高天宇，胡靜，唐子惟，王迎香，劉應(yīng)，陶鵬，彭騰，陳胡蘭

(成都中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院/西南特色中藥資源國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/中藥材標(biāo)準(zhǔn)化教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，四川 成都 6111137)

黃精Polygonati Rhizoma為百合科黃精屬多年草本植物，可分為滇黃精PolygonatumkingianumColl.et Hemsl、黃精PolygonatumsibiricumRed.和多花黃精PolygonatumcyrtonemaHua。黃精作為藥食同源的代表中藥之一，已被《中國(guó)藥典》2020年版(一部)收載[1]，其含有大量的糖類、醌類、甾體皂苷、氨基酸和微量元素等化學(xué)物質(zhì)，干燥根莖可藥用，具有補(bǔ)氣養(yǎng)陰、健脾益腎之功效[2-3]?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明黃精具有降血糖、降血脂、預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化、保護(hù)心腦血管、增強(qiáng)免疫、延緩衰老、改善記憶、防止老年癡呆、抗抑郁、抗炎等作用[4-7]。

生黃精具有麻味,生品服用時(shí),口舌麻木,刺激咽喉，臨床應(yīng)用需經(jīng)過炮制。炮制后,消除了其刺激性,口感更好,利于服用。黃精經(jīng)炮制后藥性轉(zhuǎn)變,利于有效成分積累,其黏液質(zhì)被破壞并去掉,使其滋而不膩,同時(shí)使黃精藥效增強(qiáng)[8]。歷代文獻(xiàn)對(duì)黃精的炮制均有記載,最早可查的文獻(xiàn)是《醫(yī)方本草》。黃精的炮制方法從古至今，累計(jì)較多，可達(dá)20多種[9-12]，多為蒸煮法,如有單蒸、重蒸、九蒸九曬、加輔料蒸制等。黃精蒸制的原始意圖就是去除“刺人咽喉”的不良反應(yīng),蒸曬干還可使黃精“不爾朽壞”,增強(qiáng)“補(bǔ)養(yǎng)滋腎”的作用?！侗静輳男隆分杏涊d“黃精去須，九蒸九曬用，每蒸一次，必半日方透”[13]。但是，“九”在古代有多次的含義，并不一定指九次的含義，而是指多次。九蒸九曬黃精在炮制過程中消耗時(shí)間長(zhǎng)，導(dǎo)致工作效率低，而且多次蒸制后黃精的有效成分的含量下降很多，外觀等都會(huì)發(fā)生改變。本論文在前期研究的基礎(chǔ)上，采用四蒸-四烘和四蒸-四悶-四烘的蒸制工藝對(duì)黃精進(jìn)行炮制，并研究其在炮制過程中多糖含量及可溶性成分的變化，進(jìn)一步為炮制工藝及深入開發(fā)功能性黃精產(chǎn)品提供參考，并為藥膳食材和保健品的科學(xué)的選品提供依據(jù)。

1 材料與儀器

1.1 實(shí)驗(yàn)藥材

黃精藥材，來自筠連縣黃精，經(jīng)成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院生藥教研室龍飛副教授鑒定為百合科植物黃精(PolygonstumsibirifumRed.)的干燥根莖。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑

無水乙醇，分析純(批號(hào)：2020072902，成都市科隆化學(xué)品有限公司)；蒽酮，分析純(批號(hào)：20200312，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)；硫酸，分析純(批號(hào)：2011131，四川西隴科學(xué)有限公司);葡萄糖對(duì)照品(批號(hào):wkq21011805，純度：HPLC≥98%，四川省維克奇生物有限公司)。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器與設(shè)備

TW-2000W可控調(diào)溫電爐(郫縣永信電器廠)；26 cm GB/T 29601 雙蒸片兩用鍋(廣東省揭陽市梅云何厝工業(yè)區(qū))；JCS-11002C電子天平(哈爾濱眾匯衡器有限公司)；DZF-6051真空干燥箱(上海將任實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)；KQ-300E超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；DZTW電子調(diào)溫電熱套(天津工興實(shí)驗(yàn)室儀器有限公司)；FA2004N萬分之一分析天平(上海億測(cè)電子設(shè)備)；200T多功能粉碎機(jī)(永康市鉑歐五金制品有限公司)；TDZ5-WS多管架自動(dòng)平衡離心機(jī)(長(zhǎng)沙湘儀離心機(jī)儀器有限公司)；SHZ-D循環(huán)水式真空泵(鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司)。

2 方法

2.1 黃精的炮制

2.1.1 蒸-烘法黃精的制備

取生黃精3 kg，洗凈后切片，取出0.6 kg置于干凈托盤中，放入干燥箱中，70℃，烘10 h后，取出放涼裝袋；剩余2.4 kg黃精片均分為四份置于蒸鍋中，加清水蒸6 h后，70℃條件下，烘10 h后，取出其中一份黃精置于托盤，放涼裝袋；重復(fù)上述蒸烘操作至四蒸四烘，每次取出一份黃精置于托盤，放涼裝袋，即得炮制黃精樣品。黃精樣品分別編號(hào)，依次為：生品(a)、一蒸一烘(b)、二蒸二烘(c)、三蒸三烘(d)、四蒸四烘(e)。

2.1.2 蒸-悶-烘黃精的制備

取生黃精3 kg，洗凈后切片，取出0.6 kg置于干凈托盤中，放置隔夜(約10 h)，放入干燥箱中，70℃，烘10 h后，取出放涼裝袋；剩余2.4 kg黃精片均分為四份置于蒸鍋中，加清水蒸6 h后，放置隔夜(約10 h)，放入干燥箱中，70℃，烘10 h后，取出其中一份黃精置于托盤，放涼裝袋；重復(fù)上述蒸悶烘操作至四蒸四悶四烘，每次取出一份黃精置于托盤，放涼裝袋，即得炮制黃精樣品。黃精樣品分別編號(hào)，依次為：生品(a1)、一蒸一悶一烘(b1)、二蒸二悶二烘(c1)、三蒸三悶三烘(d1)、四蒸四悶四烘(e1)。

2.2 黃精多糖的含量測(cè)定

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備

精密稱定經(jīng)105℃干燥至恒重的無水葡萄糖對(duì)照品33.6 mg(參考2020版中國(guó)藥典)，置于100 mL的容量瓶中，加蒸餾水溶解并稀釋至刻度線，搖勻，即得濃度為0.336 mg/mL的對(duì)照品溶液，置于冰箱中冷藏使用。

2.2.2 供試品溶液的制備

取已裝袋的兩組黃精，一組黃精各五個(gè)樣品，每個(gè)樣品取出30 g，在打粉機(jī)中打磨成細(xì)粉，分別裝袋。精密稱取60℃下干燥至恒重的樣品粉末2.5 g置于500 mL圓底燒瓶中，加入150 mL的濃度為80%的乙醇溶液于圓底燒杯中，與樣品粉末均勻混合，加熱回流1 h后，趁熱抽濾，抽濾剩余殘?jiān)脽?0%乙醇沖洗3次，每次約10 mL。只保留殘?jiān)蜑V紙，置于500 mL圓底燒瓶中，加入150 mL蒸餾水，加熱回流1 h，趁熱抽濾，殘?jiān)盁坑眉訜岷蟮恼麴s水沖洗3次，每次約10 mL，合并濾液和沖洗液，放冷后轉(zhuǎn)移至200 mL的容量瓶中，加水至刻度線定容，搖勻，密封后放置冰箱冷藏保存[1]。

2.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

精密量取對(duì)照品溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 mL置于標(biāo)號(hào)為②③④⑤⑥⑦的10 mL帶塞試管中。再取一支干凈具塞試管編號(hào)為①，制備空白對(duì)照溶液。分別加入蒸餾水至2 mL，搖勻，在冰水浴中緩慢滴加濃度為0.2%的蒽酮硫酸溶液至10 mL刻度處，震蕩試管，使溶液混合均勻，待試管放冷后置于沸水中水浴保溫10 min后取出，立即再次置于冰水浴中10 min。完成反應(yīng)后，根據(jù)《中國(guó)藥典》(2020版)(通則0401)紫外-可見分光光度法，在582 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線備用[1]。

2.2.4 供試品的檢測(cè)

精密量取兩組供試品溶液各1 mL置于標(biāo)號(hào)為①②③④⑤的10 mL帶塞試管中，分別加入蒸餾水至2 mL，搖勻，在冰水浴中緩慢滴加濃度為0.2%的蒽酮硫酸溶液至10 mL刻度處，震蕩試管，使溶液混合均勻，待試管放冷后置于沸水中水浴保溫10 min后取出，立即再次置于冰水浴中10 min。完成反應(yīng)后，根據(jù)《中國(guó)藥典》(2020版)(通則0401)紫外-可見分光光度法，在582 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，并根據(jù)以公式1計(jì)算供試品多糖含量。

式中，C為黃精多糖供試液被稀釋后的質(zhì)量濃度(mg/mL)；D為黃精多糖供試液的稀釋倍數(shù)；V為黃精多糖供試液的體積(mL)；m為黃精樣品質(zhì)量(mg)。

2.3 黃精可溶性成分變化的測(cè)定

2.3.1 醇溶性成分的測(cè)定

精密稱取黃精樣品粉末3 g，置于體積為250 mL的離心管中，加入30 mL的80%乙醇溶液，混合均勻后，置于功率為240 W的超聲儀器中超聲處理30 min，取出離心管，置于離心機(jī)中4 390×g離心15 min。清液中含醇溶性成分，剩余不溶物加入80%乙醇溶液重復(fù)上法提取3次，合并清液于105℃條件下恒重后的燒杯中，置于70℃烘箱中揮干乙醇后，于105℃條件下繼續(xù)恒重，二者恒重前后的質(zhì)量差則為醇溶性成分的重量。同一組粉末用相同操作提取3次，取3次恒重之后的平均質(zhì)量差即得黃精醇溶性成分[14]。

根據(jù)公式2：醇溶性成分含量%=(恒重后燒杯重量和醇溶性成分質(zhì)量-恒重?zé)|(zhì)量)/樣品質(zhì)量×100%，即可得醇溶性成分所占的質(zhì)量百分比。

2.3.2 水溶性成分的測(cè)定

精密稱取黃精樣品粉末3 g，置于體積為250 mL的離心管中，加入30 mL的蒸餾水，混合均勻后，置于功率為240 W的超聲儀器中超聲處理30 min，取出離心管，置于離心機(jī)中4390×g離心15 min。清液中含水溶性成分，剩余不溶物加入蒸餾水重復(fù)上法提取3次，合并清液于105℃條件下恒重后的燒杯中，置于70℃烘箱中揮干蒸餾水，于105℃條件下繼續(xù)恒重，二者恒重前后的質(zhì)量差則為水溶性成分的重量。同一組粉末用相同操作提取3次，取3次恒重之后的平均質(zhì)量差即得黃精水溶性成分。[14]

根據(jù)公式3：水溶性成分含量%=(恒重后燒杯重量和水溶性成分質(zhì)量-恒重?zé)|(zhì)量)/樣品質(zhì)量×100%，即可得水溶性成分所占的質(zhì)量百分比。

3 結(jié)果與分析

3.1 黃精的炮制品外觀性狀

根據(jù)2.1方法制得的兩組黃精，其色澤均隨炮制次數(shù)的增加而加深，并且蒸-悶-烘法炮制黃精的顏色略比蒸-烘法炮制的黃精顏色深。結(jié)果見圖1、圖2。

(b) (c) (d) (e)

(b1) (c1) (d1) (e1)

3.2 黃精的多糖含量

3.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

根據(jù)2.2.1和2.2.3中標(biāo)準(zhǔn)曲線制備方法，在規(guī)定的紫外條件下測(cè)定吸光度，以濃度為橫坐標(biāo)，吸光度(ABS)為縱坐標(biāo)，得回歸方程Y=9.308 3X-0.076 4(R2=0.999 3)，曲線在多糖濃度為0.016 8～0.100 8 mg/mL的范圍中適用。結(jié)果見圖3。

圖3 標(biāo)準(zhǔn)曲線

3.2.2 黃精炮制品中多糖含量測(cè)定結(jié)果

根據(jù)2.2.2中所制得的供試品溶液，在2.2.4中的實(shí)驗(yàn)條件下測(cè)得黃精炮制品多糖含量，并以此含量做變化趨勢(shì)圖，結(jié)果見圖4、圖5。以此可知，黃精的多糖含量在炮制過程中，無論是通過蒸-烘還是蒸-悶-烘炮制工藝，均隨著炮制次數(shù)的增加，呈減少趨勢(shì)。

注：生品(a)、一蒸一烘(b)、二蒸二烘(c)、三蒸三烘(d)、四蒸四烘(e)

注：生品(a1)、一蒸一悶一烘(b1)、二蒸二悶二烘(c1)、三蒸三悶三烘(d1)、四蒸四悶四烘(e1)

在蒸-烘，蒸-悶-烘炮制方法中，兩種不同的方法黃精多糖含量的均有下降趨勢(shì)，蒸-悶-烘炮制方法黃精下降最為明顯，降低了18.36%。

3.3 黃精可溶性成分的測(cè)定

3.3.1 醇溶性成分的測(cè)定

根據(jù)2.3.1中方法提取的黃精醇溶性成分，通過重量差法測(cè)得兩組炮制黃精的醇溶性成分，并通過折線圖分析其變化趨勢(shì)，結(jié)果見圖6、圖7。

注：生品(a)、一蒸一烘(b)、二蒸二烘(c)、三蒸三烘(d)、四蒸四烘(e)

注：生品(a1)、一蒸一悶一烘(b1)、二蒸二悶二烘(c1)、三蒸三悶三烘(d1)、四蒸四悶四烘(e1)

由圖可知，黃精經(jīng)由兩種蒸制工藝炮制過后，醇溶性成分均隨著蒸制次數(shù)增加而增加。其中經(jīng)由蒸-悶-烘工藝炮制的黃精醇溶性成分增加的幅度較蒸-悶-烘工藝炮制的黃精醇溶性成分增加的幅度增長(zhǎng)更大，且醇溶性成分含量更高。

3.3.2 水溶性成分的測(cè)定

根據(jù)2.3.2中方法提取的黃精水溶性成分，通過重量差法測(cè)得兩組炮制黃精的水溶性成分，并通過折線圖分析其變化趨勢(shì)，結(jié)果見圖8、圖9。

注：生品(a)、一蒸一烘(b)、二蒸二烘(c)、三蒸三烘(d)、四蒸四烘(e)

注：生品(a1)、一蒸一悶一烘(b1)、二蒸二悶二烘(c1)、三蒸三悶三烘(d1)、四蒸四悶四烘(e1)

由圖可知，黃精經(jīng)由兩種蒸制工藝炮制過后，水溶性成分均隨著蒸制次數(shù)增加而減少。其中經(jīng)由蒸-悶-烘工藝炮制的黃精水溶性成分增加的幅度較蒸-烘工藝炮制的黃精水溶性成分減少的幅度更為平緩，且同等蒸制次數(shù)中水溶性成分含量較低。

4 討論

本研究表明，通過不同的炮制方法，黃精的多糖、可溶性成分的含量不同，顏色差異較大。用于飲品的黃精可選擇浸出物成分含量較高的二制黃精；黃精藥膳可選擇蒸-烘法中的三蒸三烘黃精和蒸-悶-烘法中的三蒸三烘黃精；考慮到黑色補(bǔ)腎的原理，補(bǔ)腎方面食材可選擇四蒸黃精。

在黃精的兩種炮制過程中，黃精中多糖含量和水溶性成分隨著炮制次數(shù)的增加而逐漸減少，而醇溶性成分隨著其增加而變多。黃精中的多糖含量和水溶性成分在二制時(shí)均達(dá)到了平緩的下降趨勢(shì)，醇溶性成分在二制時(shí)均達(dá)到平緩的增長(zhǎng)趨勢(shì)，且在二制時(shí)品嘗麻舌刺喉感微弱。這與文獻(xiàn)實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致[14-15]。究其原因，推測(cè)多糖含量減少，主要因?yàn)辄S精中的糖類成分和氨基酸多肽蛋白類成分在高溫下發(fā)生了十分復(fù)雜的美拉德反應(yīng)所致[16]。目前認(rèn)為黃精生品對(duì)喉嚨的刺激性作用是由多糖類物質(zhì)黏液質(zhì)引起的，黏液質(zhì)可能在炮制過程中分解為小分子糖，從而消除了黃精的刺激性[17]。

黃精在炮制過程中，其表面色澤逐漸加深，主要原因是隨著炮制過程產(chǎn)生了美拉德產(chǎn)物結(jié)構(gòu)尚未明確的一類化合物黑色素(類黑精)[14]，因此，在炮制去除黃精麻舌感的同時(shí)，能最大限度的保留多糖成分作為黃精的有效成分，是黃精炮制及產(chǎn)品中黃精選擇的條件。

黃精中的醇溶性成分主要包括單糖、色素、氨基酸等多種物質(zhì)，其中的單糖成分是黃精甜味的主要來源之一，因此，根據(jù)黃精醇溶性成分的多少，可為黃精酒的產(chǎn)品研究提供選擇依據(jù)。黃精中的水溶性成分主要包括粗多糖、蛋白質(zhì)等多種物質(zhì)，其中的粗多糖成分是黃精最主要的生物活性成分之一。因此，根據(jù)黃精水溶性成分的多少，可為黃精茶的選擇提供依據(jù)。

綜上所述，黃精多糖及其可溶性成分的變化符合炮制規(guī)律，可根據(jù)不同的適用人群，不同的應(yīng)用產(chǎn)品，更加合理選用黃精炮制品。