孫鈺潔，陳陽

(1.江蘇省農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)測(cè)試中心,江蘇 南京 210036；2.江蘇省農(nóng)產(chǎn)品品牌發(fā)展中心，江蘇 南京 210036)

三唑磺草酮(QYR301)是由青島清原化合物有限公司研制開發(fā)的一種新型吡唑酮類除草劑[1]。三唑磺草酮?dú)⒉葑V廣，是防治稗草和千金子的有效藥劑，并且與當(dāng)前稻田主流除草劑不存在交互抗性，對(duì)水稻幼苗安全，具有廣闊的應(yīng)用前景[2]。莎稗磷是一種高效、廣譜、低毒型除草劑，主要防治一年生禾本科雜草和莎草等，在國(guó)內(nèi)外農(nóng)作物種植中廣泛應(yīng)用[3]。莎稗磷可以抑制雜草細(xì)胞分裂和生長(zhǎng)，尤其對(duì)正在萌發(fā)的雜草防治效果較好，可與多種農(nóng)藥混合使用[4]。在一個(gè)區(qū)域內(nèi)長(zhǎng)期大量使用一種單劑型農(nóng)藥，會(huì)使該區(qū)域內(nèi)雜草、病蟲害產(chǎn)生抗藥性，防治效果下降，影響農(nóng)作物產(chǎn)量。復(fù)配農(nóng)藥，可以集中單劑的優(yōu)點(diǎn)，優(yōu)勢(shì)互補(bǔ)，降低作物抗藥性的產(chǎn)生，提高藥劑效果。復(fù)配農(nóng)藥在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的大量使用，提高了農(nóng)作物的產(chǎn)量，同時(shí)也對(duì)農(nóng)藥生產(chǎn)行業(yè)的檢測(cè)技術(shù)提出了更高要求。目前，莎稗磷的檢測(cè)方法有氣質(zhì)聯(lián)用法[5]、液相色譜法[6-7]。三唑磺草酮作為一種新型除草劑，其檢測(cè)方法尚未報(bào)道。高效液相色譜法所用儀器價(jià)格相對(duì)便宜，檢測(cè)數(shù)據(jù)穩(wěn)定，操作簡(jiǎn)單，廣泛應(yīng)用于農(nóng)藥生產(chǎn)過程中的質(zhì)量控制[8-10]。本文開發(fā)了一種高效液相色譜法，同時(shí)檢測(cè)10%三唑磺草酮·莎稗磷可分散油懸浮劑中三唑磺草酮和莎稗磷，方法快捷簡(jiǎn)單、靈敏度高、重現(xiàn)性好，為該類農(nóng)藥的大量生產(chǎn)和銷售提供了有效的技術(shù)保障。

1 材料與方法

1.1 供試材料

甲醇：色譜純，德國(guó)Merck公司；乙腈：色譜純，德國(guó)Merck公司；水：超純水；三唑磺草酮標(biāo)準(zhǔn)品：純度99.0%，白色固體粉末，江蘇清原農(nóng)冠雜草防治有限公司；莎稗磷標(biāo)準(zhǔn)品：純度98.3%，白色固體粉末，江蘇清原農(nóng)冠雜草防治有限公司；10%三唑磺草酮·莎稗磷可分散油懸浮劑：江蘇清原農(nóng)冠雜草防治有限公司提供。

Agilent 1100高效液相色譜儀；二極管陣列檢測(cè)器；Agilent色譜工作站；色譜柱：Agilent TC-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；Millipore超純水制備系統(tǒng)；超聲波清洗器：昆山市超聲儀器有限公司；過濾器：濾膜孔徑0.45 μm，Millipore。

1.2 色譜操作條件

流動(dòng)相：甲醇和水。梯度洗脫程序如表1。

表1 色譜操作的洗脫程序

流速為1.0 mL·min-1，柱溫35 ℃，紫外可變波長(zhǎng)程序如表2。

表2 色譜操作的紫外波長(zhǎng)變化

進(jìn)樣體積為5 μL；三唑磺草酮保留時(shí)間約為3.284 min，莎稗磷保留時(shí)間約為7.073 min(圖1)。

圖1 10%三唑磺草酮·莎稗磷可分散油懸浮劑的高效液相色譜

1.3 樣品處理

1.3.1 標(biāo)樣溶液配制

準(zhǔn)確稱取三唑磺草酮標(biāo)準(zhǔn)品0.030 0 g和莎稗磷標(biāo)準(zhǔn)品0.020 0 g，置于同一50 mL容量瓶，加入20 mL甲醇，置于超聲波清洗器中超聲溶解，冷卻至室溫后用甲醇稀釋，搖勻備用。

1.3.2 樣品溶液配制

稱取10%三唑磺草酮·莎稗磷可分散油懸浮劑試樣0.500 0 g到50 mL容量瓶，加入20 mL甲醇，置于超聲波清洗器中超聲溶解，冷卻至室溫后用甲醇稀釋，搖勻，以0.45 μm濾膜過濾備用。

1.3.3 溶液測(cè)定

在上述操作條件下，待儀器基線穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，直至相鄰兩針的峰面積變化小于1.5%后，再按照標(biāo)樣溶液、樣品溶液、樣品溶液、標(biāo)樣溶液的順序依次進(jìn)樣。

1.4 數(shù)據(jù)分析

將測(cè)得的兩針樣品溶液及樣品前后兩針標(biāo)樣溶液的峰面積分別進(jìn)行平均，計(jì)算三唑磺草酮和莎稗磷的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜條件的選擇

2.1.1 流動(dòng)相

色譜柱選擇常用的Agilent TC-C18反相柱，以甲醇和水或乙腈和水作為流動(dòng)相，將流動(dòng)相按不同比例在色譜柱上進(jìn)行試驗(yàn)，隨著有機(jī)溶劑比例的增加，保留時(shí)間減小。確定流速為1.0 mL·min-1，甲醇和水或乙腈和水梯度洗脫，均能使待測(cè)組分和樣品中雜質(zhì)分離，滿足分離條件。乙腈和水做流動(dòng)相的梯度洗脫程序?yàn)椋?～5.0 min 70%乙腈，5.0～9.0 min 90%乙腈，9.0～12.0 min 70%乙腈。甲醇和水做流動(dòng)相的梯度洗脫程序?yàn)椋?～8.0 min 72%甲醇，8.0～12.0 min 90%甲醇，12.0～15.0 min 72%甲醇。三唑磺草酮和莎稗磷在流動(dòng)相等度條件下出峰，梯度改變有機(jī)相比例至90%把試樣中其他雜質(zhì)沖出來，再平衡幾分鐘回到初始比例。乙腈和水做流動(dòng)相分析時(shí)間更短，但甲醇更經(jīng)濟(jì)?？紤]到方法的經(jīng)濟(jì)實(shí)用性，本研究選擇甲醇和水做流動(dòng)相，標(biāo)準(zhǔn)品分離如圖2。

圖2 甲醇和水流動(dòng)相混合標(biāo)準(zhǔn)溶液高效液相色譜

2.1.2 檢測(cè)波長(zhǎng)

通過Agilent 1100高效液相色譜儀的二極管陣列檢測(cè)器進(jìn)行紫外光譜掃描，得到三唑磺草酮和莎稗磷的紫外吸收光譜圖。三唑磺草酮在250 nm左右有一個(gè)較平穩(wěn)段，莎稗磷在230 nm有吸收峰。同時(shí)比較了檢測(cè)波長(zhǎng)分別為225、230、240、250 nm條件下試樣的色譜分離圖(圖3)。在短波條件下，待測(cè)物和雜質(zhì)響應(yīng)都較大，溶劑吸收也較大，色譜圖基線不平。在長(zhǎng)波條件下，莎稗磷峰面積較小，方法靈敏度相對(duì)不高。為提高方法的靈敏度，降低樣品中雜質(zhì)和有機(jī)溶劑吸收對(duì)方法的干擾，獲得更好的分離效果，本研究選擇可變檢測(cè)波長(zhǎng)。甲醇和水梯度洗脫程序的條件下，對(duì)應(yīng)的可變波長(zhǎng)程序?yàn)椋?～6.0 min 250 nm，6.0～8.0 min 230 nm，8.0～15.0 min 250 nm。可變波長(zhǎng)和固定波長(zhǎng)條件下樣品色譜分離見圖3。結(jié)果表明，選擇可變波長(zhǎng)條件，方法靈敏度更高，基線更平，雜質(zhì)干擾更小。

圖3 10%三唑磺草酮·莎稗磷可分散油懸浮劑色譜

2.2 線性關(guān)系的測(cè)定

為測(cè)定該方法的線性關(guān)系，本研究配置一系列質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，稱取三唑磺草酮標(biāo)樣0.010 0、0.020 0、0.030 0、0.060 0、0.080 0 g，莎稗磷標(biāo)樣0.010 0、0.020 0、0.030 0、0.060 0、0.080 0 g，分別至50 mL容量瓶，用甲醇溶劑定容，搖勻后按上述操作條件進(jìn)行測(cè)定。三唑磺草酮在0.000 22～0.001 63 g·mL-1、莎稗磷在0.000 21～0.001 57 g·mL-1有良好線性關(guān)系，以三唑磺草酮和莎稗磷的濃度為橫坐標(biāo)，相應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)作圖，得到三唑磺草酮線性方程為y=6 744 205.834 6x-65.874 1，R2為0.999 7；莎稗磷線性方程為y=7 346 765.937 6x-531.471 3，R2為0.999 8(圖4)。結(jié)果表明，該方法條件下，檢測(cè)三唑磺草酮和莎稗磷的線性關(guān)系很好。

圖4 標(biāo)準(zhǔn)溶液的線性關(guān)系

2.3 精密度的測(cè)定

為了驗(yàn)證該方法的精密度，本研究稱取同一批次6個(gè)10%三唑磺草酮·莎稗磷可分散油懸浮劑樣品，按處理樣品和色譜操作條件進(jìn)行分析，獲得三唑磺草酮和莎稗磷的標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.047 6、0.029 3，變異系數(shù)分別為0.78%、0.72%(表3)。結(jié)果表明，該方法精密度高，重現(xiàn)性好。

表3 精密度的驗(yàn)證

2.4 準(zhǔn)確度的測(cè)定

為驗(yàn)證該方法的準(zhǔn)確度，本研究稱取同一批次5份已知含量的10%三唑磺草酮·莎稗磷可分散油懸浮劑(三唑磺草酮含量6.08%、莎稗磷含量4.06%)樣品，并在樣品中添加一定數(shù)量標(biāo)準(zhǔn)品。

在上述操作條件下進(jìn)行測(cè)定，測(cè)得三唑磺草酮的加標(biāo)回收率為98.66%～102.53%，平均加標(biāo)回收率為100.56%；莎稗磷的加標(biāo)回收率為98.75%～100.93%，平均加標(biāo)回收率為99.70%(表4)。結(jié)果表明，該方法回收率好，準(zhǔn)確度高。

表4 準(zhǔn)確度的驗(yàn)證

3 小結(jié)

本文建立了一種同時(shí)測(cè)定可分散油懸浮劑中三唑磺草酮和莎稗磷含量的高效液相色譜法，并對(duì)該方法進(jìn)行了探索和歸納，得到了用甲醇溶解標(biāo)樣和試樣，流動(dòng)相甲醇和水梯度洗脫，紫外可變波長(zhǎng)程序，C18色譜柱分離，柱溫為35 ℃，進(jìn)樣體積5 μL的最優(yōu)方案。

本方法填補(bǔ)了目前三唑磺草酮檢測(cè)技術(shù)的空白，可以同時(shí)測(cè)定莎稗磷的含量，滿足對(duì)此類復(fù)配農(nóng)藥的檢測(cè)要求。方法方便快捷，靈敏度高，重現(xiàn)性好，經(jīng)濟(jì)環(huán)保，便于推廣和應(yīng)用。該方法的應(yīng)用對(duì)此類農(nóng)藥的生產(chǎn)、質(zhì)量控制有重要意義和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。