李俊強(qiáng)，文小強(qiáng)，代引海

陜西中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院腫瘤乳腺外科，陜西 咸陽 712000

乳腺癌屬于臨床常見的惡性腫瘤，主要發(fā)生于乳腺上皮組織，臨床主要表現(xiàn)為乳房腫塊、乳房皮膚異常等，若控制不及時，病情進(jìn)展至晚期腫瘤細(xì)胞會發(fā)生轉(zhuǎn)移，器官出現(xiàn)病變，嚴(yán)重威脅患者的生命健康。研究顯示，乳腺癌的發(fā)病率正逐年上升，居女性惡性腫瘤首位，病死率居女性惡性腫瘤第二位[1]。目前，乳腺癌多采用手術(shù)切除治療，術(shù)后需進(jìn)行放化療等輔助治療，不良反應(yīng)明顯，且乳腺癌康復(fù)時間較長，康復(fù)過程中患者疼痛明顯，可嚴(yán)重影響患者的預(yù)后[2]。有研究認(rèn)為，采用敏感的乳腺癌預(yù)后生物標(biāo)志物對評估腫瘤病情和預(yù)后尤為重要，人源性多肽（dermcidin，DCD）、可溶性E-鈣黏蛋白（soluble E-cadherin，sE-cadherin）表達(dá)與乳腺癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，可作為評估乳腺癌患者預(yù)后的生物標(biāo)志物[3-5]。因此，本研究探討DCD、sE-cadherin在乳腺癌中的表達(dá)及對患者預(yù)后的預(yù)測價值，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年10月至2020年12月陜西中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院收治的乳腺癌患者。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)CT、病理學(xué)檢查確診為乳腺癌；②病歷資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他惡性腫瘤；②合并臟器功能異常；③合并精神障礙；④已接受治療。依據(jù)納入和排除標(biāo)準(zhǔn)，本研究共納入298例乳腺癌患者，年齡24～65歲，平均（43.59±8.49）歲；病程6～15個月，平均（10.26±2.96）個月；TNM分期：Ⅰ期124例，Ⅱ期100例，Ⅲ期74例。取所有患者乳腺癌組織和相應(yīng)的癌旁組織。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)通過，所有患者均知情同意并簽署知情同意書。

1.2 免疫組化法檢測DCD、sE-cadherin的表達(dá)情況

取所有患者乳腺癌組織和相應(yīng)的癌旁組織，對組織標(biāo)本進(jìn)行切片、脫蠟、水化處理后，將標(biāo)本浸泡于3%過氧化氫中20 min，封閉內(nèi)源性過氧化物酶活性。高壓枸櫞酸鹽抗原修復(fù)，溫水清洗后使用磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline，PBS）清洗3次，每次5 min，同時滴加10%血清以阻斷非特異性的結(jié)合，37℃孵育10 min。滴加一抗DCD、sE-cadherin兔抗人單克隆抗體（濃度1∶100）4℃過夜，PBS再次清洗，滴加二抗DCD、sE-cadherin兔抗人單克隆抗體，37℃孵育10 min，PBS清洗3次后，滴加過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉素卵白素工作液孵育10 min，二氨基聯(lián)苯胺顯色，蘇木素復(fù)染，脫水、干燥后中性樹脂封片，用PBS代替一抗作為陰性對照。

結(jié)果判定：細(xì)胞質(zhì)呈棕黃色或棕褐色染色，或染色明顯強(qiáng)于背景色為陽性，選取5個不同視野進(jìn)行全面觀察，每個視野中細(xì)胞應(yīng)不低于200個，觀察完成后計算每個視野中陽性細(xì)胞所占比例，陽性細(xì)胞所占比例﹤5%為陰性，陽性細(xì)胞所占比例為5%～50%為弱陽性，陽性細(xì)胞所占比例﹥50%為強(qiáng)陽性，弱陽性和強(qiáng)陽性判定為陽性表達(dá)。

1.3 隨訪

采用門診復(fù)查等方式對所有患者進(jìn)行為期半年的隨訪，記錄患者的預(yù)后情況，將遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、病情加重或死亡判定為預(yù)后不良。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 22.0軟件對所有數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)；計數(shù)資料以例數(shù)和率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；乳腺癌患者預(yù)后的影響因素采用多元Logistic回歸分析；繪制受試者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲線，計算曲線下面積（area under the curve，AUC），評估DCD、sE-cadherin單獨(dú)及聯(lián)合檢測對乳腺癌患者預(yù)后的預(yù)測價值；以P﹤0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 乳腺癌組織和癌旁組織中DCD、sE-cadherin表達(dá)情況的比較

乳腺癌組織中DCD的陽性表達(dá)率明顯高于癌旁組織，sE-cadherin的陽性表達(dá)率明顯低于癌旁組織，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P﹤0.01）。（表1）

表1 乳腺癌組織和癌旁組織中DCD、sE-cadherin陽性表達(dá)率的比較[ n（%）]

2.2 不同預(yù)后情況乳腺癌患者乳腺癌組織中DCD、sE-cadherin表達(dá)情況的比較

隨訪半年，298例乳腺癌患者中，預(yù)后良好209例，預(yù)后不良89例；預(yù)后不良乳腺癌患者乳腺癌組織中DCD的陽性表達(dá)率明顯高于預(yù)后良好患者，sE-cadherin的陽性表達(dá)率明顯低于預(yù)后良好患者，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P﹤0.05）。（表2）

表2 不同預(yù)后情況乳腺癌患者乳腺癌組織中DCD、sE-cadherin陽性表達(dá)率的比較[ n（%）]

2.3 乳腺癌患者預(yù)后影響因素的單因素和多因素分析

單因素分析結(jié)果顯示，年齡、病程均可能與乳腺癌患者的預(yù)后無關(guān)（P﹥0.05），淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、腫瘤直徑、TNM分期、DCD表達(dá)情況、sE-cadherin表達(dá)情況均可能與乳腺癌患者的預(yù)后有關(guān)（P﹤0.05）。多因素Logistic回歸分析結(jié)果顯示，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤直徑≥5 cm、TNM分期為Ⅱ～Ⅲ期、DCD陽性表達(dá)、sE-cadherin陰性表達(dá)均為乳腺癌患者預(yù)后不良的獨(dú)立危險因素（P﹤0.05）。（表3）

2.4 DCD、sE-cadherin單獨(dú)及聯(lián)合檢測對乳腺癌患者預(yù)后的預(yù)測價值

DCD、sE-cadherin、DCD+sE-cadherin預(yù)測乳腺癌患者預(yù)后的AUC分別為0.795、0.711、0.887，DCD+sE-cadherin聯(lián)合預(yù)測的AUC最大，此時的靈敏度、特異度分別為0.576、0.619。（表4、圖1）

表4 DCD、sE-cadherin單獨(dú)及聯(lián)合檢測對乳腺癌患者預(yù)后的預(yù)測價值

3 討論

隨著社會生活水平的提高，女性的工作生活壓力不斷升高，與女性相關(guān)的健康問題也逐漸顯現(xiàn)。乳腺癌是女性發(fā)病率最高的惡性腫瘤，權(quán)威數(shù)據(jù)顯示，近年來，乳腺癌的發(fā)病率居女性惡性腫瘤首位[6-7]。同時，乳腺癌也是女性惡性腫瘤死亡原因的第二位，這主要是因?yàn)槟[瘤細(xì)胞增殖指數(shù)較高，病情進(jìn)展迅速，對女性和社會造成的危害日漸突出。臨床常采用觸診、病理學(xué)檢查、鉬靶X線、正電子發(fā)射計算機(jī)斷層顯像（position emission tomography，PET）/CT、MRI等對乳腺癌進(jìn)行檢查，但觸診準(zhǔn)確度較低，受主觀因素的影響較大；病理學(xué)檢查雖準(zhǔn)確度高，但是一種術(shù)后有創(chuàng)檢查，無法及時了解藥物的效果，甚至?xí)诱`治療；X線對致密型乳腺癌診斷不準(zhǔn)確；PET/CT及MRI檢查費(fèi)用昂貴。早期乳腺癌多無明顯臨床表現(xiàn)，多數(shù)患者確診時已進(jìn)展至中晚期，失去了最佳的手術(shù)治療時機(jī)，且多數(shù)患者預(yù)后不良[8-9]。上述檢查方法無法及時有效評估患者的預(yù)后情況，因此需尋找一種更有效的檢測方法。

有研究發(fā)現(xiàn)，血清腫瘤生化指標(biāo)檢測特異度、靈敏度均較高，便于臨床持續(xù)監(jiān)測預(yù)后及輔助診斷[10-12]。有研究認(rèn)為，sE-cadherin是一種跨膜糖蛋白，其表達(dá)下調(diào)時，可減輕腫瘤細(xì)胞間的黏附能力，可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移[13-14]。研究認(rèn)為，sE-cadherin在乳腺癌組織中高表達(dá)，其表達(dá)與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展、侵襲轉(zhuǎn)移、預(yù)后密切相關(guān)，可作為臨床診斷與預(yù)后的評價指標(biāo)。國外研究表明，DCD在多種腫瘤中發(fā)揮致癌基因的作用，被認(rèn)為與惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展及轉(zhuǎn)移有關(guān)[16]。

鄧奔騰等[17]研究認(rèn)為，DCD在乳腺癌組織中表達(dá)明顯上調(diào)，可成為臨床診斷的生物標(biāo)志物。本研究結(jié)果顯示，DCD在乳腺癌組織中的陽性表達(dá)率較高，而sE-cadherin在癌旁組織中的陽性表達(dá)率較高，同時DCD陽性表達(dá)、sE-cadherin陰性表達(dá)均是乳腺癌患者預(yù)后不良的獨(dú)立危險因素。同時，本研究還就DCD、sE-cadherin單獨(dú)及聯(lián)合檢測對乳腺癌患者預(yù)后的預(yù)測價值進(jìn)行評估，DCD+sE-cadherin預(yù)測乳腺癌患者預(yù)后的AUC為0.887，分別高于二者單獨(dú)檢測。主要是因?yàn)閟E-cadherin為轉(zhuǎn)移抑制基因，存在于表皮組織中，對腫瘤細(xì)胞維持高黏附特性和抑制腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移侵襲發(fā)揮重要作用；sE-cadherin水平升高時能夠使細(xì)胞間的黏附增加，使腫瘤細(xì)胞難以遠(yuǎn)離原發(fā)灶，從而明顯抑制腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移，若sE-cadherin水平降低，則會促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、轉(zhuǎn)移，對患者的預(yù)后產(chǎn)生不良影響[18]。而DCD由人類汗液中分離，是一種天然活性的多肽物質(zhì)，具有抗細(xì)菌和真菌的活性，在腫瘤發(fā)生及人體天然免疫系統(tǒng)疾病、神經(jīng)系統(tǒng)疾病、妊娠相關(guān)疾病的病理生理過程中發(fā)揮作用，可通過ERBB信號通路促進(jìn)乳腺癌的發(fā)生發(fā)展[19]。因此DCD、sE-cadherin水平變化可作為乳腺癌診斷、治療及預(yù)后評估的生物標(biāo)志物。

綜上所述，乳腺癌組織中DCD的陽性表達(dá)率較高，sE-cadherin的陽性表達(dá)率較低，二者聯(lián)合檢測對乳腺癌患者的預(yù)后評估的預(yù)測價值較高。