龔 方，劉小菁，康秋燕，汪 穎，李兆杰,

（1.中共青島西海岸新區(qū)工委軍民融合辦，山東青島 266000；2.威海職業(yè)學(xué)院，山東威海 264210；3.青島農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，山東青島 266000）

食源性致病菌和真菌毒素都是引起食源性疾病的主要風(fēng)險(xiǎn)因素[1]，Hermann 等[2]整理了2015 到2018 年的食品安全綜述文章，發(fā)現(xiàn)關(guān)于致病菌和真菌毒素的綜述研究位居常見風(fēng)險(xiǎn)因素排行的前兩位，在食品安全研究中處在首要位置，也是各國食品安全管理部門重點(diǎn)關(guān)注和監(jiān)管的檢測項(xiàng)目，因此，非常有必要建立有效、準(zhǔn)確的食源性致病菌和真菌的分類識別方法以實(shí)現(xiàn)快速檢測，減少其帶來的風(fēng)險(xiǎn)[3]。

近年來，光譜技術(shù)越來越多地應(yīng)用于食品檢測的多個(gè)領(lǐng)域[4]，包括傅立葉變換紅外光譜（FT-IR）[5]、拉曼光譜（Raman spectroscopy）[6]、傅立葉變換近紅外光譜（Fourier tranform near infrared spectroscopy FT-NIR）[7]等，其中，F(xiàn)T-IR 技術(shù)應(yīng)用較早，研究也更為廣泛。早在1984 年，Naumanan 等[8]提出了該技術(shù)應(yīng)用在微生物種類鑒定方面的可能，并研究了種間水平的鑒定方法[9]。FT-IR 技術(shù)主要是以完整細(xì)胞的FT-IR 光譜特殊指紋區(qū)為依據(jù)，反映不同菌種蛋白質(zhì)、核酸等物質(zhì)特征上的區(qū)別[10]，采集形成由多種標(biāo)準(zhǔn)菌株光譜構(gòu)建成的光譜數(shù)據(jù)庫，結(jié)合化學(xué)計(jì)量分析方法，建立有效的聚類模型，實(shí)現(xiàn)微生物種間的分類鑒定，一般包括樣品制備、光譜采集、譜圖處理、數(shù)據(jù)分析、方法驗(yàn)證等步驟[11]。FT-IR 常見應(yīng)用于不同細(xì)菌的分類研究：代群威等[12]通過譜圖分析，驗(yàn)證了FT-IR 技術(shù)在人體細(xì)菌與土壤細(xì)菌鑒定中的應(yīng)用，慈云祥等[13]對酵母菌、細(xì)菌等微生物的分類進(jìn)行了初步光譜分析，王若男等[14]研究了脂環(huán)酸芽孢桿菌等不同桿菌的種間分類鑒定，Lefier 等[15]探索了FT-IR 結(jié)合CVA 分析對單核細(xì)胞增生李斯特菌進(jìn)行了亞種分類的研究，并分析了處理方法、培養(yǎng)時(shí)間、溫度等不同因素對鑒定結(jié)果的影響，相對來說，針對真菌分類的研究并不多見。

本文創(chuàng)新性地利用FT-IR 技術(shù)構(gòu)建易造成食品污染的13 種常見致病菌和12 種常見真菌導(dǎo)數(shù)譜數(shù)據(jù)庫，結(jié)合數(shù)據(jù)分析模型，建立基于FT-IR 技術(shù)的菌種鑒定分類方法，對傅立葉紅外光譜技術(shù)在微生物鑒定領(lǐng)域的應(yīng)用是一個(gè)新的擴(kuò)展，也為微生物食品安全風(fēng)險(xiǎn)的快速檢測提供新的方法支撐。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

1.1.1 標(biāo)準(zhǔn)菌株 蠟樣芽孢桿菌（Bacillus cereus）ATCC 12826、大腸埃希氏菌O157:H7（Escherichia coliO157:H7）ATCC 43895、金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）ATCC 12600、表皮葡萄球菌（Staphylococcus epidermidis）ATCC 12228、大腸桿菌（Escherichia coli）ATCC 10536、阪崎腸桿菌（Enterobacter sakazakii）ATCC 51329、宋內(nèi)氏志賀氏菌（Shigella sonnei）ATCC 25931、單核細(xì)胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes）ATCC 19114、弗勞地檸檬酸桿菌（Citrobacter freundii）ATCC 10787、鼠傷寒沙門氏菌（Salmonella typhimurium）ATCC 14028、產(chǎn)氣腸桿菌（Enterobacter aerogenes）ATCC 49701、陰溝腸桿菌（Enterobacter cloacae）ATCC 13047 美國模式培養(yǎng)物集存庫（ATCC）；腸炎沙門氏菌（Salmonella enteritidis）CICC 21482 工業(yè)微生物菌種保藏中心（CICC）；禾谷鐮孢霉（Fusarium graminearum，F(xiàn).graminearum）CGMCC 3.4733、棲土曲霉（Aspergillus terricola，A.terricola）CGMCC 3.3557、黃暗青 霉（Penicillium citreonigrum，P.citreonigrum）CGMCC 3.5694、黃曲霉（Aspergillus flavus，A.flavus）CGMCC 3.6434、寄生曲霉（Aspergillus parasiticus，A.parasiticus）CGMCC 3.6156、桔灰青霉（Penicillium aurantiogriseum，P.aurantiogriseum）CGMCC 3.5691、擬康氏木霉（Trichoderma pseudokoningii，T.pseudokoningii）CGMCC 3.3002、土生鏈孢霉（Alternaria humicola，A.humicola）CGMCC 3.3907、鮮綠青 霉（Penicillium viridicatum，P.viridicatum）CGMCC 3.5690、煙曲霉（Aspergillus funigatus，A.funigatus）CGMCC 3.6452、雜色曲霉（Aspergillus versicolor，A.versicolor）CGMCC 3.6410 中國普通微生物菌種保藏管理中心（CGMCC）；茄病鐮刀菌（Fusarium solani，F(xiàn).solani）CPCC 460008 中國藥用微生物菌種保藏中心（CPCC）。

1.1.2 試劑與儀器 冷凍鮐鲅魚1.5 kg、辣椒粉1 kg市場購買；營養(yǎng)肉湯、EMB 平板、BS 平板、XLD平板、Baird-Parker 瓊脂和血平板、PDA 平板 北京陸橋生物科技有限公司，按說明書配制；無水乙醇分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；超純水 電阻18.2 MΩ，實(shí)驗(yàn)室自制。

VERTEX70 傅立葉變換紅外光譜儀 德國布魯克公司；UV1800A 核酸蛋白分析儀 Bio-rad 公司；CR22G III 離心機(jī) 日本日立公司；IH250 恒溫恒濕培養(yǎng)箱、干燥箱 IRM 公司；ZnSe 窗片（透過波長7800～440 cm?1、透過率大于68%、直徑25 mm、厚度2 mm） 筱曉（上海）光子。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 樣品制備

1.2.1.1 細(xì)菌樣品制備 對蠟樣芽孢桿菌（Bacillus cereus）ATCC 12826 等13 種致病菌，從?70 ℃各挑取一環(huán)分別接種于營養(yǎng)肉湯中，（36±1）℃靜置培養(yǎng)18～24 h，備用。

各菌挑取活化肉湯培養(yǎng)物一環(huán)，接種于100 mL營養(yǎng)肉湯中，（36±1）℃、180 r/min 培養(yǎng)18～24 h，用核酸蛋白分析儀測定并記錄菌液濃度[16]，分別吸取培養(yǎng)物1 mL，5000×g 離心5 min，無菌生理鹽水和超純水懸浮洗滌各兩次，50 μL 超純水懸浮混勻。吸取不同稀釋度的菌懸液10 μL 于ZnSe 窗片中心，置于45 ℃干燥箱中烘干，得到干燥菌斑。每個(gè)菌株進(jìn)行10 次試驗(yàn)，每次3 個(gè)重復(fù)。

1.2.1.2 真菌樣品制備 對禾谷鐮孢霉（Fusarium graminearum，F(xiàn).graminearum）CGMCC 3.4733 等12 種真菌，將菌種接種到馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA）上進(jìn)行活化，28 ℃培養(yǎng)3～5 d，備用。

挑取各菌活化培養(yǎng)物轉(zhuǎn)到新的PDA 平板上，（28±1）℃靜置培養(yǎng)5 d。待菌絲充足，刮下菌絲置于1 mL 無菌生理鹽水中，5000×g 離心5 min 棄上清，無菌生理鹽水和超純水懸浮洗滌各兩次，50 μL純水懸浮混勻。吸取不同稀釋度的菌懸液10 μL 于ZnSe 窗片置于45 ℃干燥箱得到干燥菌斑[17]。每個(gè)菌株進(jìn)行6 次試驗(yàn)，每次3 個(gè)重復(fù)。

1.2.2 光譜采集 制作好的ZnSe 窗片置于光譜儀上采集光譜信息，參數(shù)設(shè)置為：波段范圍4000～500 cm?1[18]，分辨率4 cm?1，自動扣除大氣背景，掃描次數(shù)為64 次，累計(jì)求平均[19]。

1.2.3 加標(biāo)驗(yàn)證

1.2.3.1 細(xì)菌加標(biāo)驗(yàn)證

a 供試樣品制備：取冷凍鮐鲅魚平均分為3 份，每份500 g，（121±1）℃高溫滅菌15 min，得到無菌鮐鲅魚，剪碎均質(zhì)后向其中分別添加5×102CFU/mLE.coliATCC 10536、S.enteritidisCICC 21482、S.aureusATCC 12600 標(biāo)準(zhǔn)菌株溶液各10 mL，攪拌混勻，備用。

b 細(xì)菌培養(yǎng)：供試樣品每份稱取25 g，分別按照大腸桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌選擇培養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行增菌培養(yǎng)。增菌后的培養(yǎng)液濃度盡量控制E.coli的OD600在0.85 左右，S.enteritidi的OD600在0.7左右，S.aureus的OD600在0.9 左右。

c 硒化鋅（ZnSe）窗片的制作：方法同1.2.1.1。

d 光譜采集：分別采集各菌FT-IR 光譜，光譜采集參數(shù)同1.2.2。

1.2.3.2 真菌加標(biāo)驗(yàn)證

a 供試樣品制備：取辣椒粉平均分為2 份，每份500 g，（121±1）℃高溫滅菌15 min，得到無菌辣椒粉，用無菌小鐵勺分別將培養(yǎng)好的A.flavusCGMCC 3.6434 和F.graminearumCGMCC 3.4733 菌絲從培養(yǎng)基上刮下，制作菌懸液添加至無菌辣椒粉中，攪拌混勻，冷凍備用。

b 真菌培養(yǎng)：稱取供試?yán)苯贩蹣悠?5 g 均質(zhì)于225 mL 無菌超純水中，分別吸取1 mL 樣品勻液于馬鈴薯葡萄糖瓊脂平板中，倒置（28±1）℃培養(yǎng)5 d。

c 硒化鋅（ZnSe）窗片的制作：方法同1.2.1.2。

d 光譜采集：分別采集各菌FT-IR 光譜，光譜采集參數(shù)同1.2.2。

1.3 數(shù)據(jù)處理

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)菌株光譜處理和數(shù)據(jù)分析 用VERTEX70自帶的掃描分析軟件OPUS 6.5 軟件進(jìn)行透過率-吸光度轉(zhuǎn)化、基線校正[20]，對波數(shù)范圍光譜一階導(dǎo)數(shù)（平滑點(diǎn)選擇17 點(diǎn)）運(yùn)算得到導(dǎo)數(shù)譜后做矢量歸一處理，將歸一化后的導(dǎo)數(shù)譜，轉(zhuǎn)化為excel 數(shù)據(jù)格式。

將1.2.1.1 處理后的13 種細(xì)菌977.9～1805.3 cm?1波數(shù)范圍光譜數(shù)據(jù)分別導(dǎo)入Matlab 6.5 和Statistica 6.0 軟件，分別得到13 種致病菌導(dǎo)數(shù)譜的HCA 分布圖和PCA 分布圖。

將1.2.1.2 處理后的12 種真菌900～1800 cm?1和2800～3700 cm?1波數(shù)范圍光譜數(shù)據(jù)分別導(dǎo)入Matlab 6.5 和Statistica 6.0 軟件，分別得到12 種真菌導(dǎo)數(shù)譜的HCA 分布圖和PCA 分布圖。

1.3.2 加標(biāo)驗(yàn)證數(shù)據(jù)分析 將可疑待測菌E.coli、S.enteritidi、S.aureus977.9～1805.3 cm?1波數(shù)范圍光譜數(shù)據(jù)與1.3.1 構(gòu)建的13 種致病菌光譜信息數(shù)據(jù)庫合并，選擇HCA 分析方法進(jìn)行聚類分析，得到待測菌的聚類結(jié)果。

將可疑待測菌A.flavus和F.graminearum900～1800 cm?1和2800～3700 cm?1波數(shù)范圍光譜數(shù)據(jù)分別與1.3.1 構(gòu)建的12 種真菌的光譜信息數(shù)據(jù)庫合并，選擇HCA 分析方法進(jìn)行聚類分析，得到待測菌的聚類結(jié)果。

2 結(jié)果與分析

2.1 細(xì)菌濃度

培養(yǎng)18～24 h 后，根據(jù)核酸蛋白儀測定的結(jié)果，各菌種的吸光值及濃度見表1。

表1 細(xì)菌OD600 和濃度Table 1 Value of OD600 and concentration of bacteria

2.2 光譜導(dǎo)數(shù)譜數(shù)據(jù)庫的建立

2.2.1 細(xì)菌光譜數(shù)據(jù)庫的建立 對各菌種的導(dǎo)數(shù)譜取平均，得到不同菌種的平均光譜，見圖1。在圖示波數(shù)范圍內(nèi)，各菌的峰形、峰位以及峰的數(shù)量差距不大，僅憑譜圖無法區(qū)別各菌種之間的差異，需建立光譜數(shù)據(jù)庫借助數(shù)據(jù)分析和化學(xué)計(jì)量學(xué)運(yùn)算進(jìn)行分析。

圖1 13 種致病菌平均導(dǎo)數(shù)譜Fig.1 Average FT-IR spectral derivatives of 13 species of pathogenic bacteria

13 種常見致病菌FT-IR 光譜數(shù)據(jù)庫的建立：根據(jù)試驗(yàn)反復(fù)驗(yàn)證結(jié)果，本文確定的光譜采集波數(shù)范圍為4000～500 cm?1，用于數(shù)據(jù)分析的波數(shù)范圍為977.9～1805.3 cm?1。應(yīng)用OPUS 6.5 軟件對原始光譜進(jìn)行預(yù)處理得到導(dǎo)數(shù)譜，又對導(dǎo)數(shù)譜進(jìn)行了適量歸一化，建立了B.cereus、E.coliO157、S.aureus、S.epidermidis、E.sakazakii、S.sonnei、L.monocytogenes、C.freunddi、S.typhimurium、S.enteritidis、E.aerogenes、E.cloacae等13 種菌的FT-IR 導(dǎo)數(shù)譜數(shù)據(jù)庫。

2.2.2 真菌光譜數(shù)據(jù)庫的建立 對采集并處理后的各菌種的FT-IR 光譜取平均，得到各菌種的平均光譜，見圖2。由圖可見，經(jīng)基線校正和矢量歸一化后，光譜間的一些差異可用肉眼區(qū)分。在選擇的900～1800 cm?1和2800～3700 cm?1波數(shù)范圍內(nèi)，根據(jù)12 個(gè)菌株FT-IR 光譜圖中吸收峰所表征的意義，可將其分為5 個(gè)具有差別的光譜特征區(qū)域分別是3700～2996 cm?1處、2996～2800 cm?1處、1800～1485 cm?1處、1485～1185 cm?1處、1185～900 cm?1處，這些不同的特征區(qū)域分別反映了真菌細(xì)胞不同化學(xué)物質(zhì)的伸縮振動帶，菌種不同，化學(xué)物質(zhì)含量和區(qū)域分布便會不同，能夠區(qū)別一定的菌種差異。盡管光譜的一些差異可通過肉眼鑒別，為了建立的方法更系統(tǒng)直觀，需要建立光譜數(shù)據(jù)庫進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

圖2 12 種真菌平均導(dǎo)數(shù)譜Fig.2 Average FT-IR spectral derivatives of 12 species of fungi

12 種常見真菌FT-IR 光譜數(shù)據(jù)庫的建立：應(yīng)用OPUS6.5 軟件對得到的原始光譜進(jìn)行轉(zhuǎn)化和基線校正，對12 種菌4000～600 cm?1波數(shù)范圍光譜進(jìn)行矢量歸一化處理，即建立了F.graminearum、A.terricola、P.citreonigrum、A.flavus、A.parasiticus、P.aurantiogriseum、T.pseudokoningii、A.humicola、P.viridicatum、A.funigatus、A.uersicolor、F.solani等12 種真菌的FT-IR 光譜數(shù)據(jù)庫。

2.3 PCA 和HCA 分析結(jié)果

2.3.1 PCA 分析結(jié)果 通過對13 種致病菌和12 種真菌的光譜數(shù)據(jù)進(jìn)行PCA 分析，發(fā)現(xiàn)不管用2 種主成分還是3 種主成分為聚類依據(jù)，均不能對菌種進(jìn)行較好聚類。分析其原因，理論上PCA 分析可以在不降低光譜差異的前提下，減少數(shù)據(jù)維數(shù)實(shí)現(xiàn)直觀呈現(xiàn)，但減少維數(shù)也使得對在多維空間能較好分類的數(shù)據(jù)點(diǎn)產(chǎn)生交叉或重疊，導(dǎo)致降維后不能準(zhǔn)確分類[21?23]，也說明PCA 方法在處理多維數(shù)據(jù)時(shí)并不具有優(yōu)勢。

2.3.2 HCA 分類結(jié)果 利用皮爾森積矩相關(guān)系數(shù)算法描繪樹狀分支圖，對13 種致病菌和12 種真菌的光譜數(shù)據(jù)進(jìn)行HCA 分析。如圖3 所示，13 種菌的樣本按照菌種準(zhǔn)確聚類，樣本間沒有出現(xiàn)交叉和重疊，證明該分析方法能夠?qū)D中各菌種較好聚類，實(shí)現(xiàn)種間分類的目的。圖4 是12 種真菌的光譜數(shù)據(jù)樹狀聚類分布圖，每個(gè)菌種的樣本均能夠歸為一類，實(shí)現(xiàn)種間的準(zhǔn)確分類。證明該方法可以適用于致病菌和真菌的菌種分類。

圖3 13 種常見致病菌 HCA 聚類樹狀圖Fig.3 HCA cluster results of FT-IR spectra of 13 species of pathogenic bacteria

同時(shí)，從圖4 可以看出，雖然每個(gè)真菌菌株紅外光譜的6 次重復(fù)都可正確地歸為一類，但真菌分類系統(tǒng)的層次等級不能在聚類分析圖中體現(xiàn)出來。例如，同屬于曲霉屬的5 個(gè)種黃曲霉、煙曲霉、棲土曲霉、雜色曲霉、寄生曲霉在第二層次“屬”的歸類中，未能同時(shí)歸于一類中。這一現(xiàn)象與光譜識別方法與傳統(tǒng)真菌分類方法依據(jù)不同有一定關(guān)系，傳統(tǒng)生物學(xué)方法依據(jù)的是形態(tài)學(xué)、細(xì)胞結(jié)構(gòu)等，而光譜方法主要通過識別細(xì)胞生物大分子的組成。

圖4 12 種真菌HCA 聚類樹狀圖Fig.4 HCA cluster results of FT-IR spectra of 12 species of fungi

2.4 加標(biāo)驗(yàn)證結(jié)果

分別向無菌鮐鲅魚樣品中添加可疑待測菌，驗(yàn)證所建立的13 種常見食源性致病菌的FT-IR 光譜數(shù)據(jù)庫及種間分類鑒定方法的準(zhǔn)確性，結(jié)果見圖5。由圖可見，樣品中的E.coli、S.enteritidi、S.aureus分別準(zhǔn)確聚類到相應(yīng)的菌種中，實(shí)現(xiàn)了對可疑待測菌的準(zhǔn)確鑒定。說明本文建立的光譜數(shù)據(jù)庫給可疑待測菌的種類鑒定提供了準(zhǔn)確的歸類依據(jù)，也說明FTIR 技術(shù)結(jié)合HCA 分析建立的致病菌菌種分類鑒定方法是可行的。

圖5 致病菌加標(biāo)驗(yàn)證結(jié)果Fig.5 The result of adding standard to verify pathogenic bacteria

通過向無菌辣椒粉樣品中添加可疑待測真菌，驗(yàn)證所建立的12 種真菌的FT-IR 光譜數(shù)據(jù)庫及種間分類鑒定方法的準(zhǔn)確性，結(jié)果見圖6。由圖可見，可疑待測真菌A.flavus和F.graminearum分別準(zhǔn)確聚類到數(shù)據(jù)庫中對應(yīng)的菌種，驗(yàn)證了方法的準(zhǔn)確性，說明本文建立的方法能夠?qū)崿F(xiàn)可疑待測真菌種類的鑒定，為常見真菌的菌種檢測提供了新的方法支撐。

圖6 真菌加標(biāo)驗(yàn)證結(jié)果Fig.6 The result of adding standard to verify suspected fungi

3 結(jié)論

FT-IR 技術(shù)簡單、快速、高效等優(yōu)點(diǎn)，使其在微生物分類鑒定方面的作用越來越得到重視，在成分檢測、性能比對、臨床醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域中的快速鑒定也得到了較多的研究[24?26]。傳統(tǒng)菌種鑒定方法操作繁瑣，需要進(jìn)行生化實(shí)驗(yàn)和血清學(xué)實(shí)驗(yàn)，檢測周期約需5～7 d甚至更長。相比于傳統(tǒng)生物學(xué)鑒定方法，本文建立的方法具有易操作、周期短、成本低等特點(diǎn)。從可疑菌落到檢測結(jié)果只需要幾分鐘，整個(gè)檢測過程僅需要2～3 d，檢測所用的試劑更少，主要耗材ZnSe 窗片可重復(fù)利用。本文使用的主成分分析（PCA）和聚類分析（HCA）是對光譜數(shù)據(jù)進(jìn)行描述的方法，都屬于化學(xué)計(jì)量學(xué)統(tǒng)計(jì)方法中的無監(jiān)督型法，即在未知確切分類的情況下進(jìn)行的數(shù)據(jù)分析[27]。其中，PCA 是在不降低差異同時(shí)減少維數(shù)，而后將綜合變量進(jìn)行比較后畫出散點(diǎn)圖[28]，HCA 是根據(jù)數(shù)據(jù)本身所具有的特征進(jìn)行歸類和內(nèi)在結(jié)構(gòu)分析，得到光譜簇間距離[29]。兩種不同方法的聚類結(jié)果各有優(yōu)勢，也受到采集參數(shù)、制備條件、種間差異等因素影響[30]，同時(shí)，一些研究也發(fā)現(xiàn)，應(yīng)用光譜方法對菌種進(jìn)行鑒定，其重復(fù)性受到包括培養(yǎng)條件、實(shí)驗(yàn)操作標(biāo)準(zhǔn)化、分析方法等因素的影響[31]，因此應(yīng)確保菌種培養(yǎng)參數(shù)、樣品制備以及光譜分析等與建立光譜數(shù)據(jù)庫的條件保持一致[32]。

本研究確定了常見食源性致病菌的977.9～1805.3 cm?1光譜分析靈敏區(qū)，真菌的3700～2996 cm?1、2996～2800 cm?1、1800～1485 cm?1、1485～1185 cm?1與1185～900 cm?1五個(gè)光譜分析靈敏區(qū)，獲得了分辨率高、重現(xiàn)性好的紅外譜圖，構(gòu)建光譜數(shù)據(jù)庫，通過HCA 分析將13 種細(xì)菌和12 種真菌直觀清楚地區(qū)分開來。從驗(yàn)證試驗(yàn)的結(jié)果來看，無論致病菌還是真菌，可疑待測菌均能聚類到各自對應(yīng)的菌種光譜數(shù)據(jù)庫中，驗(yàn)證了FT-IR 技術(shù)在微生物種間水平鑒定上的準(zhǔn)確性，拓展了FT-IR 技術(shù)結(jié)合化學(xué)計(jì)量學(xué)分析方法在微生物分類鑒定方面的應(yīng)用，對于開展食品中致病菌和真菌的快速檢測也具有實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。

研究中也發(fā)現(xiàn)了一些問題，例如，真菌的分類在屬間水平與傳統(tǒng)方法不同，鑒定結(jié)果的穩(wěn)定性還需要進(jìn)一步檢驗(yàn)。下一步，應(yīng)繼續(xù)開展將光譜識別應(yīng)用于微生物屬間、菌株間的方法研究，增加對未知待測菌株的鑒定研究，并與傳統(tǒng)檢測方法進(jìn)行全面比較分析，進(jìn)一步檢驗(yàn)方法的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性，使FT-IR 結(jié)合化學(xué)計(jì)量學(xué)應(yīng)用于微生物分類鑒定的方法研究更加系統(tǒng)完善。