汪繼勝，方 佳，王 云，鄭祝權(quán)，翟冬旭，張偉龍 (.廣東醫(yī)科大學附屬東莞第一醫(yī)院呼吸與危重癥醫(yī)學科，廣東 東莞 570；.廣東醫(yī)科大學附屬東莞第一醫(yī)院消化內(nèi)科，廣東 東莞 570；.廣東醫(yī)科大學附屬東莞第一醫(yī)院檢驗科，廣東 東莞 570)

肺結(jié)核患者多會出現(xiàn)低熱、盜汗、乏力、咳嗽咳痰等癥狀，對患者身體健康、生命安全具有極其不利的影響[1]。對于此癥臨床診斷多根據(jù)胸影像學、患者臨床表現(xiàn)、實驗室檢查等進行診斷，但此癥患者臨床癥狀并不典型，且影像學表現(xiàn)無明顯特異性；由于化療、免疫功能障礙等影響，結(jié)核桿菌某些生物學特性還會發(fā)生一定的變異，增加了常規(guī)涂片檢查的難度[2]。此外，痰菌含量少、肺部病灶的局限性等因素，也會導致痰涂片檢查陰性。支氣管鏡檢查可對肺部病變部位進行最直觀的觀察，從而可直接取材，有助于提高標本診斷陽性率[3]。但關(guān)于采取何種標本取材方式的檢測價值更高臨床報道較少且探討并不深入，本研究對不同支氣管鏡介導標本的結(jié)核分枝桿菌基因(TB-DNA)檢測痰涂片陰性肺結(jié)核價值分析如下。

1 資料與方法

1.1一般資料：以隨機樣本抽樣法于我院2019年1月～2021年1月收治的痰涂片陰性肺結(jié)核患者中抽取60例，其中男39例，女21例；年齡18～60歲，平均(34.00±4.12)歲；病程1～10個月，平均(5.50±2.12)個月。本研究符合《赫爾辛基宣言》，且經(jīng)過本院醫(yī)學倫理委員會審核同意。納入標準：患者具有低熱、盜汗、乏力、咳嗽咳痰等癥狀；進行胸部CT等檢查，診斷為疑似肺結(jié)核；可耐受肺泡灌洗術(shù)、刷檢；痰涂片結(jié)核桿菌檢測結(jié)果為陰性；患者知情且簽署同意書。排除標準：免疫抑制者；嚴重肺動脈高壓；近兩周采用抗凝藥物；支氣管肺活動性出血者；語言、智力功能障礙無法清晰表達者；臨床資料不完整；依從性不佳者。

1.2方法

1.2.1支氣管鏡檢查：依據(jù)文獻[4]中相關(guān)操作規(guī)范，采用電子支氣管鏡(生產(chǎn)廠家：日本OLYMPUS公司，型號：240及290型)，行支氣管鏡檢查。應用2%利多卡因麻醉，之后采用電子支氣管鏡詳細檢查患者各段支氣管。

1.2.2支氣管肺泡灌洗收集痰液標本：詳細分析患者胸部CT檢查圖像，進一步明確主要病變區(qū)將其作為灌洗區(qū)域，之后將支氣管鏡末端插入支氣管開口部位，應用100 ml 0.9%的氯化鈉注射液(灌洗液)，將其溫度控制于37℃左右，應用注射器將其分3～4次由工作孔道注入，每次持續(xù)注入20～30 ml后，行負壓吸引吸收灌洗液，吸收率需超過40%。

1.2.3毛刷刷檢收集痰液標本：依據(jù)胸部CT檢測結(jié)果，應用保護性套管黏膜刷(生產(chǎn)廠家：常州晨濤醫(yī)療器械有限公司)對其主要病變區(qū)域進行刷檢，采用鉗孔將黏膜刷插入患者病變部位，稍加壓力并旋轉(zhuǎn)，持續(xù)擦3次，將黏膜刷取出，待檢。

1.2.4熒光定量PCR檢測TB-DNA：應用無菌灌洗瓶(生產(chǎn)廠家：興平市偉斯瑞儀器設備有限公司)將5 ml的灌洗液回收，應用Eppendorf試管(生產(chǎn)廠家：深圳瑞華?？萍加邢薰?回收5 ml的黏膜毛刷標本，分別向灌洗瓶、試管內(nèi)加入4%的NaOH溶液，充分振蕩5 min，放置于室溫環(huán)境下持續(xù)30 min，之后以2 000 r/min的轉(zhuǎn)速進行離心處理，持續(xù)10 min棄去上清液，于所得沉淀物樣本中加入DNA提取液5 μl，將其充分振蕩、搖勻，進行沸水浴10 min，之后以10 000 r/min的轉(zhuǎn)速進行離心處理，持續(xù)5 min選取上層清液進行DNA擴增。按照結(jié)核核酸檢測試劑盒(生產(chǎn)廠家)說明書操作步驟進行檢測。

1.3觀察指標：對比兩種介導標本的檢測結(jié)果及不良事件發(fā)生率。不良事件發(fā)生率=氣胸發(fā)生率+氣促發(fā)生率+黏膜出血發(fā)生率。

1.4統(tǒng)計學分析：采用統(tǒng)計學軟件SPSS22.0對本文數(shù)據(jù)進行分析，計數(shù)資料采用χ2檢驗；計量資料對比采用t檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1兩種介導標本的檢測結(jié)果對比：肺泡灌洗液提取標本陽性41例，陽性率68.33%；黏膜毛刷刷檢提取標本陽性55例，陽性率91.67%，兩種提取標本方法檢測陽性率對比，差異有統(tǒng)計學意義(χ2=34.698，P<0.05)。

2.2兩種介導標本檢測安全性對比：兩種介導標本方法不良事件發(fā)生率對比差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 兩種介導標本檢測安全性對比[n(%),n=60]

3 討論

肺結(jié)核是臨床常見的慢性傳染病，該病不具備臨床癥狀特異性，嚴重者會侵及患者多個臟器，最為常見的為肺部結(jié)核感染，對患者身體健康造成極大威脅[5]。因此，早期準確、快捷的診斷，對于結(jié)核病患者預后具有十分重要的作用。相關(guān)報道顯示，痰涂片抗酸染色，于肺結(jié)核疾病臨床診斷中具有顯著的臨床價值，且操作較為簡便、快捷，特異性較高。但該檢查方法陽性檢出率相對較低，易產(chǎn)生誤診、漏診情況，影響后續(xù)治療[6]。肺結(jié)核患者入院后進行痰涂片檢查，多數(shù)患者檢測結(jié)果均呈陰性，可能是由于細菌負荷程度低、痰液/涂片質(zhì)量低、引流支氣管不暢等多種因素的影響，且該癥患者具有極高的隱匿性，增加了臨床診斷的難度，該病對患者身體造成極大危害，嚴重者危及生命安全[7-8]。近些年來，支氣管鏡檢查技術(shù)不斷在臨床推廣，且對肺結(jié)核患者的臨床診斷越來越受重視，但關(guān)于采取何種標本取材方法診斷價值更顯著，相關(guān)報道較少[9-10]。本研究發(fā)現(xiàn)，兩種介導標本方法不良事件發(fā)生率對比無明顯差異，提示兩種標本采集方法均具有較高的安全性。但肺泡灌洗液提取標本陽性41例、陽性率68.33%，黏膜毛刷刷檢提取標本陽性55例、陽性率91.67%，數(shù)據(jù)提示，與肺泡灌洗液提取方式相比，黏膜毛刷刷檢提取標本的陽性率更高，價值更顯著。黏膜毛刷刷檢為一種新型的技術(shù)，于支氣管鏡下采用黏膜毛刷刷檢標本可使醫(yī)師更直觀觀察患者肺部病變區(qū)域，從而可應用保護性套管黏膜刷對其主要病變區(qū)域進行準確的刷檢，操作簡單、快捷，之后將5 ml的黏膜毛刷標本放置于Eppendorf試管中，進行定量PCR檢測，可有效避免外界因素對其標本帶來不良影響，從而可保證較高的檢測陽性率。

綜上所述，與肺泡灌洗液提取標本相比，毛刷刷檢收集標本TB-DNA診斷痰涂片陰性肺結(jié)核效能更顯著，可繼續(xù)推廣。