王會生，王文會，趙四正，杜逢艷，馬小蘭，韓慶彥

（1.甘肅省禮縣畜牧獸醫(yī)站，甘肅 禮縣 742200；2.甘肅省動物疫病預防控制中心，甘肅 蘭州 730030）

抗生素或抗菌藥物在一定濃度下能抑制和殺滅細菌類微生物，且使用抗生素可以提高料肉比，如20世紀40年代Moore等[1]國外科學家首次報道添加抗生素可以顯著提高肉雞的日增重，降低料肉比。這些年來抗生素作為預防和增重性添加劑在畜牧業(yè)的使用范圍和劑量都越來越大，但是長期過多地使用抗生素會造成環(huán)境污染，尤其是影響畜禽機體免疫力[2]和腸道微生態(tài)平衡[3]、降低肉蛋品質和風味[4]，最重要的是造成微生物對抗生素的耐藥性增強，使得畜禽疫病防治用藥量不斷增加，進而造成肉蛋中抗生素藥物的殘留[5]，對人體健康與食品安全產生危害。對于養(yǎng)雞業(yè)來說，抗生素的使用更為廣泛，長期、大量使用抗生素會抑制機體免疫功能下降，發(fā)病率增加[6]。研究表明，抗生素長期大量使用可能會干擾機體的免疫球蛋白，降低體內淋巴細胞的有絲分裂[7]，造成機體抵抗力下降。

我國部分中草藥具有提高免疫力的作用，其有效成分可分為有機酸類、生物堿類、多糖類、甙類、芳香揮發(fā)油類等，這是我國中醫(yī)學的瑰寶。如黃芪、刺五加、黨參、當歸、淫羊藿、穿心蓮、大蒜、茯苓、水牛角、豬苓等[8]，都有增強機體抵抗力、促進消化吸收的作用。

在飼料中添加中草藥防病治病，也是中獸醫(yī)學的一個研究方向。中草藥無耐藥性，不會在體內殘留，有利于解決使用抗生素造成的耐藥性、畜產品藥物殘留和環(huán)境污染等問題。同時利用中草藥刺激機體產生一定的免疫力，有利于機體免疫系統(tǒng)產生更多抗體[9]。微生物制劑也能促進動物的消化吸收，對于機體的免疫能力也有影響。本試驗選擇在其他飼養(yǎng)管理因素相同的條件下，檢測不同藥物對雞的免疫抗體效價的影響，為規(guī)模養(yǎng)雞場如何利用中草藥等添加劑代替抗生素提供數(shù)據(jù)支持，同時為如何做好雞的免疫和飼養(yǎng)管理提供資料。

1 材料與方法

1.1 試驗雞群

雛雞于2021年3月18日引進，2021年6月22日出售。引進雛雞均來自四川涼山美姑縣某家禽養(yǎng)殖公司，為同一批次的七日齡雛公雞，品種為青腳麻雞。共引進2 000只，選擇500只進行試驗。

1.1.1雞群分組與用藥 將500只雛雞平均分成5組，飼喂無添加抗生素及免疫增效劑的飼料。試驗設1個對照組、4個試驗組。試驗組分別添加清瘟敗毒散、扶正解毒散、牛蟾顆粒、益生源4種藥物。其中清瘟敗毒散主要成分為黃連、青黛、荊芥、防風、羌活等，按0.3%拌料；扶正解毒散主要成分為板藍根、黃芪、淫羊藿等，每只雞按照0.5～1.5 g/d劑量使用；牛蟾顆粒主要成分為人工牛黃、蟾蜍、冰片、黃芩、甘草等，按0.3%拌料；益生源有效成分是枯草芽孢桿菌、嗜酸乳桿菌和釀酒酵母等，按0.3%拌料。其中清瘟敗毒散和扶正解毒散由武威新天馬生物制品有限公司生產，牛蟾顆粒和益生源由濰坊牧易生物科技有限公司生產，均符合國家獸藥生產標準。

1.1.2雞群的飼養(yǎng)管理 采用封閉式籠養(yǎng)的方式，所有試驗雞群在同一個雞舍進行飼養(yǎng)，飼養(yǎng)方式相同，自由飲水，自21日齡開始投藥，一直到采血后結束。注意飼料在添加中成藥時，要確保中成藥和飼料完全混合均勻。

1.1.3疫苗注射 雞群30日齡時，注射禽流感三價苗滅活苗（H5N2亞型，D7株，大華農生物公司），7 d后再注射禽新重組二聯(lián)活疫苗（哈爾濱維科生物技術有限公司），以上兩種疫苗均為配發(fā)。

雞群30日齡時，選擇在早晨進行頸部皮下注射0.5 ml上述疫苗，免疫接種時要觀察雞群的健康狀況，選擇健康雞。

1.2 試驗試劑

采用市售的高致病性禽流感病毒H5亞型血凝抑制試驗抗原（Re-8株）和陽血清（Re-8株）（哈爾濱維科生物技術有限公司，2018007）。新城疫血凝抑制試驗抗原和陽性血清（青島立見生物科技有限公司，010131801）。

1.3 器械及耗材

準備10～200 μl單道、8道和12道移液器各1把，90°和110°一次性V型8×12反應板若干，無菌移液槍頭若干。

1.4 待檢血清處理方法

在雞群注射疫苗后19 d在雞的翅靜脈采血，每組至少采集50只雞的全血，每只3～5 ml。采用全血放置于0～4 ℃冰箱過夜24 h自然析出血清的方法收集血清，進行禽流感和新城疫的抗體效價測定。

1.5 檢測方法及抗體合格標準

按照《高致病性禽流感防治技術規(guī)范》等動物疫病防治技術規(guī)范中的相關規(guī)定，抗體檢測采用血凝（HA）和血凝抑制（HI）試驗法，具體按照GB/T 18936-2003《高致病性禽流感診斷技術》和GB/T 16550-2008《新城疫診斷技術》執(zhí)行，其抗體滴度達到≥4log2為合格，＜4log2為不合格。在具體試驗分析中，由于抗體效價判斷是人為操作，主觀性較大，不利于分析，為了解中成藥對于抗體的效價影響，將抗體滴度＜4log2定為不合格，4log2～6log2為合格，＞6log2為良好，以有利于抗體效價的判斷。

1%的RBC液的制備：采用當?shù)匚醋⑸溥^高致病性禽流感和新城疫疫苗的3只公雞，翅靜脈采血，制作1%的RBC液，同時測定禽流感和新城疫的抗原效價。嚴格按照操作規(guī)程進行試驗，注意要做抗原血凝回歸試驗，以確保試驗的準確性。

雖然注射禽新重組二聯(lián)苗理論上禽流感抗體和新城疫抗體應該是同時產生的，可實際上，往往其抗體效價峰值不會同時出現(xiàn)，大多數(shù)是禽流感抗體效價先達到峰值，新城疫次之，因此選擇在免疫注射后19 d進行采血而不是常見的15 d，是為了讓兩種抗體效價都達到峰值。為了保證抗體效價獲得足夠的免疫力，采取的是配發(fā)疫苗，第一劑禽流感N2亞型疫苗注射7 d后，又加強了一次禽新重組二聯(lián)苗，以提高抗體的檢出率。

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

本試驗數(shù)據(jù)釆用SPSS19.0進行單因素方差分析，并LSD多重比較。當P＜0.01為差異極顯著，P＜0.05為差異顯著，P＞0.05為差異不顯著。

2 結果與分析

2.1 抗體檢測結果

由表1可知，5組的禽流感抗體合格率（合格數(shù)/同組樣品總數(shù)，下同）分別為76%、78%、69.4%、74%和64%，新城疫抗體合格率分別為58%、68%、54%、60%和46%?？梢钥闯鲋兴幗M的抗體合格率明顯高于普通飼料組，在不合格的檢測樣本里（滴度＜4log2），也可以看出中藥組的抗體滴度要高于普通飼料組。具體來說，三種中藥試驗組產生的禽流感和新城疫的抗體效價相對于對照組差異顯著（P＜0.05）,而益生源組相對于對照組差異不顯著。這說明在飼料中添加中草藥對于肉雞的免疫系統(tǒng)有一定作用，可促使肉雞對于注射疫苗產生較強的應答反應，從而產生較強的抗體，而微生物制劑對于機體的免疫增強作用不太明顯。

表1 不同飼養(yǎng)組禽流感和新城疫抗體的效價

2.2 抗體情況

通過對250份血清分別進行禽流感和雞新城疫的血凝（HA）和血凝抑制（HI）試驗，每份血清同時檢測禽流感和新城疫兩種抗體的滴度。試驗結果顯示，中藥組的抗體良好數(shù)明顯高于益生源組和對照組，說明在提高機體免疫力方面中藥的效果要比微生物制劑好，它有助于機體產生較多的抗體。而在3組中藥組中，扶正解毒散、清瘟敗毒散兩組的抗體效價明顯高于牛蟾顆粒組，說明清瘟敗毒散和扶正解毒散更能夠刺激機體產生相對較高的免疫力，讓機體在免疫應答中更具優(yōu)勢。因此規(guī)模養(yǎng)雞場應盡量使用以扶正解毒散、清瘟敗毒散為基礎的中藥制劑代替抗生素，既有利于提高雞的抵抗力，又有利于提高雞注射疫苗后的抗體產生。

3 結語

為了保障畜牧業(yè)的健康發(fā)展，在養(yǎng)雞業(yè)中使用中草藥代替抗生素是畜牧業(yè)的發(fā)展方向。甘肅是千年藥鄉(xiāng)，尤其是隴東南山區(qū)，更是一座天然的中藥材寶庫，有豐富的野生藥材，如甘草、當歸、大黃、黨參、青黛、荊芥、防風、羌活、板藍根、淫羊藿等，不僅品種大，而且質量好。隨著鄉(xiāng)村振興的推進，中草藥的人工種植也在加快步伐，產生了不少廢棄物及半成品，應充分利用這些資源，篩選出經(jīng)濟、高效益的中草藥添加劑，從而推動綠色畜牧業(yè)的發(fā)展。