張鵬 張承新 丁斌 王懷娜 包丹丹 趙清華 王雨婷 郭龍宗 李玉燕

摘 要：雞傳染性貧血?。–IA）是危害養(yǎng)禽業(yè)發(fā)展的重要病毒病之一，是一種免疫抑制性疾病。CIA常會(huì)與其他病毒、細(xì)菌病共感染，加重疾病進(jìn)程，從而給養(yǎng)殖業(yè)造成巨大經(jīng)濟(jì)損失。目前養(yǎng)殖場(chǎng)主要通過疫苗免疫來預(yù)防CIA的感染，免疫程序的合理制定與調(diào)整評(píng)估都是根據(jù)雞群抗體的變化規(guī)律來制定。本試驗(yàn)選取2個(gè)祖代哈伯德肉種雞群和2個(gè)父母代哈伯德肉種雞群進(jìn)行CIA抗體的檢測(cè)，以期評(píng)估CIA免疫程序的合理性。

關(guān)鍵詞：雞傳染性貧血病;免疫抑制性疾病;免疫程序;抗體監(jiān)測(cè)

中圖分類號(hào)：S852.6 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B 文章編號(hào)：1673-1085（2022）06-0059-03

雞傳染性貧血?。–IA）是一種免疫抑制病，能夠?qū)C(jī)體的免疫系統(tǒng)造成損害，從而使機(jī)體抵抗病原微生物感染的能力下降。育成雞群發(fā)病表現(xiàn)生長(zhǎng)遲緩，體重下降明顯，免疫抑制造成其它病種免疫失敗;若產(chǎn)蛋雞群在開產(chǎn)初期感染CIA，會(huì)導(dǎo)致產(chǎn)蛋率上升慢，而且無產(chǎn)蛋高峰;在高峰期發(fā)病則導(dǎo)致產(chǎn)蛋率下降10%～25%，嚴(yán)重影響經(jīng)濟(jì)效益，同時(shí)種雞感染引起垂直傳播，使其后代雛雞死亡率增加，導(dǎo)致下游客戶養(yǎng)殖難度加大;若商品雞群感染，引起飼料轉(zhuǎn)化率下降、料肉比增加。最關(guān)鍵的是CIA常與其它病原混合感染，從而發(fā)生嚴(yán)重免疫抑制，甚至加重其它病情，增加養(yǎng)殖業(yè)對(duì)疾病的控制難度。近年來為了應(yīng)對(duì)CIA頻發(fā)帶來的經(jīng)濟(jì)損失，加強(qiáng)免疫是重要的手段之一，因此對(duì)CIA疫苗免疫效果的評(píng)估是必不可少的。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 血清樣本采集 本試驗(yàn)選取膠東某養(yǎng)殖集團(tuán)的2個(gè)祖代肉種雞場(chǎng)和2個(gè)父母代肉種雞場(chǎng)的雞群，分別在1～10周和13、16、19、26、34、42、52周等不同周齡采集血清，每個(gè)周齡各采集40份樣品，連續(xù)跟蹤檢測(cè)CIA抗體。

1.1.2 種雞場(chǎng)雞傳染性貧血病免疫程序 50日齡首次免疫雞傳染性貧血病活疫苗，免疫方式為刺種;132日齡加強(qiáng)免疫雞傳染性貧血病凍干活疫苗，免疫方式為將傳染性貧血病疫苗加入到新支法關(guān)四聯(lián)油苗，進(jìn)行肌肉注射。

1.1.3 試驗(yàn)試劑 雞傳染性貧血病病毒ELISA抗體檢測(cè)試劑盒購自美國(guó)IDEXX公司，批號(hào)為KT515，有效期為2023年8月3日。

1.1.4 試驗(yàn)儀器 MK3酶標(biāo)儀（美國(guó)ThermoFisher公司）、洗板機(jī)（TECAN公司）、移液器、2.5 mL一次性無菌注射器等。

1.2 方法

1.2.1 雞傳染性貧血病抗體檢測(cè)試驗(yàn)方法和依據(jù) 雞傳染性貧血病抗體檢測(cè)方法為酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA），檢測(cè)依據(jù)為雞傳染性貧血病診斷技術(shù)NY/T 1187-2019。所有試劑使用前需要恢復(fù)至室溫2 h，血清樣本解凍后要充分混勻，標(biāo)記好孔位和樣本信息進(jìn)行100倍稀釋。ELISA具體的試驗(yàn)操作按照《IDEXX雞傳染性貧血病試劑盒說明書》進(jìn)行。

1.2.2 血清樣品的準(zhǔn)備 首先制定詳細(xì)的采血計(jì)劃，按照計(jì)劃隨機(jī)抽樣，采集4個(gè)雞群的血清，每周齡采集40只雞。血清自然析出后，轉(zhuǎn)移至離心管中-20 ℃凍存，血清樣本禁止反復(fù)凍融。待4個(gè)種雞群的血清全部采集完成后集中檢測(cè)，以減少因試劑盒批號(hào)不同、實(shí)驗(yàn)條件差異、操作人員差異而產(chǎn)生誤差。

1.2.3 ELISA試驗(yàn)結(jié)果判讀 試驗(yàn)終止后用酶標(biāo)儀讀取每一份樣品的OD650數(shù)值，通過公式S/N值=樣品OD650/陰性對(duì)照平均值和Log10滴度=（S/N-2.72）/-0.64，計(jì)算S/N值和滴度值，或通過IDEXX分析軟件進(jìn)行計(jì)算。試劑盒判定標(biāo)準(zhǔn)：S/N值≤0.6為陽性，或抗體滴度>999為陽性。

2 結(jié)果

2.1 1～8周的血清CIA抗體檢測(cè)

根據(jù)4個(gè)種雞群1～8周的血清CIA抗體檢測(cè)結(jié)果，發(fā)現(xiàn)：母源抗體在一周內(nèi)迅速下降，在14日齡基本完全消失（表1）。

2.2 9～52周的血清CIA抗體檢測(cè)

根據(jù)4個(gè)種雞群9～52周的血清CIA抗體檢測(cè)結(jié)果顯示：種雞群在50日齡首免CIA活疫苗后2周開始產(chǎn)生抗體，免疫后3周抗體可達(dá)到理想的水平，從而使種雞在育成期得到很好的保護(hù);種雞群在19周加強(qiáng)免疫CIA活疫苗后，可使整個(gè)產(chǎn)蛋期的抗體維持較高水平，也給后代雛雞提供較好的母源抗體保護(hù)（表2）。

2.3 結(jié)果分析

根據(jù)IDEXX的分析數(shù)據(jù)可知：雞群CIA抗體在1 000～2 460范圍內(nèi)可以阻止母雞排毒，降低水平傳播的風(fēng)險(xiǎn);雞群抗體高于2 460可以阻止垂直傳播。

根據(jù)各周齡CIA免疫后的抗體檢測(cè)結(jié)果，得出：本試驗(yàn)4個(gè)種雞群的CIA免疫程序及免疫方式比較合理，可以保護(hù)種雞群在育成期和開產(chǎn)前獲得高陽性率和高抗體滴度，保護(hù)種雞群不受CIA病毒威脅，同時(shí)可提供給后代雛雞足夠的母源抗體。父母代A、B組和祖代A、B組1～52周CIA抗體趨勢(shì)見圖1。

3 討論

種雞群CIA免疫的保護(hù)性抗體水平、最佳免疫時(shí)間以及免疫頻率都需要依據(jù)抗體變化規(guī)律來制定。通過實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測(cè)免疫雞群的CAI抗體水平，既可有效地評(píng)估不同種類CIA疫苗的免疫效果，也可以評(píng)估雞群的免疫合格率，從而根據(jù)免疫效果和免疫合格率選擇合適的疫苗、制定合理的免疫程序。有研究表明雞傳染性貧血病病毒抗體從種雞到后代的傳遞效率在50%～60%，因此為了保證種雞在整個(gè)產(chǎn)蛋期有足夠的抗體傳遞給后代雛雞，種雞群需在開產(chǎn)前獲得高抗體滴度和高陽性率，以保證后代雛雞有足夠的母源抗體，這是預(yù)防雞傳染性貧血病的關(guān)鍵。根據(jù)檢測(cè)數(shù)據(jù)表明，種雞在開產(chǎn)前100%的抗體滴度應(yīng)在6 500以上;產(chǎn)蛋中期（38～42周）90%的抗體滴度應(yīng)在6 500以上，10%的抗體滴度應(yīng)在5 000以上;淘汰前80%抗體滴度應(yīng)在6 500以上，沒有低于2 460的抗體滴度。達(dá)到以上抗體滴度水平，種雞群可不受CIA病毒的威脅，同時(shí)可向后代雛雞提供有效的母源抗體保護(hù)。

從表1的檢測(cè)數(shù)據(jù)顯示：無論是種雞還是商品雞，母源抗體在14日齡完全消失，如果此時(shí)有CIA病毒攻擊雞群，很容易造成雞群感染。CIA活疫苗的免疫時(shí)間不可早于50日齡，易引起免疫抑制，免疫后產(chǎn)生抗體需要2周的時(shí)間。因此，種雞群在14～64日齡、商品雞在14日齡到出欄的時(shí)間存在免疫空檔期，在這段時(shí)期除了加強(qiáng)飼養(yǎng)管理、做好生物安全措施外，還應(yīng)考慮增加一次油苗免疫來提高CIA抗體水平，以防止CIA病毒的感染。

*基金項(xiàng)目：“財(cái)政部和農(nóng)業(yè)農(nóng)村部：國(guó)家現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系資助”（CARS-41）;山東省重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃，項(xiàng)目編號(hào)：2021CXGC010805。

作者簡(jiǎn)介：張鵬（1980—），女，本科，主要從事規(guī)?；N雞場(chǎng)禽病預(yù)防研究，E-mail：zhangpeng80815@163.com;

并列第一作者：張承新（1985—），男，本科，主要從事父母代種雞場(chǎng)綜合管理與研究，E-mail：zcxysgf@163.com。

**通信作者：郭龍宗（1981—），男，碩士，高級(jí)獸醫(yī)師，主要從事規(guī)?；N雞場(chǎng)實(shí)驗(yàn)室管理，E-mail：guolongzong1981@163.com;

并列通信作者：李玉燕（1982—），女，碩士，高級(jí)獸醫(yī)師，主要從事規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)疾病預(yù)防研究，E-mail：lyuyan918@163.com。