范柏華 陸筱祎

1.中國(guó)人民解放軍聯(lián)勤保障部隊(duì)第九〇四醫(yī)院干部病房，江蘇無(wú)錫 214000；2.江蘇省蘇州市立醫(yī)院東區(qū)消化內(nèi)科，江蘇蘇州 215000

慢性乙型肝炎是我國(guó)常見的傳染性疾病，是由于感染乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）所引發(fā)的病毒性肝炎。在疾病的進(jìn)展中，慢性乙型肝炎患者隨著肝小葉結(jié)構(gòu)的破壞，可進(jìn)展為肝硬化[1-2]。既往有研究報(bào)道[3]，肝硬化的發(fā)生、發(fā)展與白細(xì)胞分化抗原40配體（leukocyte differentiation antigen 40 ligand，CD40L）信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑相關(guān)。大量研究顯示[4-5]，CD40L 單核苷酸多態(tài)性（single nucleotide polymorphism，SNP）與自身免疫性疾病的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。CD40L 基因多態(tài)性與老年慢性乙型肝炎后肝硬化的發(fā)生及預(yù)后的關(guān)系，目前尚鮮見報(bào)道。本研究旨在探究CD40L 基因多態(tài)性與老年慢性乙型肝炎后肝硬化的發(fā)生及預(yù)后，為早期對(duì)該類患者的預(yù)后進(jìn)行干預(yù)提供一定的理論指導(dǎo)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016 年5 月至2019 年3 月中國(guó)人民解放軍聯(lián)勤保障部隊(duì)第九〇四醫(yī)院（以下簡(jiǎn)稱“我院”）收治的82 例老年慢性乙型肝炎后肝硬化患者，記為研究組，并選擇同一時(shí)間段在我院進(jìn)行體檢的80 名健康者為對(duì)照組。其中研究組中男45 例，女37 例；年齡61～78 歲，平均（70.15±6.38）歲。對(duì)照組中男42 例，女38 例；年齡61～80 歲，平均（70.33±6.52）歲。

納入標(biāo)準(zhǔn)：年齡≥60 歲；研究組均符合肝硬化的診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]，且均由慢性乙型肝炎導(dǎo)致；對(duì)照組均為體檢健康者。

排除標(biāo)準(zhǔn)：合并肝癌或其他惡性腫瘤；妊娠或哺乳期婦女；合并膽汁淤積性、酒精性等肝??；非HBV感染導(dǎo)致的肝硬化。

1.2 血液樣本采集及CD40L 基因多態(tài)性檢測(cè)

抽取所有研究對(duì)象全血清晨空腹靜脈血5 ml，加入抗凝管內(nèi)，3000 r/min 離心5 min（離心半徑8 cm），收集細(xì)胞沉淀用于基因組DNA 檢測(cè)。通過(guò)PCRRFLP 檢測(cè)進(jìn)行基因型鑒定。提取全血基因組DNA（試劑盒購(gòu)于江蘇昱安生物科技有限公司，生產(chǎn)批號(hào)：BD20190915），通過(guò)使用NanoDrop 分光光度計(jì)（Thermo Fisher，USA），檢測(cè)其純度和濃度；采用Sequenom軟件進(jìn)行SNP 基因分型。根據(jù)電泳條帶，確定CD40L基因多態(tài)性：有兩條DNA 條帶（258、172 bp）為CC型；有3 條DNA 條帶（258、172、100 bp）為CG 型；1 條DNA 條帶（258 bp）為GG 型。

1.3 治療方法

所有患者均進(jìn)行抗病毒、常規(guī)常規(guī)保肝、免疫調(diào)節(jié)、抗纖維化、利尿等相應(yīng)對(duì)癥治療。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 22.0 軟件行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，組間比較采用t 檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用百分率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；采用logistic 回歸模型進(jìn)行多因素分析。繪制Kaplan-Meier生存曲線。以P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組一般資料比較

兩組性別、年齡、吸煙史及飲酒史比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞0.05）。見表1。

2.2 兩組CD40L 基因型Hardy-Weinberg 遺傳平衡檢驗(yàn)

兩組CD40L 基因型分別經(jīng)Hardy-Weinberg 遺傳平衡檢驗(yàn)，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞0.05），符合Hardy-Weinberg 平衡定律。見表2。

表2 兩組CD40L 基因型Hardy-Weinberg 遺傳平衡檢驗(yàn)

2.3 兩組CD40L 基因多態(tài)性比較

研究組G 等位基因頻率高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.05）。見表3。

表3 兩組CD40L 基因型分布、等位基因頻率比較[例（%）]

2.4 CD40L 基因多態(tài)性與老年慢性乙型肝炎后肝硬化的相關(guān)性

以差異性的CD40L 基因型為自變量，老年慢性乙型肝炎后肝硬化預(yù)后情況為因變量，死亡=1，生存=0，進(jìn)一步采用logistic 回歸模型分析，CG（OR=1.809）和GG（OR=2.264）基因型老年慢性乙型肝炎后肝硬化患者預(yù)后不良發(fā)生的相對(duì)危險(xiǎn)度分別是CC 基因型的1.809 倍和2.624 倍（P ＜0.05）。見表4。

表4 CD40L 基因多態(tài)性與老年慢性乙型肝炎后肝硬化預(yù)后不良發(fā)生的logistic 回歸分析

2.5 CD40L 基因多態(tài)性與老年慢性乙型肝炎后肝硬化患者預(yù)后分析

隨訪1 年結(jié)束，CD40L G 基因老年慢性乙型肝炎后肝硬化患者生存率為62.90%（39/62）；CD40L 非G基因老年慢性乙型肝炎后肝硬化患生存率為85.00%（17/20）；CD40L G 基因與非G 基因患者生存曲線比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=6.138，P ＜0.05）。見圖1。

圖1 老年慢性乙型肝炎后肝硬化患者白細(xì)胞分化抗原40 配體基因生存曲線

3 討論

慢性乙型肝炎后肝硬化的發(fā)生與HBV 的感染、侵襲有關(guān)，同時(shí)也與患者的遺傳易感性及免疫功能有關(guān)[7-11]。相關(guān)研究報(bào)道[12-14]，宿主免疫功能障礙是其病理?yè)p害的主要原因，CD40-CD40L 通路參與和維持機(jī)體正常生理狀態(tài)中具有重要作用。探討CD40L G 基因多態(tài)性與老年慢性乙型肝炎后肝硬化相關(guān)性，是預(yù)防、改善預(yù)后的重要途徑。

本研究結(jié)果顯示，兩組CD40L 基因型分別經(jīng)Hardy-Weinberg 遺傳平衡檢驗(yàn)，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P >0.05），說(shuō)明本研究所選群體代表性良好。本研究結(jié)果提示與健康者比較，老年慢性乙型肝炎后肝硬化患者G 等位基因頻率明顯偏高。Martínez-Fernández 等[15]研究顯示，在急性冠狀動(dòng)脈綜合征患者中rs4810485與高sCD40 水平相關(guān)。logistic 回歸模型分析結(jié)果顯示以CC 基因型作為參照，CG 和GG 基因型老年慢性乙型肝炎后肝硬化患者預(yù)后不良發(fā)生的相對(duì)危險(xiǎn)度分別是CC 基因型的1.809 倍和2.624 倍，具有更高的預(yù)后不良發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，推測(cè)突變雜合基因型CG 及純合的GG 基因型可增加老年慢性乙型肝炎后肝硬化預(yù)后不良發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)，為預(yù)后不良發(fā)生的危險(xiǎn)基因型。CD40L 表達(dá)于活化的T 細(xì)胞、血小板中，在機(jī)體的免疫調(diào)控中發(fā)揮著重要作用[16-20]。有關(guān)研究發(fā)現(xiàn)[21-25]，乙肝肝硬化患者CD40-rs1883832 的CT 基因型、TT 基因型高于健康對(duì)照組。本研究發(fā)現(xiàn)，CD40L G 基因與非G 基因患者的死亡率曲線比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示CD40L 基因C→G 突變可能會(huì)對(duì)老年慢性乙型肝炎后肝硬化患者臨床表現(xiàn)產(chǎn)生一定的影響，近而影響預(yù)后，此基因多態(tài)性可能是決定個(gè)體肝硬化預(yù)后產(chǎn)生差異的分子基礎(chǔ)。

綜上所述，CD40L 基因多態(tài)性與老年慢性乙型肝炎后肝硬化患者預(yù)后死亡有關(guān)，該基因位點(diǎn)GG、CG基因型可增加死亡的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，其所涉及的有關(guān)機(jī)制目前還尚不清楚，有待后續(xù)進(jìn)一步進(jìn)行深入研究。