彭夢(mèng)俠，郭金卡

（嘉應(yīng)學(xué)院 化學(xué)與環(huán)境學(xué)院/廣東省山區(qū)特色農(nóng)業(yè)資源保護(hù)與精準(zhǔn)利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 梅州 514015）

氫氯噻嗪是利尿類(lèi)的一種降壓藥，廣泛運(yùn)用于臨床，用于治療高血壓、水腫，是高血壓防治指南的一線藥物.其調(diào)節(jié)血壓的原理是通過(guò)排鈉利尿，減少細(xì)胞外容量，降低高血壓容量負(fù)荷.氫氯噻嗪的療效得到肯定的同時(shí)也存在一些不良反應(yīng)，如低血鉀、脂代謝紊亂、高鈣低磷血癥、高尿酸痛風(fēng)、直立性低血壓等.[1-2]市售氫氯噻嗪片的廠家較多，價(jià)格相差較大，藥效是否相同是消費(fèi)者關(guān)心的問(wèn)題，更是藥物監(jiān)督部門(mén)需要解決的問(wèn)題.

目前，氫氯噻嗪含量的檢測(cè)以高效液相色譜法為主，以乙腈-水（12∶88）流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為271 nm，氫氯噻嗪質(zhì)量濃度線性范圍為2.05～10.25μg/mL，平均回收率為98.48%.該方法簡(jiǎn)便，靈敏度高.還有紫外分光光度法：在最大吸收波長(zhǎng)272 nm 測(cè)定吸收值，計(jì)算氫氯噻嗪片的含量，在2.0～14.0 μg/mL濃度范圍內(nèi)成較好的線性關(guān)系.毛細(xì)管電泳法：毛細(xì)管電泳法測(cè)定復(fù)方降壓片中的維生素B1、維生素B6、氫氯噻嗪等五種組分的含量，在測(cè)定范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系，回收率高.反高效液相色譜法：以ZORBAX C18為色譜柱，0.02 mol/L 磷酸鹽緩沖液-甲醇（80∶20）為流動(dòng)相，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為226 nm，重現(xiàn)性好，回收率高.[3-8]

近年來(lái)，近紅外光譜技術(shù)訊速發(fā)展，在藥品檢測(cè)、化工、食品等方面得到了廣泛的應(yīng)用.[9-16]與傳統(tǒng)分析方法相比，近紅外技術(shù)操作簡(jiǎn)單、成本低、不受樣品狀態(tài)影響等特點(diǎn).本文擬采用近紅外光譜技術(shù)，建立樣品中氫氯噻嗪的定量分析模型，為藥品監(jiān)督管理部門(mén)日常打擊假劣藥品提供一種可靠便捷快速的分析方法.

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器

LC-20AT 高效液相色譜儀（日本島津公司）、AntarisⅡ型近紅外（FT-NIR）光譜儀（美國(guó)賽默飛科技公司）、Super-Shak IR 震蕩機(jī)（日本株式會(huì)社）.

1.2 實(shí)驗(yàn)藥品、樣品

表1 實(shí)驗(yàn)藥品及樣品

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 參比方法：HPLC 測(cè)定樣品中的氫氯噻嗪含量[8]

流動(dòng)相：磷酸二氫鈉15.60 g，加少量的超純水溶解、攪拌，待達(dá)到室溫時(shí)，加水稀釋至1 000 mL，再加111.1 mL 乙腈，磷酸二氫鈉-乙腈體積比例為9∶1，然后用磷酸調(diào)節(jié)pH 至3.00，用0.45μm 的濾膜在溶劑抽濾器上抽濾.

色譜柱條件：C18 烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱；以磷酸二氫鈉-乙腈（9∶1）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為271 nm；流速：1.5 mL/min；進(jìn)樣量：20 μL；柱溫：30 ℃.

標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：取10 mg 氫氯噻嗪標(biāo)準(zhǔn)品置于100 mL 的容量瓶中，用乙腈定容，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液.用移液管移取氫氯噻嗪對(duì)照品儲(chǔ)備液分別向7 個(gè)10 mL 容量瓶加入1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、8.0 mL，用乙腈定容，配制不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液.橫坐標(biāo)用質(zhì)量濃度(X)、縱坐標(biāo)用色譜峰面積(Y)，做線性回歸，得到氫氯噻嗪的線性回歸方程.

測(cè)定樣品中氫氯噻嗪的含量：用震蕩機(jī)將樣品氫氯噻嗪片制成粉末，稱(chēng)取 10 mg 樣品，置于50 mL容量瓶中，用乙腈定容，超聲5 min.每種樣品取兩個(gè)樣，得到的值取平均，結(jié)果為樣品中氫氯噻嗪的實(shí)測(cè)值.

1.3.2 樣品的近紅外光譜測(cè)定

光譜采集條件：用空氣做背景，用積分球模塊附件采樣，波數(shù)范圍10 000～4 000 cm-1，掃描64 次，分辨率設(shè)為8 cm-1，優(yōu)化增益設(shè)為1 x.

光譜的采集：取樣品10 片，用震蕩機(jī)研磨成粉（震蕩機(jī)的轉(zhuǎn)速設(shè)為4 000 轉(zhuǎn)/min，時(shí)間設(shè)為1 min)，分成3 份，裝入3 個(gè)樣品杯中，用積分球模塊采集其譜圖，每個(gè)樣采集5 張圖，每種樣品得到15 張譜圖.

1.3.3 氫氯噻嗪片中氫氯噻嗪含量的定量分析模型的建立及外部驗(yàn)證

以1.3.1 HPLC 法得到的樣品中氫氯噻嗪含量為參比方法，從實(shí)驗(yàn)樣品中選A1-A 10 為建立模型的訓(xùn)練集樣品，任意取每個(gè)樣品中的12 張譜圖為訓(xùn)練集樣本，其余3 張譜圖為內(nèi)部驗(yàn)證集樣本.采用偏最小二乘法（PLS），建立氫氯噻嗪片中氫氯噻嗪含量的定量分析模型.

對(duì)優(yōu)化出的模型進(jìn)行外部驗(yàn)證，進(jìn)一步驗(yàn)證模型的準(zhǔn)確性.未參與建立模型的A11-A 12 樣品為外部驗(yàn)證樣品，每個(gè)樣品選3 個(gè)樣本譜圖（每個(gè)樣本測(cè)5 張譜圖，取平均譜圖），對(duì)模型進(jìn)行外部驗(yàn)證.

2 結(jié)果與討論

2.1 HPLC 分析樣品結(jié)果

按照1.3.1 的方法，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（見(jiàn)圖1），標(biāo)準(zhǔn)曲線呈線性相關(guān)，線性回歸方程為y=50,225,081.69x-4,385.53，相關(guān)系數(shù)R2=0.999 7，線性關(guān)系良好.得到A1-A 12 樣品中氫氯噻嗪的含量，氫氯噻嗪的質(zhì)量百分比在9.37%～31.10%之間.

圖1 氫氯噻嗪標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.2 樣品中氫氯噻嗪含量的分析模型的建立

按照1.3.3 建模，用常規(guī)光譜數(shù)據(jù)、一階導(dǎo)數(shù)光譜數(shù)據(jù)和二階導(dǎo)數(shù)光譜數(shù)據(jù)，結(jié)合手動(dòng)選擇波段和預(yù)處理方式優(yōu)化模型.結(jié)果表明，用一階導(dǎo)數(shù)光譜數(shù)據(jù)，選5 939.01～5 815.21 cm-1、4 443.34～4 170.92 cm-1等兩個(gè)波段，諾里斯導(dǎo)數(shù)濾噪，得到的模型最佳.最優(yōu)模型的校正均方差(RMSEC)：0.297，校正系數(shù)Rc：0.999 1，樣品預(yù)測(cè)均方差(RMSEP)：0.263，預(yù)測(cè)系數(shù)Rp：0.995 3，模型的性能指數(shù)（performance Index）：95.5.模型氫氯噻嗪片樣本中氫氯噻嗪預(yù)測(cè)值與真實(shí)值的關(guān)系見(jiàn)圖2.

圖2 樣品中氫氯噻嗪的預(yù)測(cè)值與真實(shí)值

2.3 最優(yōu)模型的外部驗(yàn)證

用1.3.3 的方法，對(duì)2.2 得到的最優(yōu)模型作外部驗(yàn)證，得到A11、A12 樣品中氫氯噻嗪含量的預(yù)測(cè)值，如表2.

表2 模型的預(yù)測(cè)值及其與HPLC 測(cè)定值的誤差

從表2 可看出，模型的預(yù)測(cè)值與HPLC 實(shí)測(cè)值的絕對(duì)誤差：-0.34%～0.61%，相對(duì)誤差：-1.30%～2.19%.外部驗(yàn)證結(jié)果，進(jìn)一步證明了得到的模型對(duì)氫氯噻嗪片中氫氯噻嗪含量的預(yù)測(cè)是準(zhǔn)確可靠的.

3 結(jié)論

以HPLC 法為參比方法分析樣品中氫氯噻嗪的含量，測(cè)定樣品的近紅外光譜，用偏最小二乘法，建立了粉末樣品中氫氯噻嗪的快速、準(zhǔn)確定量分析模型.在應(yīng)用模型時(shí)，僅僅需要采集待測(cè)樣品的近紅外光譜圖，然后導(dǎo)入模型，迅速得到分析結(jié)果.建立了一種檢測(cè)氫氯噻嗪片中氫氯噻嗪含量的新方法.這種新方法不用溶劑、不用對(duì)照品、不用對(duì)樣品進(jìn)行處理，是一種快速可靠的檢測(cè)方法.