顧金香， 李凱銳， 吳家濤， 王璐瑤， 武世伍

(1. 蚌埠醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病理學(xué)系，安徽 蚌埠 233034； 2. 蚌埠醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院病理科，安徽 蚌埠 233034)

肺癌是威脅人類健康最常見的惡性腫瘤之一，死亡率居高不下。根據(jù)組織病理學(xué)特點(diǎn)，肺癌主要分為非小細(xì)胞肺癌(non-smallcell lung cancer, NSCLC)和小細(xì)胞肺癌(small cell lung cancer, SCLC)兩種類型，NSCLC占肺癌的80%。腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移是肺癌的惡性生物學(xué)特征之一，也是臨床治療失敗的原因之一，發(fā)生轉(zhuǎn)移的患者已處于腫瘤的晚期而失去了手術(shù)的機(jī)會(huì)[1]?；熢侵委烴SCLC的常用方法，但其副作用大，部分患者療效不確定。隨著細(xì)胞和分子生物技術(shù)的迅速發(fā)展，對患者關(guān)鍵基因和調(diào)控分子進(jìn)行個(gè)體化干預(yù)成為治療熱點(diǎn)[2]。

組蛋白去甲基化酶Fbxl10是泛素連接酶(Skp1-Cullin-F-box, SCF)復(fù)合體中的一種受體蛋白，它通過泛素化降解目標(biāo)分子從而調(diào)控細(xì)胞的生物學(xué)過程[3]。近年來，F(xiàn)bxl10與腫瘤的發(fā)生發(fā)展受到關(guān)注。研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)bxl10參與了前列腺癌[4]、胃癌[5]、結(jié)腸癌[6]以及肺鱗癌[7]等多種腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲過程。Fbxl10對肺腺癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲的影響及其機(jī)制尚不完全清楚，本研究通過細(xì)胞分子生物學(xué)技術(shù)探索Fbxl10在肺腺癌細(xì)胞中的表達(dá)和生物學(xué)作用以及潛在的作用機(jī)制，以期為肺腺癌治療的新靶點(diǎn)提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 主要試劑與主要儀器

Fbxl10過表達(dá)質(zhì)粒、陰性對照質(zhì)粒、Fbxl10 siRNA購自上海吉?jiǎng)P基因科技有限公司；Lipo-fectamine 3000轉(zhuǎn)染試劑購自美國Invitrogen公司；Fbxl10抗體購自美國Affinity Biosciences公司；PI3K抗體購自美國Cell Signaling Technology公司；TRIzol試劑、反轉(zhuǎn)錄試劑盒購自日本TaKaRa公司；PCR擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)試劑盒購自北京全式金生物技術(shù)公司；胎牛血清購自美國Clark Bioscience公司；四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)購自美國Sigma公司；RPMI 1640培養(yǎng)基購自美國Hyclone公司；Transwell小室、基質(zhì)膠購自美國BD公司；結(jié)晶紫溶液購自上海碧云天生物科技有限公司。

倒置顯微鏡購自日本Olympus公司；生物安全柜購自上海力康生物醫(yī)療科技控股有限公司；高速離心機(jī)購自德國Eppendorf公司；微型離心機(jī)購自美國AndyBio公司；PCR擴(kuò)增儀購自美國Bio-Rad公司；酶標(biāo)儀購自美國Biotek公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)分組

肺腺癌細(xì)胞株H1299(購自上海信裕生物科技有限公司)分為4組?？瞻讓φ战M(Ctrl組): H1299肺腺癌細(xì)胞株，不作任何處理；陰性質(zhì)粒對照組(NC組): 使用沒有連接目的基因Fbxl10的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染肺腺癌H1299細(xì)胞株；過表達(dá)組(Fbxl10OE組): 使用成功整合目的基因Fbxl10的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至肺腺癌H1299細(xì)胞株；干擾組(siFbxl10組): 使用RNA干擾技術(shù)特異性剔除目的基因Fbxl10，脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染至肺腺癌H1299細(xì)胞株。

1.3 方法

1.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)和細(xì)胞轉(zhuǎn)染 在RPMI 1640培養(yǎng)基中添加10%濃度的血清和1%青霉素-鏈霉素，配成完全培養(yǎng)基，將肺腺癌細(xì)胞H1299株放入含5%CO2的37 ℃細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，1～2 d換液，待細(xì)胞長至75%以上后進(jìn)行傳代處理。細(xì)胞轉(zhuǎn)染: 消化后收集細(xì)胞，將細(xì)胞充分混勻后計(jì)數(shù)，接種于六孔板內(nèi)，每孔約2×105細(xì)胞，24 h后待細(xì)胞長至70%～90%匯合度轉(zhuǎn)染為NC組、Fbxl10OE組和siFbxl10組，轉(zhuǎn)染過程嚴(yán)格按照Lipofectamine 3000說明書進(jìn)行操作，在熒光顯微鏡下觀察轉(zhuǎn)染情況，2～3 d完成轉(zhuǎn)染。

1.3.2 細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn) 細(xì)胞轉(zhuǎn)染36 h后收集細(xì)胞并計(jì)數(shù)，六孔板每個(gè)孔內(nèi)接種500個(gè)細(xì)胞，期間每隔2～3 d換液1次，并觀察克隆形成情況，2周后顯微鏡下觀察到有明顯的克隆群落形成，倒掉孔內(nèi)培養(yǎng)液，PBS洗2遍，0.1%結(jié)晶紫溶液染色25 min，純水沖洗六孔板后拍照。Image J軟件處理圖片轉(zhuǎn)換為數(shù)據(jù)并作柱狀圖分析。

1.3.3 MTT法測細(xì)胞增殖活力 細(xì)胞轉(zhuǎn)染后36 h收集細(xì)胞并計(jì)數(shù)，96孔板每孔接種5 000個(gè)細(xì)胞，設(shè)置4個(gè)復(fù)孔，72 h后每孔加20 μL加MTT溶液，繼續(xù)培養(yǎng)4 h后終止培養(yǎng)，小心吸去孔內(nèi)含有MTT的培養(yǎng)液，每孔加200 μL DMSO溶液，置搖床低速振蕩20 min，讓其充分溶解甲臜結(jié)晶，用酶聯(lián)免疫檢測儀測量各個(gè)孔的光密度(D490)值。

1.3.4 細(xì)胞劃痕愈合實(shí)驗(yàn) 細(xì)胞轉(zhuǎn)染于六孔板36 h，用10 μL白吸頭在六孔板內(nèi)小心地劃一條直線(記為0 h)，然后在顯微鏡下拍劃痕的孔隙照片，保存圖片。于劃痕24 h后觀察細(xì)胞的遷移及愈合情況(記為24 h)，在顯微鏡下拍照，保存圖片用Image J軟件處理圖片轉(zhuǎn)換為數(shù)據(jù)并作柱狀圖分析。

1.3.5 Transwell遷移和侵襲實(shí)驗(yàn) 將細(xì)胞轉(zhuǎn)染36 h后的各組細(xì)胞用胰酶消化2 min，再加RPMI 1640培養(yǎng)基終止消化，1 000 r/min，離心半徑13.5 cm，離心2 min，用RPMI 1640培養(yǎng)基混懸細(xì)胞沉淀，再用細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，加RPMI 1640培養(yǎng)基反復(fù)吹打充分混勻后，將細(xì)胞密度分別調(diào)整至1×105/mL和2.5×105/mL，用于Transwell遷移實(shí)驗(yàn)和侵襲實(shí)驗(yàn)。小室上室加入200 μL細(xì)胞懸液，下室加入800 μL含20%胎牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)基，在37 ℃、5%CO2恒溫箱中培養(yǎng)24 h后，取出小室，棄掉其中的培養(yǎng)基，放回24孔板，再加PBS輕柔潤洗2次，用棉簽輕輕擦掉上室細(xì)胞，加4%多聚甲醛溶液固定細(xì)胞15 min，棄去后加0.1%結(jié)晶紫溶液染色20 min，棄去后加PBS清洗2次，室溫干燥。顯微鏡下隨機(jī)選取5個(gè)視野進(jìn)行拍照，保存圖片，用Image J軟件統(tǒng)計(jì)小室細(xì)胞的遷移數(shù)，取平均值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

1.3.6 實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析(qRT-PCR) 將轉(zhuǎn)染后的Fbxl10OE組、siFbxl10組、NC組和未轉(zhuǎn)染的Ctrl組分別進(jìn)行RNA提取。使用TRIzol試劑從培養(yǎng)的細(xì)胞中提取總RNA，加氯仿萃取，使其分層，再用異丙醇、乙醇提純，最后加適量的DEPC水稀釋為合適的濃度，再按照試劑盒說明書進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄成cDNA，按照熒光定量PCR試劑盒說明書PCR的擴(kuò)增過程，上機(jī)檢測循環(huán)過程的熒光，收集熒光數(shù)據(jù)進(jìn)行后續(xù)的分析。結(jié)果用2-ΔΔCt法解釋。使用Primer 5.0設(shè)計(jì)引物見表1。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

表1 引物序列Tab.1 The primer sequences

1.3.7 Western印跡實(shí)驗(yàn) 將轉(zhuǎn)染后的Fbxl10OE組、siFbxl10組、NC組和未轉(zhuǎn)染的Ctrl組分別進(jìn)行總蛋白提取。收集轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞，加RIPA和PMSF混合裂解液(RIPA∶PMSF=100∶1)，用吸頭反復(fù)吹打至拉絲為止，然后放在冰上裂解30 min，期間每隔10 min渦旋振蕩15 s，4 ℃預(yù)冷，12 000 r/min，離心半徑13.5 cm，離心15 min，BCA試劑盒進(jìn)行蛋白定量檢測。根據(jù)所測濃度加樣后進(jìn)行SDS-PAGE電泳，電泳過后轉(zhuǎn)膜至PVDF膜，無蛋白快速封閉液封閉10 min，一抗孵育12～15 h(4 ℃冰箱)，第2天用TBST洗膜3次，每次10 min，再進(jìn)行室溫孵育二抗2 h，發(fā)光液按照1∶1比例配成后讓條帶顯影，用化學(xué)發(fā)光儀對條帶進(jìn)行曝光掃描，Image J軟件計(jì)算灰度值比值進(jìn)行蛋白表達(dá)的相對定量分析。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié) 果

2.1 細(xì)胞克隆實(shí)驗(yàn)

通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將過表達(dá)質(zhì)粒、陰性質(zhì)粒和干擾RNA，分別轉(zhuǎn)染至肺癌H1299細(xì)胞，轉(zhuǎn)染后檢測H1299細(xì)胞的克隆形成群落數(shù)情況，用Image J軟件進(jìn)行分析，以陰性質(zhì)粒組為對照組，結(jié)果顯示，F(xiàn)bxl10OE組形成的克隆群落數(shù)比NC組多[(36.792±0.003)vs(15.098±0.982)，n=3]，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，siFbxl10組形成的克隆群落數(shù)比NC組少[(5.021±0.925)vs(15.098±0.982)，n=3]，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。上調(diào)Fbxl10表達(dá)，H1299細(xì)胞的克隆形成能力增強(qiáng)，群落數(shù)增多；下調(diào)其表達(dá)，則H1299細(xì)胞的克隆形成能力減弱，群落數(shù)減少，見圖1A。

2.2 MTT實(shí)驗(yàn)

MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在H1299細(xì)胞中分別轉(zhuǎn)染過表達(dá)質(zhì)粒、陰性質(zhì)粒和干擾RNA，以陰性質(zhì)粒組為對照組，F(xiàn)bxl10OE組的D490高于NC組[(1.073 8±0.359 1)vs(0.712 9±0.073 2)，n=3]，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，siFbxl10組的D490低于NC組[(0.426 7±0.844 2)vs(0.712 9±0.073 2)，n=3]，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。說明上調(diào)Fbxl10表達(dá)，H1299細(xì)胞的增殖活力增強(qiáng)，下調(diào)其表達(dá)，則H1299細(xì)胞的增殖活力被抑制，見圖1B。

圖1 各組肺癌細(xì)胞克隆增殖實(shí)驗(yàn)及細(xì)胞活力實(shí)驗(yàn)Fig.1 Overexpression of Fbxl10 promoted the clonal proliferation and cell viability of lung cancer cellsA: 各組肺癌H1299細(xì)胞的克隆實(shí)驗(yàn)；B: 各組克隆實(shí)驗(yàn)及MTT實(shí)驗(yàn)比較，*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001

2.3 細(xì)胞劃痕愈合實(shí)驗(yàn)

通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將過表達(dá)質(zhì)粒、陰性質(zhì)粒和干擾RNA分別轉(zhuǎn)染至肺癌H1299細(xì)胞，觀察上調(diào)或下調(diào)Fbxl10后肺癌H1299細(xì)胞的生長情況，24 h 后拍照觀察其劃痕愈合情況，檢測其遷移能力。與NC組相比，F(xiàn)bxl10OE組的愈合遷移距離明顯增加[(375.7±3.4)vs(121.8±6.6)，n=3]，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，而siFbxl10組愈合遷移距離明顯減少[(36.3±7.9)vs(121.8±6.6)，n=3]，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明，上調(diào)Fbxl10，H1299細(xì)胞的遷移形成能力增強(qiáng)，下調(diào)Fbxl10則H1299細(xì)胞的遷移形成能力減弱，見圖2A。

2.4 Transwell遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)

通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將過表達(dá)質(zhì)粒、陰性質(zhì)粒和干擾RNA分別轉(zhuǎn)染至肺癌H1299細(xì)胞，觀察上調(diào)或下調(diào)Fbxl10后肺癌H1299細(xì)胞的生長情況。轉(zhuǎn)染后，用Transwell遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)檢測H1299細(xì)胞的遷移和侵襲能力。Transwell遷移實(shí)驗(yàn)顯示、Fbxl10OE組透過小室的細(xì)胞數(shù)比NC組多[(327.5±9.2)vs(187.7±13.6)，n=3]，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；siFbxl10組透過小室的細(xì)胞數(shù)比NC組少[(84.2±4.9)vs(187.7±13.6)，n=3]，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)顯示，F(xiàn)bxl10OE組透過Matrigel基質(zhì)膠的細(xì)胞數(shù)比NC組多[(180.9±12.4)vs(120.3±4.7)，n=3]，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，而siFbxl10組透過Matrigel基質(zhì)膠的細(xì)胞數(shù)比NC組少[(37.3±6.5)vs(120.3±4.7)，n=3]，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明，上調(diào)Fbxl10表達(dá)，H1299細(xì)胞的遷移、侵襲能力增強(qiáng)，下調(diào)其表達(dá)，則H1299細(xì)胞的遷移、侵襲能力減弱，見圖2B。

圖2 各組劃痕、遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果Fig.2 Fbxl10 promoted the migration and invasion of lung cancer cellsA: 各組H1299細(xì)胞劃痕愈合實(shí)驗(yàn)；B: 各組H1299細(xì)胞的Transwell遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)(結(jié)晶紫染色)

2.5 qRT-PCR實(shí)驗(yàn)和Western印跡實(shí)驗(yàn)

通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將過表達(dá)質(zhì)粒、陰性質(zhì)粒和干擾RNA分別轉(zhuǎn)染至肺癌H1299細(xì)胞，結(jié)果如圖3A、B所示，qRT-PCR實(shí)驗(yàn)及Western免疫印跡實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)染過表達(dá)質(zhì)粒時(shí)成功上調(diào)H1299細(xì)胞中Fbxl10 mRNA和蛋白表達(dá)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；敲低其表達(dá)時(shí)也成功下調(diào)H1299細(xì)胞中Fbxl10 mRNA和蛋白的表達(dá)(P<0.01)。而隨著Fbxl10表達(dá)上調(diào)，PI3K蛋白表達(dá)也上調(diào)(P<0.01)，qRT-PCR結(jié)果顯示，隨著Fbxl10上調(diào)，PI3K mRNA水平也相應(yīng)增高(P<0.01)，但蛋白表達(dá)差異不明顯，見圖3。

圖3 Fbxl10過表達(dá)后Fbxl10及PI3K表達(dá)均增加Fig.3 After H1299 cells was transfected with Fbxl10OE, both Fbxl10 and PI3K expressions increasedA: H1299細(xì)胞中Fbxl10和PI3K相對mRNA表達(dá)；B: H1299細(xì)胞中Fbxl10和PI3K相對蛋白的表達(dá)；*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001,****P<0.000 1

3 討 論

肺癌是全球癌癥相關(guān)死亡的主要原因，5年生存率約為6%。肺癌的組織學(xué)類型中約80%為NSCLC，其中肺腺癌(lung adenocarcinoma, LA)是NSCLC的主要亞型，具有獨(dú)特的組織學(xué)特征,與肺鱗狀細(xì)胞癌相比，更容易發(fā)生早期轉(zhuǎn)移。尤其是中低分化腺癌，通常被診斷時(shí)已發(fā)生了遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，局部更容易對正常肺組織形成侵襲和破壞。在過去的幾十年里，靶向治療和免疫治療已被廣泛應(yīng)用于NSCLC的治療。盡管已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了一些靶向治療肺腺癌的驅(qū)動(dòng)基因，但由于肺癌的表型特征較多，需要研究和發(fā)現(xiàn)更多的靶向驅(qū)動(dòng)基因以滿足個(gè)體化治療的需要。表觀遺傳因子在肺癌的精準(zhǔn)診斷和個(gè)體化治療上已經(jīng)引起了關(guān)注[8]，F(xiàn)bxl10對肺腺癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲的影響及其機(jī)制目前尚不完全清楚。

Fbxl10是一種組蛋白去甲基化酶，是二甲基和三甲基H3K79脫甲基酶[9]。表觀遺傳學(xué)(epigenetics)修飾包括DNA甲基化、組蛋白翻譯后修飾、核小體定位和非編碼RNA調(diào)控的轉(zhuǎn)錄后基因調(diào)控。其中，目前研究最深入的是DNA甲基化和組蛋白修飾[10]。組蛋白的修飾包括磷酸化、甲基化、泛素化和乙?；?，其中組蛋白甲基化修飾在轉(zhuǎn)錄后調(diào)控過程中起重要作用。Fbxl10是JmjC家族的重要成員，在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中普遍表達(dá)[11]，F(xiàn)bxl10除含有JmjC結(jié)構(gòu)域外，還含有一個(gè)CXXC-zinc-finger結(jié)構(gòu)域、PHD結(jié)構(gòu)域(plant homeodomain)、F-box結(jié)構(gòu)域和富含亮氨酸的重復(fù)結(jié)構(gòu)域[12-13]。JmjC結(jié)構(gòu)域是其發(fā)揮去甲基化酶活性所必需的，F(xiàn)bxl10通過CXXC鋅結(jié)構(gòu)域募集多梳抑制復(fù)合物1(polycomb repressive complexes 1, PRC1)到未甲基化CpG區(qū)來影響DNA甲基化和基因沉默[14]。Fbxl10是泛素連接酶SCF復(fù)合體中的一種受體蛋白，它通過泛素化降解目標(biāo)分子而發(fā)揮調(diào)控細(xì)胞生物學(xué)過程的作用。

在細(xì)胞的正常生理代謝中，F(xiàn)bxl10可以發(fā)揮多種調(diào)控作用。本研究發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染Fbxl10過表達(dá)質(zhì)粒時(shí)成功上調(diào)H1299細(xì)胞中Fbxl10 mRNA或蛋白的表達(dá)；轉(zhuǎn)染Fbxl10干擾RNA時(shí)也成功下調(diào)H1299細(xì)胞中Fbxl10 mRNA或蛋白的表達(dá)。本研究發(fā)現(xiàn)與NC組比較，過表達(dá)Fbxl10時(shí)，PI3K的mRNA或蛋白也隨之而升高，敲低Fbxl10時(shí)，PI3K的mRNA或蛋白也隨之而下降。過表達(dá)Fbxl10后，該腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移能力增強(qiáng)，敲低表達(dá)后則作用相反。因此設(shè)想，F(xiàn)bxl10促進(jìn)癌細(xì)胞增殖和侵襲能力有可能是通過調(diào)控PI3K/AKT/mTOR信號(hào)通路實(shí)現(xiàn)的[5]。

PI3K是一種胞內(nèi)磷脂酰肌醇激酶，多年來，它在健康和疾病方面的功能一直是研究的焦點(diǎn)[15-16]。PI3K/AKT/mTOR信號(hào)通路也是抗癌藥物開發(fā)的主要靶點(diǎn)[17]。研究發(fā)現(xiàn)，使用PI3K激活劑SLC39A5，可以激活PI3K/AKT信號(hào)通路在肺腺癌中發(fā)揮致癌作用[18]。PI3K/mTOR通路可能是參與肺癌進(jìn)展的一個(gè)關(guān)鍵機(jī)制?？紤]到Fbxl10在腫瘤發(fā)展中的關(guān)鍵作用，本研究通過過表達(dá)Fbxl10后，PI3K表達(dá)量也相應(yīng)增加，F(xiàn)bxl10可能通過靶向PI3K/mTOR途徑在肺腺癌進(jìn)展中發(fā)揮重要作用。已有研究發(fā)現(xiàn)[7]，F(xiàn)bxl10可以通過調(diào)節(jié)雷帕霉素通路的磷脂酰肌醇3-激酶/AKT/哺乳動(dòng)物靶蛋白，抑制糖酵解并誘導(dǎo)肺鱗癌細(xì)胞自噬；敲除Fbxl10可抑制肺鱗癌的體外細(xì)胞增殖和體內(nèi)腫瘤生長[7]。本研究細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)顯示，在肺腺癌細(xì)胞中過表達(dá)Fbxl10，可以促進(jìn)肺腺癌細(xì)胞株H1299的增殖、遷移和侵襲能力，同時(shí)也可以促進(jìn)PI3K的表達(dá)，由此推測，F(xiàn)bxl10促進(jìn)癌細(xì)胞增殖和侵襲能力有可能通過調(diào)控PI3K/AKT/mTOR信號(hào)通路實(shí)現(xiàn)的。這也是該基因?qū)Ψ伟┑恼{(diào)控作用的一種補(bǔ)充。

H1299細(xì)胞系是從NSCLC患者的肺細(xì)胞中建立的，廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)研究，作為一種永生化細(xì)胞系，可以無限地分裂。本研究結(jié)果提示Fbxl10在肺癌細(xì)胞的侵襲、轉(zhuǎn)移中起重要作用，F(xiàn)bxl10有望成為抗腫瘤轉(zhuǎn)移治療的潛在靶點(diǎn)。未來研究的重點(diǎn)是進(jìn)一步對Fbxl10的結(jié)構(gòu)、功能及作用機(jī)制進(jìn)行深入探討，以及對其抑制劑開展研究，為Fbxl10最終成為抗肺腺癌轉(zhuǎn)移治療的新靶標(biāo)打下堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。