楊志艷，楊 茜，趙福瓊，李 杰，陳啟青，倪興維，馬衛(wèi)紅*

1.貴州省惠水縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局，貴州惠水 550600；2.貴州省動物疫病預(yù)防控制中心，貴陽 550003

禽流感是由正黏病毒科甲型流感病毒引起的禽類傳染病。根據(jù)禽流感病毒（avian influenza virus，AIV）表面的血凝素（hemagglutinin，HA）和神經(jīng)氨酸酶（neuramindase，NA）分為不同的亞型（H1～H18 和N1～N11）[1]；又根據(jù)該病毒毒力不同，可分為高致病性AIV，如H5N1、H5N6、H7N9 亞型等，低致病性AIV，如H6N6、H9N2、H9N9、H10N6 亞型等[2]。高致病性AIV 傳播范圍廣、發(fā)病禽種類多、造成危害和損失巨大而引起全球多個國家的重視[3]，而低致病性AIV 對家禽的健康影響較小[4]，常常被人們忽視。目前，H9N2 亞型AIV 是我國乃至世界范圍內(nèi)流行最廣的流感病毒之一[5]，近年來陸續(xù)有H9N2 感染哺乳動物和人的報道[6-7]，有研究證實H9N2 亞型AIV 無需中間宿主而感染人[8]。這些研究和報道表明，H9N2 亞型AIV 對人類的生命健康安全構(gòu)成了新的潛在威脅。本試驗調(diào)查了惠水縣H9 亞型AIV流行情況，并對H9 亞型AIV 的防控進行總結(jié)，以期為禽流感防控提供參考。

1 材料與方法

1.1 樣品來源

采集惠水縣區(qū)域內(nèi)8 個養(yǎng)雞場（戶）270 份血液，5 個養(yǎng)鴨場（戶）170 份血液，1 個鵪鶉養(yǎng)殖場48份血液，以上采集的血液均已確認(rèn)未免禽流感H9亞型疫苗。

1.2 主要試劑

H9 亞型AIV 血凝抑制試驗抗原、H9 亞型AIV陽性血清均購自哈爾濱國生生物有限公司。

1.3 檢測方法

采集未免疫禽流感疫苗的公雞血，制備成1%的雞紅細(xì)胞懸液。

1）HA 試驗。在96 孔V 型微量反應(yīng)板中，每孔加入0.025 mL 生理鹽水；第1 孔加0.025 mL 病毒抗原，反復(fù)吹吸3～5 次混勻；從第1 孔吸取0.025 mL混合液加入到第2 孔，混勻后吸取0.025 mL 加入第3 孔，依次進行2 倍系列稀釋至第11 孔，從第11孔吸取0.025 mL 棄去，第12 孔為陰性對照；每孔加入0.025 mL 生理鹽水；每孔加入0.025 mL 1%（體積分?jǐn)?shù)）雞紅細(xì)胞懸液；輕扣反應(yīng)板混合反應(yīng)物，室溫靜置40 min，當(dāng)對照孔的紅細(xì)胞呈顯著紐扣狀時判定結(jié)果。

2）HI 試驗。根據(jù)HA 試驗測定的效價配制4 個血凝單位（即4 HAU）的病毒抗原；第1～11 孔加入0.025 mL 生理鹽水，第12 孔加入0.05 mL 生理鹽水作為空白對照；第1 孔加入0.025 mL 待測血清，混勻后吸取0.025 mL 于第2 孔，依次2 倍稀釋第10 孔，從第10 孔吸取0.025 mL 棄去，第11 孔作為抗原對照；第1 至第11 孔均加入0.025 mL 4 HAU抗原，室溫靜置30 min；每孔加入0.025 mL 1%（體積分?jǐn)?shù)）雞紅細(xì)胞懸液，震蕩混勻，室溫靜置40 min，空白對照孔（第12 孔）的紅細(xì)胞呈顯著紐扣狀時判定結(jié)果。根據(jù)高致病性禽流感診斷技術(shù)（國標(biāo)號：GB/T 18936—2020）HA 和HI 試驗判斷結(jié)果，HI≥24 為抗體陽性。

2 結(jié)果與分析

經(jīng)HA-HI 試驗檢測H9 亞型AIV 抗體情況，雞血清270 份，陽性45 份，陽性率為16.67%；鴨血清170 份，陽性5 份，陽性率為2.94%；鵪鶉血清48份，陽性1 份，陽性率為2.08%，家禽總體陽性率為10.45%（表1）。

表1 家禽H9 亞型禽流感抗體檢測結(jié)果

3 討 論

有研究報道，能直接感染人的AIV 有H5N1、H5N6、H7N1、H7N2、H7N3、H7N4、H7N7、H7N9、H9N2和H10N3[9]。近年來，流行的H9N2 亞型AIV 已經(jīng)出現(xiàn)抗原變異現(xiàn)象[10]，抗原變異間接地為高致病性禽流感提供重組的基因片段的幾率[11]。有研究發(fā)現(xiàn)，H7N9 亞型AIV 與H9N2 亞型AIV 高度同源[12]，H7N9 亞型AIV 的某些基因片段可能來源于H9N2亞型AIV[13]。目前，H9N2 亞型AIV 的受體結(jié)合特性以優(yōu)先結(jié)合唾液酸—2，3 半乳糖體轉(zhuǎn)變?yōu)橐噪p嗜性和優(yōu)先結(jié)合唾液酸—2，6 半乳糖受體為主[10]，這種改變大大增強了病毒跨宿主傳播感染哺乳動物的能力。陸勤勤等[14]調(diào)查我國2018年H9N2 亞型AIV陽性率為25.21%，其中江西、貴州、江蘇等地檢出率較高，本試驗中惠水縣H9 亞型AIV 的家禽血清抗體總體陽性率為10.45%。說明H9 亞型AIV 在我國流行很普遍，這大大增加了H9N2 亞型AIV 感染哺乳動物和人的風(fēng)險，也會導(dǎo)致新的高致病性亞型AIV 的出現(xiàn)，給人類公共衛(wèi)生健康帶來新的挑戰(zhàn)。

H9N2 亞型AIV 雖然致病力不強，但傳播快，流行范圍廣，能明顯地抑制細(xì)胞免疫應(yīng)答，常引起與細(xì)菌、其他病毒混合感染，給家禽生產(chǎn)造成巨大損失[15-16]?；痣u和雞是禽流感最易感的動物，從本試驗結(jié)果來看，雞血清中H9 亞型AIV 抗體陽性率較高，與禽流感易感性一致，應(yīng)引起人們的高度重視，提前做好低致病性禽流感防控工作。一是加強飼養(yǎng)管理。養(yǎng)殖場（戶）根據(jù)實際監(jiān)測情況，對于H9 亞型AIV 流行地域進行常規(guī)免疫接種，已經(jīng)出現(xiàn)癥狀的養(yǎng)雞場進行緊急免疫接種，防止疫病蔓延。二是加強家禽防疫重點場所消毒。對養(yǎng)殖場、活禽交易市場、活禽屠宰場等重點場所進行全面消毒滅源。AIV在外界環(huán)境中存活能力較差，普通消毒藥如醛類、含氯消毒劑、酚類、氧化劑、堿類等均能殺死環(huán)境中的病毒。三是加強基層動物防疫隊伍建設(shè)與培訓(xùn)，進一步完善重大動物疫病防控體系，有針對性地加強散養(yǎng)戶的家禽養(yǎng)殖的監(jiān)管，指導(dǎo)獸醫(yī)、養(yǎng)殖從業(yè)人員等密切接觸都規(guī)范操作，嚴(yán)格落實動物疫情報告制度。四是加強動物檢疫和流通環(huán)節(jié)監(jiān)控，做好產(chǎn)地檢疫工作，運輸?shù)募仪菁捌洚a(chǎn)品必須有相應(yīng)的運輸證件、車輛及其有關(guān)產(chǎn)品的消毒證明、檢疫證，做到證物相符。