司，嚴(yán)格按說(shuō)明書要求操作[14]。

1.5 數(shù)據(jù)處理及分析

試驗(yàn)所得數(shù)據(jù)用Excel 2019進(jìn)行初步處理，計(jì)算結(jié)果用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（Mean±SD）”表示，采用SPSS 22.0軟件進(jìn)行單因素方差分析（one-way ANOVA），采用Duncan’s法多重比較檢驗(yàn)，P＜0.05為差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 甘草多糖對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能的影響（見(jiàn)表2）

表2 甘草多糖對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能的影響

由表2 可知，各組之間斷奶仔豬的終末體重和ADFI 差異不顯著（P＞0.05）。與對(duì)照組相比，飼糧中添加500、1 000、2 000 mg/kg組和5 000 mg/kg組的斷奶仔豬ADFI 分別提高了9.45%、11.81%、13.81%和10.29%；添加1 000 mg/kg 組和2 000 mg/kg 組的斷奶仔豬ADG均顯著升高（P＜0.05），分別升高了16.70%和19.98%；添加500、1 000、2 000 mg/kg組和5 000 mg/kg組的斷奶仔豬F/G分別降低了2.40%（P＞0.05）、4.79%（P＜0.05）、4.79%（P＜0.05）和3.59%（P＞0.05）。1 000 mg/kg組和2 000 mg/kg 組的斷奶仔豬F/G 顯著降低（P＜0.05），500、1 000 mg/kg 組和2 000 mg/kg 組的斷奶仔豬的腹瀉率顯著降低（P＜0.05）。

2.2 甘草多糖對(duì)斷奶仔豬血常規(guī)指標(biāo)的影響（見(jiàn)表3）

表3 甘草多糖對(duì)斷奶仔豬血常規(guī)的影響

由表3可知，1 000 mg/kg組斷奶仔豬血液中WBC、RBC、Neut#和PLT最高，顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），而添加500、2 000 mg/kg組和5 000 mg/kg組則相比于對(duì)照組有所提高，其他指標(biāo)各組之間差異不顯著（P＞0.05）。

2.3 甘草多糖對(duì)斷奶仔豬血清生化指標(biāo)的影響（見(jiàn)表4）

表4 甘草多糖對(duì)斷奶仔豬血清生化指標(biāo)的影響

由表4 可知，1 000 mg/kg 組和2 000 mg/kg 組斷奶仔豬血清中ALP 含量顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），1 000 mg/kg 組血清中TP 含量和GLB 含量最高，顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），1 000 mg/kg 組和2 000 mg/kg組血清中CREA 含量顯著低于對(duì)照組（P＜0.05）。其他指標(biāo)各組之間無(wú)顯著差異（P＞0.05）。

2.4 甘草多糖對(duì)斷奶仔豬血清抗氧化指標(biāo)的影響（見(jiàn)表5）

表5 甘草多糖對(duì)斷奶仔豬血清抗氧化指標(biāo)的影響

由表5可知，1 000 mg/kg組和2 000 mg/kg組斷奶仔豬血清中T-AOC顯著高于對(duì)照組和5 000 mg/kg組（P＜0.05），1 000 mg/kg組斷奶仔豬血清中MDA含量最低，顯著低于對(duì)照組（P＜0.05）。甘草多糖組的斷奶仔豬血清中SOD、GSH-Px和CAT活力比對(duì)照組均有所提高，但無(wú)顯著差異（P＞0.05）。

3 討論

3.1 甘草多糖對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能的影響

仔豬在斷奶后通常會(huì)出現(xiàn)腸道功能受損，免疫力和抗氧化能力下降等應(yīng)激反應(yīng)[16]，這導(dǎo)致了飼料利用率降低，生長(zhǎng)延遲，發(fā)病率和死亡率增加等問(wèn)題[17]。研究報(bào)道，多糖對(duì)畜禽生長(zhǎng)性能有積極的影響[18]，如黃芪多糖和人參多糖均能提高仔豬日增重，降低飼料系數(shù)和仔豬腹瀉率[19]。飼料中添加枸杞多糖可以提高斷奶仔豬的日增重，高劑量組明顯降低料重比和腹瀉率[5]。添加0.1%劑量的白術(shù)粗多糖可提高斷奶仔豬的小腸絨毛高度，降低絨毛高度與隱窩深度的比值，改善腸道組織形態(tài)，提高消化功能，降低仔豬腹瀉率，從而提高生長(zhǎng)性能[20]。刺五加多糖可通過(guò)調(diào)節(jié)促炎性細(xì)胞因子的釋放，從而促進(jìn)仔豬飲食，以獲得更好的生長(zhǎng)性能[21]。多糖可以增加腸道內(nèi)乳酸桿菌和雙歧桿菌等有益菌的數(shù)量，減少腸道內(nèi)大腸桿菌的數(shù)量，提高營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)吸收，調(diào)節(jié)腸道內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，從而降低斷奶仔豬的腹瀉率[22]。本研究結(jié)果表明，飼糧中添加甘草多糖可以提高斷奶仔豬的平均日采食量和平均日增重，降低料重比和腹瀉率，其中添加1 000 mg/kg 甘草多糖效果最佳。這可能是由于甘草多糖在一定程度上改善了仔豬的腸道健康，對(duì)腸黏膜有保護(hù)作用，提高了對(duì)養(yǎng)分的吸收率，維持了腸道微生物區(qū)系的平衡和腸道屏障的完整性[23]。而當(dāng)甘草多糖的添加劑量為5 000 mg/kg，雖然促進(jìn)了仔豬的飲食，但腹瀉率和料重比也明顯提高，這可能是過(guò)量采食，加重腸胃消化負(fù)擔(dān)，引起仔豬消化不良。以上可見(jiàn)，盡管甘草多糖實(shí)際作用機(jī)制尚不清楚，但適量添加有利于斷奶仔豬的生長(zhǎng)性能和預(yù)防腹瀉。

3.2 甘草多糖對(duì)斷奶仔豬血常規(guī)指標(biāo)的影響

血常規(guī)是最基本的血液檢驗(yàn)，反映動(dòng)物機(jī)體或器官的新陳代謝和健康狀況。血液中的任何有形成分發(fā)生病理變化，都會(huì)影響全身的組織器官，因而血常規(guī)指標(biāo)對(duì)了解機(jī)體的健康狀況和疾病的嚴(yán)重程度有很大的幫助[24]。WBC數(shù)量與機(jī)體的抵抗力相關(guān)，是體內(nèi)的免疫衛(wèi)士，當(dāng)WBC減少時(shí)，細(xì)菌、病毒、寄生蟲等有害微生物易侵入機(jī)體內(nèi)。中性粒細(xì)胞為血液中的主要吞噬細(xì)胞，在急性感染中起重要作用[25]。RBC是動(dòng)物血液中數(shù)量最多的一種細(xì)胞，隨著血液流動(dòng)把氧氣運(yùn)送到機(jī)體的各個(gè)部位組織，同時(shí)將二氧化碳排出體外，維持機(jī)體新陳代謝的正常進(jìn)行，還具有免疫功能[26]。從本次試驗(yàn)的數(shù)據(jù)來(lái)看，飼糧中添加1 000 mg/kg甘草多糖的斷奶仔豬血液中WBC、Neut#和RBC數(shù)目最高，顯著高于對(duì)照組，且其他甘草多糖組較對(duì)照組都有所升高，提示基礎(chǔ)飼糧中添加適量甘草多糖有助提高仔豬新陳代謝能力，促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)運(yùn)輸與吸收，進(jìn)而提高機(jī)體免疫力。

3.3 甘草多糖對(duì)斷奶仔豬血清生化指標(biāo)的影響

血清中含有在動(dòng)物生理和病理活動(dòng)中發(fā)揮重要作用的各種成分，在一定程度上可反映動(dòng)物的健康狀況。ALT和AST是血清中最敏感的兩個(gè)細(xì)胞內(nèi)酶，它們的含量在一定程度反映了肝臟代謝能力的強(qiáng)弱狀況。在正常范圍內(nèi)，ALT 和AST 升高，反映了動(dòng)物在這個(gè)時(shí)期生長(zhǎng)速度較快，肝臟代謝能力旺盛。本試驗(yàn)研究中，飼糧中添加甘草多糖對(duì)斷奶仔豬血清ALT、AST沒(méi)有顯著影響，而斷奶仔豬正處在快速發(fā)育的時(shí)期，飼糧添加甘草多糖又促進(jìn)仔豬的采食量，脂肪、蛋白質(zhì)和糖類等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)都是在肝臟中進(jìn)行代謝，并需要大量的酶，與對(duì)照組相比略微升高，但無(wú)不良影響。ALP 活性反映動(dòng)物機(jī)體的生長(zhǎng)速度和代謝強(qiáng)弱[27]，本研究中，飼糧中添加甘草多糖的斷奶仔豬血清中ALP升高，且1 000 mg/kg 組和2 000 mg/kg 組顯著高于對(duì)照組，說(shuō)明甘草多糖能夠加快仔豬新陳代謝，提高其生長(zhǎng)性能。血清中TP主要由ALB和GLB組成，反映了機(jī)體的蛋白質(zhì)水平，在刺激或緩和免疫激活方面發(fā)揮重要作用[14]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，飼糧中添加1 000 mg/kg甘草多糖，可以顯著提高斷奶仔豬血清中TP 和GLB的含量，說(shuō)明飼糧中添加甘草多糖可促進(jìn)肝臟和心臟的蛋白質(zhì)合成和代謝，且提高免疫功能。CREA 反映的是腎臟功能的強(qiáng)弱，飼糧中添加甘草多糖能夠降低血清中CREA含量，促進(jìn)機(jī)體代謝，排出蓄積毒素，減輕對(duì)腎臟的損傷。

3.4 甘草多糖對(duì)斷奶仔豬血清抗氧化能力的影響

正常情況下，豬體內(nèi)自由基代謝處于動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)。斷奶應(yīng)激抑制抗氧化酶的活性，引起的氧自由基生成過(guò)多會(huì)對(duì)斷奶仔豬造成損害，這種氧化失衡會(huì)導(dǎo)致免疫抑制，增加對(duì)各種疾病的敏感性，并對(duì)動(dòng)物的生長(zhǎng)性能產(chǎn)生負(fù)面影響。T-AOC 則反映了機(jī)體抗氧化系統(tǒng)功能整體狀況。酶促抗氧化系統(tǒng)包括SOD、GSH-Px 和CAT。SOD 能清除超氧陰離子自由基，消除超氧陰離子自由基對(duì)細(xì)胞膜的損傷。GSH-Px催化過(guò)氧化氫（H2O2）分解，可以起到保護(hù)細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)和功能的完整的作用。CAT 可以將H2O2轉(zhuǎn)化為H2O。MDA是脂質(zhì)過(guò)氧化降解的主要產(chǎn)物[28]。Zhang等[29]研究表明，在飼糧中添加1 000 mg/kg甘草多糖，可以提高肉雞血清中總超氧化物歧化酶（T-SOD）活性，降低MDA含量。飼糧中添加太子參莖葉多糖可提高斷奶仔豬的血清SOD活性，降低MDA含量，這說(shuō)明太子參莖葉多糖可以提高體內(nèi)抗氧化酶活性，減輕自由基損傷，從而增強(qiáng)抗氧化功能[15]。路則慶等[30]研究表明，飼糧中添加富硒胞外多糖（Se-EPS）顯著提高了血清TAOC，顯著降低了血清MDA 含量。本試驗(yàn)研究結(jié)果表明，在飼糧中添加1 000 mg/kg 甘草多糖顯著提高了血清中T-AOC的活性，顯著降低了MDA的含量，與對(duì)照組相比，甘草多糖組斷奶仔豬血清中SOD、GSHPx 和CAT 的活性都有所提高，說(shuō)明甘草多糖可以提高動(dòng)物的抗氧化能力[31]，與張才等[13]研究結(jié)果一致。不過(guò)，甘草多糖是一種結(jié)構(gòu)非常復(fù)雜的物質(zhì)，其抗氧化能力的機(jī)理目前尚不清楚，還需要進(jìn)一步研究。

4 結(jié)論

①飼糧中添加甘草多糖能有效提高斷奶仔豬ADFI，降低腹瀉率，且添加1 000 mg/kg和2 000 mg/kg甘草多糖顯著提高斷奶仔豬的ADG和顯著降低F/G，提高生長(zhǎng)性能。

②飼糧中添加1 000 mg/kg甘草多糖顯著提高斷奶仔豬血液中WBC、RBC、Neut#、Neu%和PLT，有利于促進(jìn)氧氣和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)運(yùn)輸，提高免疫功能。

③飼糧中添加1 000 mg/kg 和2 000 mg/kg 甘草多糖顯著升高斷奶仔豬血清中ALP含量，顯著降低血清中CREA含量，且添加1 000 mg/kg甘草多糖顯著升高血清中TP和GLB含量，增強(qiáng)肝腎新陳代謝能力，提高免疫性能。

④飼糧中添加1 000 mg/kg 和2 000 mg/kg 甘草多糖顯著升高斷奶仔豬血清總T-AOC 活性，添加1 000 mg/kg 甘草多糖顯著降低血清MDA 含量，提高斷奶仔豬抗氧化能力。