溫賽群，姜濤，溫春秀，劉靈娣，田偉

（河北省農(nóng)林科學院經(jīng)濟作物研究所/ 河北省藥用植物技術創(chuàng)新中心，河北 石家莊 050051）

穿心蓮〔Andrographis paniculata（Burm. f.）Nees〕為一年生藥用草本植物，味苦，性寒，具有清熱解毒、消炎止痛等作用，臨床上多用于防治呼吸道感染、腸傷寒、急性黃疸型肝炎和肺炎等疾病。穿心蓮全世界約有20 個品種，主要分布于熱帶、亞熱帶區(qū)域；我國有2～3 種，主要分布于南部和西南部[1，2]。穿心蓮具有悠久的民間用藥史，目前在國內外制藥行業(yè)應用廣泛，但由于生態(tài)環(huán)境、栽培條件、收獲加工方法和技術水平的不同，致使市場上穿心蓮藥材的質量參差不齊[3]。為保證藥材的優(yōu)質優(yōu)價和最佳療效，需探究提高穿心蓮藥材質量的方法和措施，并高效、準確地執(zhí)行必要的質檢過程。近年來，國內外學者對穿心蓮質量方面的研究越來越多，研究角度和方法多有不同。為此，就國內外穿心蓮質控研究進展進行綜述，旨為今后相關研究提供較為全面的參考材料。

1 穿心蓮藥材質量的控制指標

穿心蓮含有二萜內酯類、雙二萜內酯類、黃酮類、烷、酮、蠟、甾醇、有機酸等化學成分，其中二萜內酯類具有抗炎、抗病毒、抗腫瘤、免疫調節(jié)等作用，為藥材的主要有效成分。二萜內酯類主要包括穿心蓮內酯（andrographolide）、脫水穿心蓮內酯（14-deoxy-11，12-didehydroandrographolide）、新穿心蓮內酯（neoandrographolide）、14-去氧穿心蓮內酯（14-deoxyandrographolide）、穿心蓮內酯苷（andrographoside）和3，14-二去氧穿心蓮內酯（3，14-dioxyandrographolide）等[4]，諸多研究以其中幾種主要二萜內酯類成分作為穿心蓮藥材質量的控制指標[5]。

2 二萜內酯類成分的檢測方法

現(xiàn)代二萜內酯類成分檢測方法有高效液相色譜法（HPLC）、薄層色譜法（TLC）、近紅外光譜法（NIRS）、核磁共振法（NMR）等。

2.1 TLC 法

《中國藥典》2020 版采用薄層色譜法對穿心蓮藥材中的穿心蓮內酯進行了定性鑒別，其以三氯甲烷-甲苯-甲醇（體積比8 ∶1 ∶1）為展開劑，以10%硫酸乙醇溶液為顯色劑，在紫外光燈（365 nm）下檢視，供試品色譜與對照品色譜相應的位置上顯相同顏色的熒光斑點[6]。

2.2 HPLC 法

HPLC 法應用較為廣泛，但前人對二萜內酯類成分的色譜檢測條件如波長等略有不同（表1）。連瑞麗等[7]采用HPLC 法，分別在波長225 和254 nm 下檢測穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯的含量；鄧貴華等[5]采用反相高效液相色譜法（RP-HPLC），統(tǒng)一在226 nm波長下測定穿心蓮6 個主要二萜內酯成分的含量。顏玉貞等[12]認為采用HPLC 或TLC 法檢測時，波長252 nm下脫水穿心內酯有最大吸收，可區(qū)分于脫氧穿心蓮內酯，減少誤差。關于二萜內酯類不同成分的最適檢測波長等色譜條件，有待比較研究并完善。

表1 采用HPLC 法檢測二萜內酯類成分的色譜條件Table 1 Chromatographic conditions for the determination of diterpene lactones by HPLC

2.3 NIRS 法

Lai 等[13]運用NIRS 測定了穿心蓮中二萜內酯類成分和其他化合物的含量，選擇不同的光譜預處理方法、光譜范圍和最佳因子數(shù)對模型進行優(yōu)化，經(jīng)檢驗，所建模型穩(wěn)定可靠，具有較好的預測性能。

2.4 NMR 法

Yang 等[14]采用定量質子核磁共振技術（qHNMR）檢測了多批穿心蓮制劑中4 個主要二萜內酯類成分的含量，檢測結果均與HPLC 法的測定結果一致，并且具有簡便、快速的優(yōu)點。

2.5 其他

Zhao 等[15]采用乙酸乙酯-油基微乳電動色譜（MEEKC）和短端進樣技術，快速檢測了穿心蓮內酯以及脫水穿心蓮內酯的含量，可應用于常規(guī)質量控制試驗。

3 穿心蓮藥材質量的評價

3.1 利用二萜內酯類成分定量評價藥材質量

3.1.1 以脫水穿心蓮內酯和穿心蓮內酯總量為主 穿心蓮質量評價標準可參照《中國藥典》2015 版，其規(guī)定穿心蓮含脫水穿心蓮內酯和穿心蓮內酯的總量應不少于0.80%（按干燥品計算）[6]；唐維宏等[16]以穿心蓮藥材中穿心蓮內酯與脫水穿心蓮內酯的總含量為指標，得出廣西GAP 基地所產(chǎn)穿心蓮藥材普遍優(yōu)于普通產(chǎn)地的藥材。韋坤華等[17]研究表明，新產(chǎn)區(qū)藥材中脫水穿心蓮內酯和穿心蓮內酯的總量普遍較高，新產(chǎn)區(qū)藥材質量優(yōu)于舊區(qū)。

3.1.2 以4 種主要二萜內酯類成分總量為指標 《美國藥典》USP40 版規(guī)定的穿心蓮藥材質量評價標準為穿心蓮干燥莖葉中含穿心蓮內酯、新穿心蓮內酯、脫水穿心蓮內酯和新穿心蓮內酯苷元的總量不少于1.0%（按干燥品計算）[18]。

國內許多學者將穿心蓮內酯、新穿心蓮內酯、脫水穿心蓮內酯和14-去氧穿心蓮內酯的總量作為質量評價指標。邵艷華[19]采用TLC 法以4 種主要二萜內酯類成分總量為指標，評價了不同產(chǎn)地穿心蓮種質資源的質量，經(jīng)檢測，廣東產(chǎn)地穿心蓮4 個主要二萜內酯類成分總量最高，質量較佳；張曉等[20]檢測了穿心蓮不同部位的4 個主要二萜內酯成分總含量，同時利用電子眼技術采集數(shù)據(jù)，考察了電子眼區(qū)分藥材質量的能力；崔丹丹等[9]不僅檢測了穿心蓮藥材的4 個主要二萜內酯類總含量，還調查了農(nóng)藝性狀等，運用偏最小二乘-判別分析（PLS-DA）、偏最小二乘回歸分析（PLS）和主成分聚類分析等方法，結合農(nóng)藝指標和質量指標，建立了穿心蓮藥材質量等級的預測模型；陳兩綿等[21]以脫水穿心蓮內酯為內參物建立穿心蓮4 種主要二萜內酯類成分的“一測多評”（QAMS）質量控制方法，經(jīng)檢驗，QAMS 準確度高，實現(xiàn)了低成本、高效率及多指標的檢測效果，用于評價穿心蓮藥材質量全面且有效。

3.2 建立指紋圖譜分析藥材質量

隨著現(xiàn)代技術發(fā)展，指紋圖譜技術已成為世界上公認的中藥質控模式之一，涉及TLCS、HPLC、氣相色譜法（GC）、高效毛細管電泳法（HPCE）以及紫外和紅外光譜法等多種分析方法，一般在建立指紋圖譜時需要標定共有特征峰，經(jīng)與對照品比較，指認共有峰代表的化學成分，分析樣品與對照品圖譜的相似度，判別穿心蓮藥材的質量[22，23]?；谥讣y圖譜相關數(shù)據(jù)，謝郁峰等[24]和謝青等[25]通過聚類分析方法對穿心蓮藥材質量進行了綜合評價；Huang 等[26]通過建立主成分回歸模型對穿心蓮藥材質量進行了分析；周舒冬等[27]結合Levenberg-Marquardt 算法與BP 神經(jīng)網(wǎng)絡技術建立了穿心蓮藥材識別系統(tǒng)，該法可鑒別相似度高、易混淆的樣品，能真實地反映穿心蓮藥材的內在質量；Sharma 等[28]通過適當?shù)幕瘜W計量學方法鑒別穿心蓮樣品，即在2 個指紋之間定義差異向量，用偏離向量的標量平均值進行統(tǒng)計分析，該方法可作為一種快速鑒別、評價和篩選多種藥材中優(yōu)質天然藥物的質量控制手段。

4 穿心蓮藥材質量的影響因素

4.1 光照條件

褚晨亮[29]研究發(fā)現(xiàn)光質對穿心蓮品質影響較大，紅光有利于提高穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯的含量，藍光和黃光的效果則相反。李婷等[30]利用遮陽網(wǎng)（透光率70%）進行遮光處理，研究結果顯示，遮光處理下穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯的總含量提高。而褚晨亮[29]的研究結果顯示，單層遮陽網(wǎng)（透光率70%）處理下，穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯的總含量降低3.28%，產(chǎn)量增加9.40%；雙層遮陽網(wǎng)（透光率40%）處理下，穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯的總含量以及產(chǎn)量均明顯降低。

4.2 播種期

王振等[31]在粵西地區(qū)研究了不同播期對穿心蓮產(chǎn)量和質量的影響，結果顯示，3 月底和4 月初播種時藥材的穿心蓮內酯含量較高，其中4 月初播種處理的穿心蓮內酯產(chǎn)量最高，因此，粵西地區(qū)穿心蓮規(guī)范化種植的最佳播種期為4 月初。

4.3 生長時期

陳兩綿等[32]研究表明，4 種主要二萜內酯總量在生長期到花蕾初期較為穩(wěn)定，盛花期開始下降，盛果期下降最為迅速，果期后期降至最低。陳娟等[33]研究表明，始花期穿心蓮內酯含量最高，脫水穿心蓮內酯含量在各生長期的變化較小。高俊麗[34]研究發(fā)現(xiàn)，二萜內酯類成分的總產(chǎn)量在始花期最高。綜上所述，穿心蓮在始花期采收時，藥用質量最佳。

4.4 采收加工

研究表明，葉和全草中的主要二萜內酯含量高于莖，藥材采收時建議采收全草的上部和中部或含葉以上部位為佳。穿心蓮藥材采收后，曬干與陰干對藥材的主要二萜內酯類成分總含量影響較小，但陰干過程中可能會導致穿心蓮內酯分解和轉化，因此，加工時建議采用曬干法進行干燥[32]。早期研究發(fā)現(xiàn)，穿心蓮新鮮葉片經(jīng)發(fā)酵處理后穿心蓮內酯的收得率明顯提高，而新穿心蓮內酯的收得率有下降趨勢，如穿心蓮藥材加工時需提高穿心蓮內酯的收得率，可進行一段時期的發(fā)酵處理，但處理時期不應過長；此外，研究還發(fā)現(xiàn)，穿心蓮藥材貯藏時間越長，穿心蓮內酯、脫水穿心蓮內酯和新穿心蓮內酯的總含量下降越顯著，因此，穿心蓮藥材應盡早加工，有利于藥材的利用[35]。

5 結語

早先Boorsma 從穿心蓮中分離出一種無色中性物質，后經(jīng)證實為一種二萜內酯類化合物，之后陸續(xù)分離出多種與其結構類似的二萜內酯類成分，藥理學研究表明該類成分具有解熱、消炎等功效，且含量占比高，因此成為評價穿心蓮質量的主要活性成分[36，37]。二萜內酯類成分含量檢測從最初使用的重量法、比色法到現(xiàn)代采用的色譜法、光譜法等，檢測方法逐漸精確細化，質量評價標準應隨之加強完善[12]。目前，隨著穿心蓮藥材需求量的增加以及對藥品質量的追求，需進一步改善環(huán)境、栽培和加工等條件來提高藥材品質。

近年來，對穿心蓮藥材品質的鑒定多是采用HPLC 等色譜法檢測主要2 種或4 種二萜內酯類成分含量，有學者還通過結合農(nóng)藝性狀等指標對藥材質量進行全面評價。前人研究均認為，穿心蓮在始花期采收時藥用質量最好，以采收含葉以上部位為佳。但是，目前關于穿心蓮藥材質量影響因素（如光照條件，不同產(chǎn)區(qū)的播期，加工方式等）的研究不多，且結果存在爭議，建議今后進行探索。