周建征，李 林，任曉曦

（煙臺(tái)市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，山東煙臺(tái) 264000）

目前，有機(jī)磷農(nóng)藥已成為我國(guó)糧食與蔬菜生產(chǎn)中使用最為廣泛的一類殺蟲殺菌農(nóng)藥。由于不合理使用，其殘留量及毒性已嚴(yán)重威脅著人類健康，此類食品安全問題引起人們的普遍關(guān)注與擔(dān)憂，長(zhǎng)期攝入有機(jī)磷農(nóng)藥可表現(xiàn)出一系列病理變化，如肝功能下降、血糖升高、白細(xì)胞吞噬功能減退等，并具有致畸、致癌、致突變作用。因此，國(guó)際和國(guó)內(nèi)都已經(jīng)制定了有機(jī)磷農(nóng)藥在各種糧食中的殘留限量殘留標(biāo)準(zhǔn)。

玉米等糧谷中含有甘油三酯、糖類、纖維、蛋白質(zhì)、無機(jī)鹽、有機(jī)酸、脂溶性成分等多種物質(zhì)，由于含有油脂，而大部分的農(nóng)藥是脂溶性的，檢測(cè)的提取凈化過程中去除含油基質(zhì)的同時(shí)也會(huì)將大部分農(nóng)藥除掉，使得回收率大大降低。因此，提取、凈化前處理方法是關(guān)系有機(jī)磷農(nóng)藥殘留分析的一個(gè)很重要的過程。

近年來，QuEChERS 方法被越來越多地應(yīng)用到農(nóng)藥殘留分析中，該方法采用乙腈提取，用乙二胺-N - 丙基甲硅烷（PSA）、C18和石墨化碳黑（GCB）3 種填料進(jìn)行凈化[1]；PSA 去除有機(jī)酸、脂肪酸和糖類等；C18去除脂類非極性干擾物質(zhì)，GCB 去除色素。曾敏等人[2]運(yùn)用改良的QuEChERS 技術(shù)測(cè)定糧谷中20 種有機(jī)磷農(nóng)藥的氣相色譜- 串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)法，標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)R均大于0.995，回收率為70.5%~105.2%，方法的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD 值為2.4%~15.9%，回收率高且重現(xiàn)性好，定量結(jié)果準(zhǔn)確。范宏等人[3]利用QuEChERS 結(jié)合液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜同時(shí)測(cè)定小米中23 種農(nóng)藥殘留，該方法快速，回收率、精密度和重現(xiàn)性均較好。梁京蕓等人[1]采用QuEChERS 方法結(jié)合超高效- 串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定玉米中種菌唑殘留，并同時(shí)與液液萃取（LLE） 和固相萃?。⊿PE） 2 種樣品前處理法比較，QuEChERS 法回收率不低于87%，定量限為0.01 mg/kg，回收率更優(yōu)于其他2 種前處理方法。

雖然較多的研究采用QuEchERS 方法檢測(cè)糧谷中農(nóng)藥殘留，但大多基于質(zhì)譜的分析，解譜過程長(zhǎng)，試驗(yàn)將QuEchERS 與氣相色譜結(jié)合，建立一種簡(jiǎn)便、快捷的玉米中多種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留方法。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

待測(cè)玉米樣品70 份：2020 年度收獲，購(gòu)自山東省煙臺(tái)市，水分為13%~14%，粉碎至玉米粉粒徑小于0.8 mm，密封、冷藏（0~4 ℃） 保存，備用。

QuEchER 試劑盒、陶瓷勻質(zhì)子，安捷倫科技有限公司提供；有機(jī)相濾膜（孔徑0.22 μm，直徑13 mm），天津市津騰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司提供；丙酮（分析純），國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司提供；乙腈（色譜級(jí)），美國(guó)Thermo Fisher 公司提供；乙酸（色譜純），賽默飛世爾科技（中國(guó)） 有限公司提供；樂果、殺螟硫磷、敵敵畏、甲拌磷標(biāo)準(zhǔn)溶液（質(zhì)量濃度均為100 μg/mL），農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研所提供。

1.2 儀器與設(shè)備

7890A 型氣相色譜儀（配有FPD），美國(guó)安捷倫公司產(chǎn)品；TZL-5013 型多管渦流混合器，蘇州珀西瓦爾實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司產(chǎn)品；TDL-40B 型臺(tái)式離心機(jī)，上海安亭科學(xué)儀器廠產(chǎn)品；JXFM110 型錘式旋風(fēng)磨，杭州大吉光電儀器有限公司產(chǎn)品；KQ-250E型超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司產(chǎn)品；電子天平（感量0.1 g），賽多利斯科學(xué)儀器有限公司產(chǎn)品。

1.3 樣品前處理

準(zhǔn)確稱取玉米樣品5.00 g 于50 mL 離心管中，加入8 mL 水，搖勻，靜置30 min，再加入10.0 mL酸化乙腈溶液（含乙酸1%） 及兩顆陶瓷勻質(zhì)子，渦旋1 min，以轉(zhuǎn)速4 000 r/min 離心10 min，加入6 g無水硫酸鎂和1.5 g 乙酸鈉，渦旋混勻1 min，以轉(zhuǎn)速4 500 r/min 離心10 min。取上清液6 mL，加入裝有C18-EC 400 mg，PSA 400 mg，硫酸鎂1200 mg的凈化管中，渦旋混勻1 min，以轉(zhuǎn)速4 000 r/min 離心10 min，凈化后的上部提取液用一次性針管吸出，過0.22 μm 有機(jī)相濾膜，待上機(jī)。

1.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

1.4.1 丙酮混合標(biāo)準(zhǔn)溶液

分別取樂果、殺螟硫磷、敵敵畏、甲拌磷標(biāo)準(zhǔn)溶液（質(zhì)量濃度為100 μg/mL） 各1.0 mL 至10 mL容量瓶，逐級(jí)稀釋，配制成各組分質(zhì)量濃度依次為0.010，0.020，0.050，0.100，0.200 μg/mL 的丙酮混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液系列。

1.4.2 基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液

稱取不含農(nóng)藥的空白玉米樣品5.00 g，按1.3 提取樣品得到基質(zhì)液，分別取樂果、殺螟硫磷、敵敵畏、甲拌磷標(biāo)準(zhǔn)溶液（質(zhì)量濃度為100 μg/mL） 用基質(zhì)液稀釋定容配制成各組分質(zhì)量濃度依次為0.010，0.020，0.050，0.100，0.200 μg/mL 基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液系列。

1.5 儀器條件

色譜柱：HP-5 型石英毛細(xì)管柱（30 m×0.320 mm，0.25 μm）；載氣：N2；進(jìn)樣口溫度230 ℃；FPD 檢測(cè)器溫度240 ℃；氫氣75 mL/min；空氣100 mL/min；柱流速：恒流模式，4 mL/min；進(jìn)樣量1 μL；進(jìn)樣方式：不分流進(jìn)樣；程序升溫：初始溫度120 ℃，保持1 min，以10 ℃/min 升至150 ℃保持4 min，以20 ℃/min 升至250 ℃，保持4 min。

2 結(jié)果與分析

2.1 提取效果

將1.3 所得的提取液上機(jī)測(cè)試，可見經(jīng)QuEch-ERS 方法提取后，空白樣品中的雜質(zhì)干擾并不明顯，用此提取液作為溶劑配成基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，上機(jī)測(cè)試?？梢?，凈化后的基質(zhì)干擾峰對(duì)4 種有機(jī)磷農(nóng)藥峰均無影響，說明采用1.3 方式提取樣品能夠滿足試驗(yàn)需求，能充分有效地除去色素、糖類和脂肪等雜質(zhì)，減少干擾且對(duì)農(nóng)藥吸附作用小；無水硫酸鎂的微放熱效應(yīng)可減少PSA 和C18對(duì)農(nóng)藥的吸附，作為吸水劑可防止水分進(jìn)入色譜柱而延長(zhǎng)其使用壽命。因敵敵畏等有機(jī)磷農(nóng)藥對(duì)pH 值較為敏感，在中性或堿性條件下均易發(fā)生降解或分解，故加入1%的乙酸以使其穩(wěn)定并使各農(nóng)殘得到更好分離。

提取液色譜圖見圖1，基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖見圖2。

圖1 提取液色譜圖

圖2 基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖

2.2 基質(zhì)效應(yīng)

以外標(biāo)法定量，按1.5 條件上機(jī)測(cè)試1.4 所配制的各質(zhì)量濃度基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液及丙酮混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，丙酮混合標(biāo)準(zhǔn)溶液標(biāo)定基質(zhì)標(biāo)，得到4 種農(nóng)藥在玉米中的基質(zhì)效應(yīng)。基質(zhì)標(biāo)的回收率均超過100%，基質(zhì)效應(yīng)均為增強(qiáng)。其中，樂果的基質(zhì)效應(yīng)表現(xiàn)最明顯，表明這4 種有機(jī)磷農(nóng)藥檢測(cè)需要用基質(zhì)標(biāo)定量。

幾種有機(jī)磷農(nóng)藥基質(zhì)效應(yīng)見表1。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線

按1.4.2 配制標(biāo)準(zhǔn)溶液系列，用外標(biāo)法按1.5 上機(jī)測(cè)試，以目標(biāo)化合物質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（X），峰高為縱坐標(biāo)（Y），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性方程和相關(guān)系數(shù)。

線性方程和相關(guān)系數(shù)見表2。表2 表明，在10~200 μg/L 范圍內(nèi)，4 種農(nóng)藥線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)均大于0.999。

表2 線性方程和相關(guān)系數(shù)

2.4 回收率

在試驗(yàn)條件下，在空白玉米樣品中添加0.01，0.04，0.10 mg/kg 3 個(gè)水平，按1.3 進(jìn)行樣品前處理，每個(gè)水平平行測(cè)試6 次，得到平均回收率和精密度。3 個(gè)添加水平下平均回收率為70.4%~89.5%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差5.9%~8.7%，表明該方法準(zhǔn)確度、精密度較好，能夠滿足分析的要求。

加標(biāo)回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（n=6） 見表3。

表3 加標(biāo)回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（n=6）

3 結(jié)論

建立了改進(jìn)的QuEchERS 方法與氣相色譜結(jié)合測(cè)定玉米中敵敵畏、殺螟硫磷、樂果、甲拌磷4 種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留方法，回收率為70.4%~89.5%，表明方法準(zhǔn)確度、精密度較好，符合糧谷中農(nóng)藥殘留限量標(biāo)準(zhǔn)要求。改進(jìn)的QuEchERS 法溶劑使用量少，成本低廉，且不使用含氯化物溶劑，酸性乙腈加到容器后立即密封，降低了試驗(yàn)人員吸入風(fēng)險(xiǎn)，前處理裝置簡(jiǎn)便，以離心渦旋為主，并且所用器具很少，對(duì)環(huán)境污染較小。適合大批量玉米樣品中多種農(nóng)藥殘留的定性與定量分析。