張麗麗 隋紅梅 賀鳳喜 劉丹丹 李愛峰 李愛華

1聊城市人民醫(yī)院婦產(chǎn)科，聊城 252000；2聊城市婦幼保健院婦科，聊城 252000；3聊城市東昌府區(qū)婦幼保健院婦產(chǎn)科，聊城 252000；4 聊城大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院，聊城252000

晚期上皮性卵巢癌具有高復(fù)發(fā)率、高病死率的特點［1］，鉑耐藥是所有患者的共同歸宿，也是主要致死原因［2-3］，尋找新的抗腫瘤藥物成為亟待解決的問題。東北巖高蘭廣泛分布于東北大興安嶺地區(qū)，富含黃酮，其主要化學(xué)成分是二氫查耳酮［4-5］，具有抗腫瘤活性［6-7］。前期我們已對東北巖高蘭提取物查耳酮成分進(jìn)行分離純化，得到5 種單體化合物。本研究旨在探討東北巖高蘭提取物對人上皮性卵巢癌細(xì)胞凋亡的影響及其可能的作用機制，為明確東北巖高蘭活性成分、開發(fā)和利用東北巖高蘭的藥用價值提供理論依據(jù)。

材料與方法

1、材料

1.1、組織標(biāo)本來源 采集2019 年1 月至2020 年9 月聊城市人民醫(yī)院進(jìn)行婦科手術(shù)治療的上皮性卵巢癌患者10 例新鮮腫瘤組織，所有病例患者術(shù)前均未接受放化療等輔助治療，同時收集10 例因良性疾病切除的正常卵巢組織為對照，將新鮮組織標(biāo)本在取材后30 min內(nèi)置入-80 ℃冰箱凍存，每位患者的診斷最終由聊城市人民醫(yī)院病理科確認(rèn)。

1.2、細(xì)胞來源 上皮性卵巢癌細(xì)胞A2780、SKOV3、OVCAR3 來由聊城市人民醫(yī)院中心實驗室，正常卵巢細(xì)胞IOSE80購自昆騰公司，貨號為H055，ATCC來源。

1.3、藥物來源 巖高蘭提取物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ來自聊城大學(xué)化工學(xué)院，分別為提取物Ⅰ2’，4’，β-三羥基二氫查耳酮、Ⅱ2’-甲氧基-4’-羥基二氫查耳酮、Ⅲ2’，4’-二羥基二氫查耳酮、Ⅳ2'，5'-二羥基-3'-甲氧基-4'，6'-二甲基二氫查耳酮，Ⅴ4'，5'-二羥基-2'-甲氧基-3'，6'-二甲基-二氫查耳酮，相關(guān)成果已發(fā)表論文并申請發(fā)明專利［8］。

2、實驗方法

2.1、細(xì)胞培養(yǎng) 將凍存的上皮性卵巢癌細(xì)胞A2780、SKOV3、OVCAR3、正常卵巢上皮細(xì)胞IOSE80 在37 ℃水浴，加入5 ml 培養(yǎng)液，1 000 r/min（離心半徑為16.8 cm），離心5 min，去上清，加入1 ml 培養(yǎng)液，吹打混勻，加入5 ml 培養(yǎng)液，37 ℃5%CO2培養(yǎng)箱中孵育，次日更換培養(yǎng)液，磷酸鹽緩沖液（PBS）沖洗2～3 次，加入5 ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)并傳代，后制備單細(xì)胞懸液。

2.2、應(yīng)用CCK-8 法測定細(xì)胞活力，篩選巖高蘭提取物藥物作用濃度 將上皮性卵巢癌細(xì)胞SKOV3、OVCAR3、A2780、正常卵巢上皮細(xì)胞IOSE80 4 組細(xì)胞按5×104/ml 密度接種于96 孔板中，37 ℃5%CO2孵育24 h，將巖高蘭提取物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ用甲醛溶解，按照空白組、溶劑對照組、10 μg/μl、20 μg/μl、40 μg/μl、60 μg/μl、80 μg/μl、100 μg/μl濃度作用于細(xì)胞，每個濃度有3 個副孔，分別處理24 h、48 h，后加入100 μl CCK-8（cell counting kit-8）培養(yǎng)液混合液，37℃培養(yǎng)2 h，450 nm 測定各孔的光密度，計算生長抑制率，利用SPSS 22.0 軟件進(jìn)行單因素方差分析，取半抑制濃度（IC50值）。

2.3、細(xì)胞凋亡檢測 使用Annexin V Binding Apoptosis Assay Kit 試劑盒進(jìn)行檢測。取對數(shù)生長期細(xì)胞，制備單細(xì)胞懸浮液，調(diào)整細(xì)胞密度為1×105個/ml，37 ℃5% CO2孵化24 h，使細(xì)胞貼壁，按照空白組、藥物組作用于細(xì)胞，37℃5% CO2條件培養(yǎng)24 h，進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)，使每管中含有1×106個細(xì)胞，加入200 μl 的Assay Buffer，混勻，再加入2 μl Annexin V-iFluorTM 488 及100X Propidium Iodide 2 μl，室溫避光，孵育30 min，加入200 μl 的Assay Buffer，流式細(xì)胞分析儀分析結(jié)果。

2.4、實時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction，PCR）檢測細(xì)胞中Beclin-1、Bcl-2mRNA 的表達(dá)情況 取各組細(xì)胞，Trizol 法提取細(xì)胞總RNA，反轉(zhuǎn)錄為cDNA。配制反應(yīng)體系：包括正反向引物各0.4 μl，cDNA 模板2 μl，PCR Master Mix 10 μl，加雙蒸水至總體積20 μl。擴增條件，Stage Ⅰ：預(yù)變性95 ℃3 min，Stage Ⅱ：PCR 反應(yīng)95 ℃3 s，60 ℃30 s，共40 個循環(huán)。以GAPDH 為內(nèi)參基因，ΔCt=Ct（Bcl-2/Beclin-1）-Ct（GAPDH），ΔΔCt=Ct（藥 物組）-Ct（空白組），計算Bcl-2/Beclin-1 相對表達(dá)量，引物序列見表1。

表1 引物序列

2.5、Western Blot 法檢測細(xì)胞中Beclin-1、Bcl-2 蛋白的表達(dá)情況 取各組細(xì)胞，加入RIPA 裂解液，提取各組細(xì)胞總蛋白，BCA 法測定蛋白濃度，進(jìn)行SDS-PAGE 凝膠電泳，轉(zhuǎn)至PVDF 膜上，5%脫脂牛奶室溫封閉2 h，加入Bcl-2、Beclin-1 一抗（1︰2 000），Actin（1：5 000）4 ℃孵育過夜，TBST 洗膜，加入HRP 標(biāo)記的二抗（1︰5 000）室溫孵育1 h，TBST洗膜，采用ECL放射自顯影，Image J軟件分析圖像。

3、統(tǒng)計學(xué)分析

使用統(tǒng)計軟件SPSS 22.0、GraphPad Prism 進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，單因素方差分析進(jìn)行細(xì)胞IC50值測定，GraphPad Prism進(jìn)行作圖分析，符合正態(tài)分布的計量資料以（）表示，組間比較采用獨立樣本t檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié)果

1、新鮮上皮性卵巢癌組織中Beclin-1、Bcl-2 基因表達(dá)情況

上皮性卵巢癌組織中Bcl-2 mRNA 表達(dá)顯著高于正常卵巢組織（P<0.01），Beclin-1 mRNA表達(dá)低于正常卵巢組織（P<0.01）。表明Bcl-2 基因?qū)τ谏掀ば月殉舶┛赡芷鸫侔┳饔?，而Beclin-1基因可能發(fā)揮抑癌作用（表2）。

表2 新鮮上皮性卵巢癌組織及正常卵巢組織中的Beclin-1、Bcl-2基因表達(dá)情況

2、東北巖高蘭提取物藥物濃度的篩選

結(jié)果顯示，東北巖高蘭提取物Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ對卵巢癌細(xì)胞SKOV3、OVCAR3、A2780 抑制作用顯著（P<0.001）（圖1），IC50值詳見表3，提取物Ⅰ對卵巢癌細(xì)胞無增殖及抑制作用。

圖1 東北巖高蘭提取物對上皮性卵巢癌細(xì)胞SKOV3、OVCAR3、A2780的抑制作用（A為東北巖高蘭提取物Ⅱ，B為東北巖高蘭提取物Ⅲ，C為東北巖高蘭提取物Ⅳ，D為東北巖高蘭提取物Ⅴ）

3、東北巖高蘭提取物對上皮性卵巢癌細(xì)胞的生長具有抑制作用

經(jīng)藥物處理24 h，OVCAR3 空白組凋亡細(xì)胞占1.2%，提取物Ⅱ55 μg/μl、Ⅲ45 μg/μl、Ⅳ65 μg/μl、Ⅴ25 μg/μl 藥物組OVCAR3 細(xì)胞凋亡率分別為69.6%、54.5%、66.9%、87.6%（P<0.001）。A2780 空白組凋亡細(xì)胞占3.2%，提取物Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ藥物組A2780 細(xì)胞凋亡率分別為58.9%、48.8%、68.6%、73.5%（P<0.01）。SKOV3 空白組凋亡細(xì)胞占4.4%，提取物Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ藥物組SKOV3 細(xì)胞凋亡率分別為52.3%、45.5%、62.9%、47.6%（P<0.01）。結(jié)果表明：東北巖高蘭提取物Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ對上皮性卵巢癌細(xì)胞SKOV3、OVCAR3、A2780 增殖抑制作用顯著，呈劑量-時間依賴性，按抑制作用排序為：提取物Ⅴ>Ⅳ>Ⅱ>Ⅲ（圖2）。

圖2 東北巖高蘭提取物Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ抑制上皮性卵巢癌細(xì)胞SKOV3、OVCAR3、A2780的增殖

4、東北巖高蘭提取物對上皮性卵巢癌細(xì)胞SKOV3、A2780、OVCAR3中Beclin-1、Bcl-2基因表達(dá)的影響

經(jīng)東北巖高蘭提取物Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ處理24 h后，上皮性卵巢癌細(xì)胞SKOV3、A2780、OVCAR3 組Beclin-1 mRNA 相對表達(dá)量增加，Bcl-2 mRNA 相對表達(dá)量降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。表明Beclin-1 可能在上皮性卵巢癌細(xì)胞中起到抑制作用，而Bcl-2基因可能與促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖有關(guān)（圖3）。

圖3 巖高蘭提取物對上皮性卵巢癌細(xì)胞中Bcl-2（A）、Beclin-1(B)相對表達(dá)量的影響

經(jīng)東北巖高蘭提取物處理24 h 后，上皮性卵巢癌細(xì)胞SKOV3 中Beclin-1 蛋白表達(dá)顯著升高（P<0.01），Bcl-2 蛋白表達(dá)明顯減少（P<0.01）（圖4）。

圖4 東北巖高蘭提取物作用于SKOV3細(xì)胞中Bcl-2、Beclin-1蛋白表達(dá)情況

討論

晚期卵巢癌是一個多次復(fù)發(fā)的“慢性”疾病，70%的卵巢癌患者停止化療后3 年內(nèi)復(fù)發(fā)，大部分卵巢癌患者需要接受二線乃至多線治療，隨著復(fù)發(fā)次數(shù)增加，患者的無進(jìn)展生存期逐漸縮短，累積的毒性逐漸增加，最終發(fā)展為對鉑類耐藥［1，9-10］。鉑耐藥患者預(yù)后差，NCCN 指南建議加臨床試驗，化療多選擇非鉑藥物，總有效率不足20%，中位無進(jìn)展生存率（PFS）僅3～4 個月，中位總生存時間（OS）不足12個月。

中藥有效成分在抗腫瘤方面有獨特優(yōu)勢，具有多途徑、多靶點、低毒性的特點，開發(fā)新型抗腫瘤藥物已成為了卵巢癌研究的熱點。東北巖高蘭廣泛分布于東北大興安嶺地區(qū)［11］，富含黃酮類化合物，其主要活性成分是二氫查耳酮，具有抗腫瘤活性。本課題前期使用AB-8 大孔吸附樹脂對東北巖高蘭總黃酮進(jìn)行分離，使用半制備型高效液相色譜對黃酮進(jìn)行了純化，得到5 種單體化合物，經(jīng)核磁共振波譜及質(zhì)譜分析鑒定為：2’，4’，β-三羥基二氫查耳酮、2’-甲氧基-4’-羥基二氫查耳酮、2’，4’-二羥基二氫查耳酮、2'，5'-二羥基-3'-甲氧基-4'，6'-二甲基二氫查耳酮、4'，5'-二羥基-2'-甲氧基-3'，6'-二甲基-二氫查耳酮，相關(guān)成果已發(fā)表論文并已申請發(fā)明專利（一種從東北巖高蘭中提取、分離純化5種查耳酮的方法，專利號：201910261969.7）［8］。

細(xì)胞凋亡是細(xì)胞程序性死亡的一種主要形式，在調(diào)節(jié)多細(xì)胞生長、發(fā)育和維持細(xì)胞穩(wěn)定數(shù)量過程中發(fā)揮重要作用［12-13］，細(xì)胞凋亡一但受抑制，就會導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生和進(jìn)展［12，14］。抗腫瘤化療藥物誘導(dǎo)凋亡及機制研究是研究者密切關(guān)注的熱點，也是腫瘤治療有前途的方向?？沟蛲龅鞍譈cl-2是最早發(fā)現(xiàn)的參與細(xì)胞程序性死亡調(diào)控的基因之一，定位于線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及核膜的細(xì)胞質(zhì)面上［15］，Bcl-2 在多種腫瘤細(xì)胞表達(dá)升高，通過抑制細(xì)胞程序性死亡，促進(jìn)癌癥的發(fā)生［13，16］。本研究發(fā)現(xiàn)上皮性卵巢癌組織中Bcl-2 基因表達(dá)水平升高，進(jìn)一步驗證了Bcl-2基因的促癌作用［13］。

細(xì)胞凋亡是當(dāng)前生命科學(xué)中引人注目的研究熱點，以細(xì)胞凋亡為靶點，借助分子生物學(xué)技術(shù)，深化中醫(yī)藥抗腫瘤研究，闡述其抗腫瘤作用機理，具有非常重要的意義。本研究應(yīng)用CCK-8法測定細(xì)胞活力，篩選藥物濃度，研究東北巖高蘭提取物對上皮性卵巢癌細(xì)胞SKOV3、OVCAR3、A2780 的增殖抑制作用，結(jié)果顯示：提取物Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ對卵巢癌細(xì)胞SKOV3、OVCAR3、A2780抑制作用顯著，而提取物Ⅰ無增殖抑制作用；進(jìn)而確定了提取物IC50值，在此藥物濃度作用下，采取流式細(xì)胞學(xué)檢測細(xì)胞凋亡率，發(fā)現(xiàn)東北巖高蘭提取物Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ對上皮性卵巢癌細(xì)胞SKOV3、OVCAR3、A2780 增殖抑制作用顯著，呈劑量-時間依賴性，其抑制作用排序如下：提取物Ⅴ>Ⅳ>Ⅱ>Ⅲ?？梢姡瑬|北巖高蘭提取物Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ通過促進(jìn)細(xì)胞凋亡發(fā)揮抗腫瘤細(xì)胞增殖作用，進(jìn)一步證明了二氫查耳酮的抗腫瘤作用，為開發(fā)東北巖高蘭抗腫瘤藥用價值提供依據(jù)。

細(xì)胞自噬又稱Ⅱ型程序性細(xì)胞死亡［17］，是指細(xì)胞在外界環(huán)境因素的影響下，利用溶酶體降解自身受損、變性或衰老的大分子物質(zhì)以及細(xì)胞器的自我消化過程［13］。自噬是一把雙刃劍，具有保護(hù)和破壞作用，一方面通過溶酶體途徑去除受損的細(xì)胞器、有毒代謝物和病原體，并產(chǎn)生能量維持細(xì)胞的生存，另一方面，細(xì)胞內(nèi)重要成分的過度自我消化和降解會導(dǎo)致細(xì)胞死亡［16］。細(xì)胞自噬與腫瘤的關(guān)系非常密切，在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中也扮演雙重角色，在腫瘤初期階段，細(xì)胞自噬可以抑制腫瘤的發(fā)生，隨著腫瘤進(jìn)展，自噬可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖、抑制凋亡、并可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移，同時還通過促血管生成促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長［12，14］。Beclin-1是第1個被發(fā)現(xiàn)參與自噬過程的基因，定位于人類第17q21 號染色體，在自噬中發(fā)揮核心作用［17］，編碼Beclin-1 蛋白，是啟動自噬體形成的必需蛋白，可作為支架，通過與其他蛋白質(zhì)結(jié)合，調(diào)控自噬前體的形成［12，17］，起到類似“平臺”的作用。Beclin-1 最初是作為Bcl-2 的交互蛋白被分離出來，含有與Bcl-2 相似的BH3 結(jié)構(gòu)域，Bcl-2 可通過與該結(jié)構(gòu)域影響自噬。本研究結(jié)果顯示卵巢癌組織中的Beclin-1 基因表達(dá)水平顯著降低，減弱了自噬活性，論證了Beclin-1 是腫瘤形成的負(fù)調(diào)節(jié)因子，有助于功能性自噬，這與乳腺癌研究結(jié)論一致［18-19］。

近年來研究發(fā)現(xiàn)Bcl-2 通過與Beclin-1 相互作用發(fā)揮抗自噬作用，Beclin-1/Bcl-2 復(fù)合物在細(xì)胞中起著變阻器功能，Bcl-2不僅通過與含有BH3結(jié)構(gòu)域的促凋亡蛋白結(jié)合來抑制細(xì)胞凋亡，而且通過與Beclin-1 的BH3 結(jié)構(gòu)域結(jié)合，調(diào)節(jié)生長因子信號，調(diào)節(jié)自噬?？沟蛲龅鞍譈cl-2與自噬蛋白Beclin-1 的相互作用是研究細(xì)胞凋亡與自噬機制的潛在靶點。本研究采用Bcl-2、Beclin-1 作為標(biāo)志物，發(fā)現(xiàn)東北巖高蘭提取物Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ對上皮性卵巢癌細(xì)胞增殖有顯著抑制作用，藥物組Bcl-2 基因相對表達(dá)量降低，說明提取物Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ可能在基因水平調(diào)控細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡；提取物作用后腫瘤細(xì)胞Beclin-1 基因相對表達(dá)量升高，提示Beclin-1 基因可能通過參與自噬，加速了細(xì)胞凋亡的進(jìn)程。另外，通過Western Blot 法檢測細(xì)胞中Bcl-2、Beclin-1 蛋白表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)藥物組卵巢癌細(xì)胞SKOV3、A2780、OVCAR3 中Bcl-2 蛋白的表達(dá)量降低，Beclin-1 蛋白表達(dá)量升高，說明提取物Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ在蛋白質(zhì)水平同樣影響了卵巢癌響細(xì)胞的增殖活性，加速了腫瘤細(xì)胞的凋亡?？梢?，Bcl-2/Beclin-1 復(fù)合物可能是一個變阻器，通過調(diào)節(jié)Bcl-2 與Beclin-1 的相互作用，不僅控制細(xì)胞自噬水平，而且控制自噬基因依賴性細(xì)胞死亡。本研究結(jié)果支持東北巖高蘭提取物二氫查耳酮單體對于卵巢癌腫瘤細(xì)胞的抑制作用。

凋亡和自噬是兩種顯著不同的細(xì)胞死亡形式，兩者在形態(tài)、生化指標(biāo)以及調(diào)控細(xì)胞死亡的過程上存在較大的差異，但兩者又不是兩個完全獨立的過程，在某些情況下相互影響和制約［16］。自噬和凋亡之間存在著3 種不同類型的相互作用，每種類型都對應(yīng)著特定的細(xì)胞類型、刺激和環(huán)境。研究發(fā)現(xiàn)Bcl-2家族成員是細(xì)胞凋亡的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，含有4 個（BH1、BH2、BH3、BH4）高度保守的同源結(jié)構(gòu)域，其中BH3域是細(xì)胞凋亡相關(guān)的關(guān)鍵結(jié)構(gòu)域［16］，Bcl-2通過該域與Beclin1 相互作用。Beclin-1 蛋白干預(yù)自噬過程的每一個主要步驟，從自噬體形成到自噬體成熟，其中許多效應(yīng)是通過激活特定的Beclin-1 結(jié)合蛋白介導(dǎo)的，同樣Beclin-1 含有BH3 同源結(jié)構(gòu)域，是結(jié)合抗凋亡Bcl-2 家族成員所必需的，這表明BH3結(jié)構(gòu)域可能是一個共同的結(jié)構(gòu)基序，Bcl-2家族成員通過該結(jié)構(gòu)域識別并雙重調(diào)節(jié)凋亡和自噬分子［14，17］。

Beclin-1 與Bcl-2 蛋白的相互作用可能是相對不穩(wěn)定、短暫、僅在特定條件下發(fā)生，如饑餓可激活c-Jun N 末端激酶JNK1，磷酸化Bcl-2，導(dǎo)致其與Beclin-1 結(jié)合能力減弱，引發(fā)自噬，而在營養(yǎng)充足的情況下，非磷酸化Bcl-2 與Beclin1 結(jié)合加強，阻斷自噬；Bcl-2 或Beclin-1 翻譯后修飾可以改變Bcl-2–Beclin-1 的相互作用，不僅BH3 肽或蛋白質(zhì)可以競爭性破壞Bcl-2/Beclin 1 復(fù)合體的相互作用，不同的膜錨定受體或其銜接蛋白也可能調(diào)節(jié)Bcl-2 和Beclin-1 之間的相互作用［14］，如死亡相關(guān)蛋白激酶（DAPK）可使Beclin1 的BH3 結(jié)構(gòu)域磷酸化，阻礙Beclin1 與Bcl-2 的結(jié)合等。所以，自噬可作為凋亡的上游調(diào)節(jié)因子，直接調(diào)控細(xì)胞凋亡，通過去除因氧化應(yīng)激受損的細(xì)胞器，或降解變性的大分子物質(zhì)，為饑餓的細(xì)胞提供生存所需要的營養(yǎng)和能量，也可以降解未折疊的蛋白來抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，抑制促凋亡信號的產(chǎn)生，拮抗細(xì)胞的凋亡效應(yīng)。Bcl-2、Beclin-1蛋白之間的作用機制復(fù)雜，二者的具體作用機理及相關(guān)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路需要深入研究。

在大多數(shù)情況下，化療誘導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞自噬是一種促生存反應(yīng)，可能導(dǎo)致耐藥性的發(fā)展，同時自噬也可導(dǎo)致細(xì)胞死亡，提高治療效果。尋找易受自噬影響的腫瘤細(xì)胞類型，并確定自噬途徑對細(xì)胞的優(yōu)勢作用，對腫瘤治療意義重大［9，20］。本研究結(jié)果支持東北巖高蘭提取物二氫查耳酮單體Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ可抑制腫瘤細(xì)胞的增殖，降低Bcl-2 基因和蛋白的表達(dá)，升高Beclin-1 基因和蛋白的表達(dá)來控制細(xì)胞自噬，促進(jìn)細(xì)胞凋亡，達(dá)到抑制腫瘤發(fā)展的作用，提示抗凋亡蛋白Bcl-2 與自噬蛋白Beclin-1 的相互作用是上皮性卵巢癌治療的潛在靶點，為開發(fā)東北巖高蘭抗腫瘤藥用價值提供了基礎(chǔ)依據(jù)。

由于時間及條件限制，僅做了體外實驗，未進(jìn)行體內(nèi)實驗驗證，僅研究了Bcl-2、Beclin-1 基因和蛋白的表達(dá)水平，其信號通路及其具體作用機制有待于未來進(jìn)一步深入研究。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突