謝秉湘，朱環(huán)，張麗萍，李志梅

溫州市食品藥品檢驗(yàn)科學(xué)研究院，浙江 溫州 325000

通便靈膠囊是由番瀉葉、當(dāng)歸、肉蓯蓉組成的中藥成方制劑，具有瀉熱導(dǎo)滯，潤(rùn)腸通便的功效，用于熱結(jié)便秘，長(zhǎng)期臥床便秘，一時(shí)性腹脹便秘，老年習(xí)慣性便秘［1］。該品種屬于甲類非處方藥，臨床應(yīng)用較廣。但其檢測(cè)指標(biāo)單一，大部分標(biāo)準(zhǔn)只包含性狀、鑒別和檢查項(xiàng)目，個(gè)別標(biāo)準(zhǔn)包含了番瀉苷、大黃酸或阿魏酸的含量測(cè)定。近年來(lái)，為提高通便靈膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，出現(xiàn)了許多質(zhì)量控制方面的研究論文，已有多位研究者建立了紫外、高效液相色譜法（HPLC）等含量測(cè)定方法［2-6］，以及更為深入的指紋圖譜和模式分析方法［7-8］。肉蓯蓉具有補(bǔ)腎陽(yáng)、益精血、潤(rùn)腸通便的功效［9］，是該制劑的重要組成部分，但鮮有對(duì)肉蓯蓉的成分進(jìn)行控制的研究方法，無(wú)法全面評(píng)價(jià)該制劑質(zhì)量。本研究依據(jù)《衛(wèi)生部中藥成方制劑》第七冊(cè)及其他法定標(biāo)準(zhǔn)對(duì)市場(chǎng)上收集到的45 批樣品進(jìn)行了全項(xiàng)目檢驗(yàn)，并采用HPLC 法測(cè)定該制劑中肉蓯蓉有效成分松果菊苷的含量，為市售通便靈膠囊的質(zhì)量評(píng)價(jià)提供依據(jù)。

1 材料

1.1 實(shí)驗(yàn)樣品

通便靈膠囊來(lái)源見(jiàn)表1，共45 批次，來(lái)自15個(gè)藥品生產(chǎn)廠家。

表1 45個(gè)批次的通便靈膠囊來(lái)源

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑

大黃酸（批號(hào)110757-201607，純度99.3%），阿魏酸（批號(hào)110773-201915，純度99.4%），松果菊苷（批號(hào)111670-201907，純度91.8%）。對(duì)照品均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院，甲醇為色譜純，水為超純水，其余試劑為分析純。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器

Agilent 1260 高效液相色譜儀-G1314F 紫外檢測(cè)器（安捷倫科技有限公司）；XS205DU 十萬(wàn)分之一電子分析天平（瑞士梅特勒-托利多儀器有限公司）；DHG-9091A 電熱恒溫干燥箱（上海一恒科學(xué)儀器有限公司）；ZB-1E 智能崩解儀（天津市天大天發(fā)科技有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 市售通便靈膠囊質(zhì)量考察

45 批次樣品按標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)（此次研究共涉及5 個(gè)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)）全部合格，具體數(shù)據(jù)見(jiàn)表2。

表2 樣品標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)結(jié)果匯總表

2.2 松果菊苷的含量測(cè)定

2.2.1 色譜條件和方法 參考本課題組前期實(shí)驗(yàn)方法［8］，使用太瑋科技JADE-PAK ODS 色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），以甲醇為流動(dòng)相A，以0.1%甲酸溶液為流動(dòng)相B，按表3 梯度洗脫；流速1.0 mL/min；柱溫30 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)為340 nm；進(jìn)樣量20 μL。

表3 流動(dòng)相梯度洗脫表

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備 取松果菊苷對(duì)照品適量，精密稱定，加50%甲醇制成每1 mL 含14.337 μg 的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.2.3 供試品溶液的制備 取樣品內(nèi)容物2.0 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50 mL，密塞，稱定重量，超聲處理30 min，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.2.4 線性關(guān)系考察 精密稱取松果菊苷對(duì)照品適量，加50%甲醇制成質(zhì)量濃度為286.742 μg/mL 的對(duì)照品儲(chǔ)備溶液，分別用50%甲醇稀釋至濃度為儲(chǔ)備溶液的1%，2.5%，5%，10%，25%，50%，100%。吸取稀釋液各20 μL，進(jìn)樣，記錄色譜圖，以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（X，μg/mL），峰面積為縱坐標(biāo)（Y）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程、線性范圍及相關(guān)系數(shù)，見(jiàn)表4，結(jié)果表明線性關(guān)系良好。

表4 松果菊苷回歸方程

2.2.5 精密度試驗(yàn) 精密稱取同一批樣品內(nèi)容物2.0 g，按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，并按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件，連續(xù)重復(fù)進(jìn)樣6 次，測(cè)定峰面積。松果菊苷的峰面積RSD 為1.0%，表明儀器精密度良好。典型高效液相色譜圖，見(jiàn)圖1。

圖1 高效液相色譜圖：A.對(duì)照品溶液；B.樣品溶液

2.2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批樣品內(nèi)容物6 份，各2.0 g，精密稱定，按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，并按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，測(cè)定峰面積并計(jì)算含量。結(jié)果松果菊苷的含量RSD 為1.2%，表明實(shí)驗(yàn)方法重復(fù)性良好。

2.2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密稱取同一批樣品內(nèi)容物2.0 g，按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，并按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件分別于0，2，4，8，12 h 進(jìn)樣，測(cè)定峰面積。結(jié)果松果菊苷峰面積RSD 為1.0%，表明通便靈膠囊供試品溶液在12 h 內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.8 回收率試驗(yàn) 取同一批樣品內(nèi)容物（溫州海鶴藥業(yè)有限公司，批號(hào)：20191001）6 份，各1.0 g，精密稱定，精密加入松果菊苷對(duì)照品溶液（濃度為230.72 μg/mL）2.0 mL，按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，計(jì)算加樣回收率。結(jié)果，通便靈膠囊中松果菊苷的平均回收率為102.1%，RSD 為0.8%。

2.3 樣品含量測(cè)定

取45 批次樣品，按照“2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，依法測(cè)定，含量測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表5，各廠家之間的比對(duì)見(jiàn)圖2。

表5 45批次樣品中松果菊苷含量測(cè)定結(jié)果（mg/g）

圖2 不同廠家松果菊苷含量比較圖

3 分析

3.1 限度擬定

因現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)中缺乏肉蓯蓉的質(zhì)量控制項(xiàng)目，為全面評(píng)價(jià)通便靈膠囊的質(zhì)量現(xiàn)狀，本研究抽取了15家生產(chǎn)廠家45 批次樣品用以擬定松果菊苷的含量限度。在通便靈膠囊處方中，肉蓯蓉用量為150 g制成1 000 粒，采用上述松果菊苷含量測(cè)定方法對(duì)45 批次樣品進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果松果菊苷平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2.006 9 mg/g?？紤]到肉蓯蓉在處方中用量較少，且煎煮后入藥，故本次限度按轉(zhuǎn)移率70%計(jì)算，暫定通便靈膠囊中松果菊苷的限度為1.405 mg/g。

3.2 質(zhì)量情況分析

按本研究擬定的限度，45 批次樣品中，松果菊苷含量低于擬定限度的共有17 個(gè)批次，所占百分比為37.78%，共涉及9 家生產(chǎn)廠家。并且同一生產(chǎn)企業(yè)含量的波動(dòng)較大，如廠家H，最高位3.468 5 mg/g，最低僅為0.945 2 mg/g，相差3.7 倍。此外企業(yè)間的含量差距最高達(dá)十倍以上（廠家I 和L），肉蓯蓉作為貴重藥材投料，更應(yīng)該精準(zhǔn)把握，而本研究數(shù)據(jù)顯示這些企業(yè)在原材料把控，投料方面和生產(chǎn)工藝方面可能存在問(wèn)題。

用現(xiàn)有的法定標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)45 批樣品均為合格，而通過(guò)松果菊苷含量測(cè)定發(fā)現(xiàn)各廠家之間樣品存在巨大差異，這可能會(huì)導(dǎo)致通便靈膠囊藥效的不穩(wěn)定性；這跟通便靈膠囊檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)過(guò)于簡(jiǎn)單不無(wú)關(guān)系。為了確保藥品質(zhì)量以及減少各廠家產(chǎn)品間的差異，建議在標(biāo)準(zhǔn)中增加松果菊苷的含量測(cè)定。