彭思璐，劉 冰，劉仁偉，寇 丹，林 劍

四川綿陽四○四醫(yī)院感染科，四川綿陽 621000

肝癌是最常見的惡性腫瘤之一。流行病學調(diào)查顯示，我國每年肝癌的發(fā)病人數(shù)約為36.6萬，死于肝癌的患者多達32.1萬[1]，死亡例數(shù)僅次于肺癌，位居惡性腫瘤死亡病例數(shù)的第二位，成為嚴重威脅我國居民健康和生命的重大疾病之一。各分型的肝癌中，以原發(fā)性肝癌的發(fā)病率最高，約占肝癌的90%以上[2]。研究顯示，原發(fā)性肝癌的發(fā)生與慢性肝炎密切相關，其中慢性乙型肝炎(簡稱乙肝)與丙型肝炎(簡稱丙肝)是肝癌最主要的誘因[3]。我國是慢性乙肝發(fā)病率最高的國家，乙型肝炎病毒(HBV)感染-慢性乙肝-肝纖維化-肝硬化-肝細胞癌是慢性乙肝患者的疾病進展過程。乙肝相關肝癌患者預后極差，5年生存率低于20%[4]，所以探討慢性乙肝病程進展中有價值的標志物對肝功能損傷和肝癌的早期診斷和預防具有重要意義。本研究對不同疾病進程(包括慢性乙肝、肝硬化、肝癌)的患者血清白細胞介素-1β(IL-1β)、趨化因子-13(CXCL-13)、血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)水平進行了分析，旨在探討上述指標對判斷HBV復制水平及肝功能損傷程度的價值，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 將本院2018年8月至2020年8月共97例確診為慢性乙肝的患者納入研究。研究經(jīng)本院醫(yī)學倫理委員會批準。根據(jù)患者疾病進展情況將其分為慢性乙肝組(41例)、肝硬化組(35例)、肝癌組(21例)，各組年齡、性別構成比較，差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，病程比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表1。納入研究者對本研究知情同意并簽署知情同意書。

表1 各組一般資料比較

1.2納入及排除標準 納入標準：(1)符合中華醫(yī)學會肝病學分會、中華醫(yī)學會感染病學分會2015年版《慢性乙型肝炎防治指南》[5]中HBV感染診斷標準；(2)年齡≥18歲。排除標準：(1)心、肺、腎功能異常者；(2)近兩周接受過抗菌藥物或免疫調(diào)節(jié)劑治療者；(3)合并其他肝炎病毒感染者；(4)妊娠及哺乳期女性。

1.3方法

1.3.1分組標準 慢性乙肝組：HBV陽性，肝功能指標有1或2項異常，有乏力、腹脹、食欲減退等肝炎癥狀，且未進展至肝硬化或肝癌者；肝硬化：HBV陽性，發(fā)生肝硬化者；肝癌：HBV陽性，經(jīng)臨床病理檢查確診為原發(fā)性肝細胞癌者。

1.3.2檢測指標 HBV-DNA載量采用實時熒光定量PCR(qPCR)進行檢測，儀器為7300型熒光定量分析儀(Applied Biosystem公司)，檢測試劑為中山大學達安基因有限公司的HBV-DNA試劑盒。肝功能主要指標包括血清總膽紅素(TBIL)、丙氨酸氨基轉移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)，檢測設備為AU2700全自動生化分析儀(日本奧林巴斯株式會社)及配套試劑。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測IL-1β、CXCL-13、VEGF水平。

2 結 果

2.1各組IL-1β、CXCL-13、VEGF水平及HBV-DNA載量比較 各組IL-1β、CXCL-13、VEGF水平，HBV-DNA載量差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。各組間IL-1β、CXCL-13、VEGF水平兩兩比較：由高至低依次為肝癌組、肝硬化組、慢性乙肝組(P<0.05)；各組間HBV-DNA載量兩兩比較：肝癌組、肝硬化組均低于慢性乙肝組(P<0.05)，肝硬化組、肝癌組HBV-DNA載量差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表2。

表2 各組IL-1β、CXCL-13、VEGF水平及HBV-DNA載量比較

2.2各組肝功能主要指標比較 各組ALT、AST水平比較差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；TBIL、ALP水平比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。各組間ALT、AST水平兩兩比較：由高至低依次為肝癌組、肝硬化組、慢性乙肝組，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表3。

表3 各組肝功能指標比較

2.3IL-1β、CXCL-13、VEGF水平與HBV-DNA載量及肝功能主要指標的關系 血清IL-1β、CXCL-13、VEGF水平與AST水平均呈正相關(r分別為0.429、0.387、0.354，P<0.05)，IL-1β、CXCL-13、VEGF水平與ALT水平均呈正相關(r分別為0.411、0.356、0.377，P<0.05)；IL-1β、CXCL-13、VEGF水平與TBIL、ALP水平、HBV-DNA載量均無相關性(P>0.05)。見表4。

表4 血清IL-1β、CXCL-13、VEGF水平與HBV-DNA載量及肝功能主要指標的相關性

3 討 論

ALT、AST是反映肝損傷程度的重要指標之一，但脂肪肝、藥物等也可能造成肝損傷，同樣會引起ALT、AST水平升高，所以要判斷HBV對慢性乙肝患者造成的肝損傷及嚴重程度僅通過ALT、AST水平的檢測是遠遠不夠的。研究顯示，肝癌與肝臟慢性炎癥所致的肝細胞增生和損傷密切相關，其分子機制包括抑癌基因失活、癌基因激活及癌細胞相關信號通路的過度活化[6-7]。我國是HBV感染率較高的國家，大部分肝癌與HBV感染導致的慢性乙肝有關。既往研究認為，乙肝E抗原(HBeAg)陽性是評價慢性乙肝患者病毒復制是否活躍的主要指標，但近年來的研究卻發(fā)現(xiàn)，部分HBeAg轉陰的患者HBV的復制并未停止[8-10]。同時有研究證明，乙肝造成的肝細胞損傷與HBV復制無直接關系[11-12]。本研究顯示，肝硬化組與肝癌組患者HBV-DNA載量明顯低于慢性乙肝組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。這說明慢性乙肝造成的肝損傷不是由HBV病毒直接造成的，肝細胞損傷與HBV復制無直接關系。同時本研究顯示，隨著肝臟損傷的加重，HBV-DNA載量逐漸降低。分析肝損傷的原因可能與HBV感染激發(fā)的肝細胞免疫應答反應有關。

IL-1是一種復雜的多功能炎癥細胞因子,IL-1β是其中重要的家族成員之一，主要作用是促進炎癥反應和T、B淋巴細胞的活化、增殖、分化。近年來國內(nèi)外文獻報道，IL-1β在多種炎癥疾病及多器官惡性腫瘤中呈高表達[13-14]。本研究顯示，各組IL-1β水平：由高至低依次為肝癌組、肝硬化組、慢性乙肝組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。相關性分析顯示，IL-1β與AST、ALT均呈正相關(P<0.05)，提示血清IL-1β超過某一水平可能預示著肝癌的發(fā)生，但仍需進一步研究證實。

趨化因子是指一類可吸引白細胞遷移募集到炎癥部位的分泌蛋白，根據(jù)其結構可分為CXC、CC、C、CX3C 4個家族。有研究發(fā)現(xiàn)，趨化因子及其受體在慢性肝炎的初始階段即參與其中，在疾病進展后期亦可促進腫瘤的生長、侵襲和轉移[15]。趨化因子-5(CXCL-5)是調(diào)節(jié)免疫和炎癥反應的重要因子，PARK等[16]研究發(fā)現(xiàn)，晚期胃癌患者中CXCL-5表達明顯高于慢性胃炎患者與健康體檢者，但目前CXCL-5在慢性乙肝患者中的表達情況鮮有報道。CXCL-13主要分布于肝臟和淋巴結組織中，是CXCR-5的唯一配體，血清CXCL-l3水平升高可能提示患某種自身免疫性疾病。RIOJA等[17]研究發(fā)現(xiàn)，乙肝疫苗注射后無特異性抗體產(chǎn)生與CXCL-l3的基因多態(tài)性相關。本研究顯示，各組CXCL-13水平：由高至低依為肝癌組、肝硬化組、慢性乙肝組(P<0.05)。相關性分析顯示，CXCL-13與AST、ALT均呈正相關(P<0.05)，提示血清CXCL-13超過某一水平可能預示著肝癌的發(fā)生，但仍需進一步研究證實。

VEGF是一種可促進血管內(nèi)皮細胞生長的特異性蛋白，主要作用是調(diào)節(jié)和刺激內(nèi)皮細胞的增殖、遷移，使血管的通透性增加并對血管再生的多個環(huán)節(jié)產(chǎn)生影響。研究發(fā)現(xiàn)，VEGF在肝實質與非實質細胞分裂再生過程中起著重要作用[18-19]，所以理論上講，HBV感染后慢性乙肝病程中血清VEGF水平應隨著病情進展而升高，但VEGF水平是否可用于判斷慢性乙肝患者肝功能損傷程度尚不清楚。本研究顯示，各組VEGF水平由高至低依次為肝癌組、肝硬化組、慢性乙肝組(P<0.05)。相關性分析顯示，VEGF表達與AST、ALT均呈正相關(P<0.05)。隨著慢性乙肝病程的遷延，肝血管炎癥日益嚴重，對肝細胞的破壞加重，肝臟阻塞病變愈加明顯，致肝細胞進一步缺氧缺血，誘導VEGF合成增加并導致新生血管生成。同時隨著VEGF水平升高，內(nèi)皮細胞的增殖、遷移能力及血管通透性增加，肝臟組織局部有效血容量下降，缺氧缺血現(xiàn)象進一步加重，形成惡性循環(huán)，導致病情加重和肝癌的發(fā)生。

綜上所述，慢性乙肝患者血清IL-1β、CXCL-13、VEGF水平隨著病情進展而升高，與肝細胞損傷程度相關，提示IL-1β、CXCL-13、VEGF參與了慢性乙肝病程的進展，可作為慢性乙肝病情嚴重程度判斷指標之一，但對判斷HBV復制水平無指導意義。