魏玉萍，趙 巖，張 麗，王瓊瓊，蒲云峰，侯旭杰, ，宋麗軍,

（1.塔里木大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，新疆阿拉爾 843300；2.阿克蘇職業(yè)技術(shù)學(xué)院生物工程學(xué)院，新疆阿克蘇 843000）

肉蓯蓉（Cistanche tubulosa（Schrenk）.R.Wight）也稱寸蕓、大蕓、蓯蓉、地精等，列當(dāng)科寄生植物[1]，主要分布在我國(guó)內(nèi)蒙古、甘肅、新疆等干旱或半干旱地區(qū)。肉蓯蓉始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，有良好的藥用價(jià)值和滋補(bǔ)作用，被譽(yù)為“沙漠人參”，肉蓯蓉性溫，具有補(bǔ)腎益陽(yáng)、潤(rùn)腸通便的功效，可用于治療由于精血不足而引起的腎虛、月經(jīng)不暢、女性不孕、尿頻等[2]。現(xiàn)代藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，肉蓯蓉具有抗疲勞[3]、協(xié)調(diào)內(nèi)分泌[4]、延緩衰老[3]、降低肝損傷[5]、增強(qiáng)機(jī)體免疫力[6]、抗炎[7]、抗腫瘤[8]、防治腦缺血[9]等作用。其藥理活性主要源于其中所含的多種生物活性物質(zhì)，包括多糖、苯乙醇苷類、黃酮、多酚類、萜類、生物堿等[10?12]。

苯乙醇苷（Phenylethanoid glycosides，PhGs）是肉蓯蓉的主要活性成分之一[13]，主要成分為松果菊苷、毛蕊花糖苷、異毛蕊花糖苷和肉蓯蓉苷A 等[14?15]。研究發(fā)現(xiàn)，苯乙醇苷類化合物是肉蓯蓉發(fā)揮延緩衰老、提高興奮性、補(bǔ)腎益氣[4]、提高記憶力[16]、修復(fù)慢性肝損傷[17]、預(yù)防老年性癡呆[18]等生理活性的主要物質(zhì)。苯乙醇苷的提取方式主要有熱水回流法[19]、浸漬法[20]、微波輔助提取[21]和超聲輔助提取[22]等。對(duì)苯乙醇苷的提取，傳統(tǒng)有機(jī)溶劑提取研究較多，但存在耗時(shí)、提取效率低等問(wèn)題；微波輔助提取相較于傳統(tǒng)有機(jī)溶劑提取有更好的提取效果，但微波提取條件要求更高，不宜推廣應(yīng)用；超聲波輔助提取所需控制的提取條件要求較低，安全性較好且提取效率高，有廣泛的適用性，因此，本文選擇超聲波輔助提取技術(shù)。

本文以新疆管花肉蓯蓉為研究對(duì)象，采用響應(yīng)面法優(yōu)化超聲波輔助提取其苯乙醇苷類化合物的最佳工藝，進(jìn)一步采用高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromtography，HPLC）對(duì)提取物中的苯乙醇苷類化合物進(jìn)行定性定量分析，并研究了提取物對(duì)羥基自由基和DPPH 自由基清除能力，為新疆管花肉蓯蓉的精深加工提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

管花肉蓯蓉 于2020 年4 月15 日采自新疆和田洛浦縣，采集大小均勻（直徑5 cm 左右，長(zhǎng)度20 cm左右），無(wú)病蟲害及機(jī)械損傷的樣品，樣品經(jīng)切分并冷凍干燥，粉碎后過(guò)60 目篩，并于?18 ℃密封、避光保存?zhèn)溆茫患状?、乙腈、甲?均為色譜純，德國(guó)Merck公司；松果菊苷、毛蕊花糖苷（含量≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品）、抗壞血酸（VC，含量≥98%）、二苯基苦味?；诫禄杂苫―PPH?，含量≥98%）等試劑 北京索萊寶科技有限公司；如無(wú)特殊說(shuō)明以上試劑均為分析純。

KQ-50DB 型數(shù)控超聲波清洗器 昆山市超聲儀器有限公司；LGJ-25C 型冷凍干燥機(jī) 北京四環(huán)科學(xué)儀器廠有限公司；FW100 型高速萬(wàn)能粉碎機(jī)天津泰斯特儀器有限公司；D-SY96S 型全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀 山東競(jìng)道廣電科技有限公司；BK-FD10P 型高速冷凍離心機(jī) 廣州吉迪儀器有限公司；752S 型紫外分光光度計(jì) 上海棱光儀器有限公司；LC-20A 型高效液相色譜儀 日本島津公司；PDA 二極管陣列檢測(cè)器 日本島津公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 檢測(cè)方法的建立 取松果菊苷標(biāo)準(zhǔn)品20 mg，用甲醇定容至25.00 mL，得到苯乙醇苷儲(chǔ)備液（0.8 mg/mL），4 ℃保存?zhèn)溆?。取松果菊苷?chǔ)備液，將其稀釋10 倍，在波長(zhǎng)200～800 nm 范圍內(nèi)用紫外-分光光度計(jì)進(jìn)行全波長(zhǎng)的掃描[23?24]，得到波長(zhǎng)為后續(xù)實(shí)驗(yàn)測(cè)定波長(zhǎng)。

分別吸取不同濃度的松果菊苷標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（0.25、0.50、1.00、2.00、2.50 和3.0 0 mL）置于5 mL容量瓶中，用甲醇定容并混勻，得到不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液（0.04、0.08、0.16、0.32、0.40 和0.48 mg/mL）。以甲醇為空白，330 nm 測(cè)得吸光度為y 值，濃度為x 值，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線[25]。

1.2.2 苯乙醇苷提取及得率計(jì)算 稱取5.00 g 肉蓯蓉粉末，加200 mL 50%乙醇水溶液于錐形瓶中。浸泡約20 min 后40 ℃超聲提取30 min，提取液4000 r/min 離心10 min 后取25 mL 上清液，旋蒸至近干，甲醇復(fù)溶后定容至25 mL。

苯乙醇苷得率得測(cè)定，取1.00 mL 樣品提取液按照1.2.1 的方法，對(duì)樣品溶液吸光度進(jìn)行測(cè)定，然后根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出總苯乙醇苷的得率。總苯乙醇苷的得率計(jì)算公式[26]。

式中：W 表示總苯乙醇苷的得率，mg/g；C 表示計(jì)算通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)出的溶液質(zhì)量濃度，mg/mL；V 表示溶液的體積，mL；m 表示肉蓯蓉取樣量，g.

1.2.3 超聲輔助提取肉蓯蓉苯乙醇苷工藝優(yōu)化

1.2.3.1 單因素實(shí)驗(yàn) 分別研究超聲溫度（30、35、40、45、50 ℃）、料液比（1:20、1:30、1:40、1:50、1:60 g/mL）、乙醇濃度（30%、40%、50%、60%、70%）、超聲時(shí)間（20、30、40、50、60 min）等條件對(duì)肉蓯蓉中苯乙醇苷得率的影響。在除了單獨(dú)研究的自變量因素外，其他條件設(shè)為固定值：乙醇濃度50%，料液比1:40 g/mL，超聲溫度40 ℃，超聲時(shí)間30 min。

1.2.3.2 Box-Behnken 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，選擇超聲溫度（A）、料液比（B）、乙醇濃度（C）為自變量，苯乙醇苷得率（mg/g）為響應(yīng)值（Y）進(jìn)行響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)，試驗(yàn)設(shè)計(jì)的因素和水平如表1所示。

表1 響應(yīng)面試驗(yàn)的因素與水平設(shè)計(jì)Table 1 Factors and levels design of response surface test

1.2.4 HPLC 法測(cè)定苯乙醇苷類化合物 精密稱取松果菊苷、毛蕊花糖苷標(biāo)準(zhǔn)品各20 mg，加甲醇定容至25.00 mL 得到混合對(duì)照品儲(chǔ)備液。分別吸取儲(chǔ)備液0.25、0.50、1.00、2.00、2.50 和3.00 mL 置于5 mL 容量瓶中，用甲醇定容并混勻，得到不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液（0.04、0.08、0.16、0.32、0.40 和0.48 mg/mL），用0.45 μm 濾膜過(guò)濾即得，4 ℃保存，備用。

通過(guò)響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)得到苯乙醇苷最佳提取工藝并在此條件下進(jìn)行提取，將提取液離心后取25 mL上清液，旋蒸至近干，25 mL 甲醇復(fù)溶，用0.45 μm濾膜過(guò)濾即得，4 ℃保存，備用。

根據(jù)劉伯言[25]的方法，采用恒譜生USHA C18色譜柱（250 mm×4.6 mm,5 μm ），流速0.8 mL/min；流動(dòng)相A：乙腈；流動(dòng)相B：甲酸溶液（0.5%，v/v）；洗脫程序：0～23 min，14%～17%A；24～35 min，17%～20%A；36～45 min，20%A；檢測(cè)波長(zhǎng)：330 nm；柱溫30 ℃；進(jìn)樣量10 μL；采用外標(biāo)法定量，含量以mg/g DW 表示。

1.2.5 苯乙醇苷粗提物體外抗氧化性的測(cè)定

1.2.5.1 羥基自由基清除能力的測(cè)定 參照Wang等[27]的方法略加修改。分別取50 μL 不同濃度（5、15、25、35、45 mg/mL）的肉蓯蓉苯乙醇苷提取液加入96 孔板中，分別加入50 μL 濃度均為6 mmol/L的硫酸亞鐵溶液、水楊酸-乙醇和雙氧水溶液，混勻后于37 ℃靜置30 min。在510 nm 處測(cè)定其吸光度。以相同濃度的VC溶液為陽(yáng)性對(duì)照。根據(jù)公式（2）計(jì)算羥基自由基清除率：

式中：A0為蒸餾水代替樣液的吸光度；A1為樣液的吸光度；A2為蒸餾水代替雙氧水的吸光度。

1.2.5.2 DPPH 自由基清除能力的測(cè)定 參考Baba等[28]的方法，分別取50 μL 不同濃度（0.1、0.25、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、10 mg/mL）的肉蓯蓉苯乙醇苷提取液加入96 孔板中，分別加入150 μL 濃度為1 mmol/L 的DPPH?乙醇溶液，混勻后于37 ℃下避光放置30 min。在517 nm 處測(cè)定其吸光度；以相同濃度的VC溶液為陽(yáng)性對(duì)照。計(jì)算公式（3）：

式中：A1為蒸餾水代替樣品的吸光度值；A2代表樣品的吸光度值。

1.3 數(shù)據(jù)處理

所有實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次，數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（SD）表示，利用Design-Expert 13.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行響應(yīng)面優(yōu)化分析，數(shù)據(jù)分析處理采用SPSS17.0 進(jìn)行。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

利用紫外-分光光度計(jì)對(duì)松果菊苷標(biāo)準(zhǔn)品溶液進(jìn)行全波長(zhǎng)的掃描，最終在波長(zhǎng)330 nm 處獲得最大吸收峰（如圖1），因此，后續(xù)波長(zhǎng)的測(cè)定選擇330 nm。不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液在330 nm 處測(cè)得吸光度為y 值，濃度為x 值，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，經(jīng)過(guò)線性回歸得到松果菊苷標(biāo)準(zhǔn)曲線為：y=8.9339 x+0.0223（R2=0.9993）。由回歸系數(shù)可知，松果菊苷在0～0.48 mg/mL 范圍內(nèi)線性范圍良好。

圖1 松果菊苷的光譜掃描圖Fig.1 UV absorption spectra of echinacoside

2.2 單因素實(shí)驗(yàn)

2.2.1 超聲溫度對(duì)苯乙醇苷得率的影響 如圖2 所示，超聲溫度達(dá)到40 ℃前，苯乙醇苷的得率不斷增加；當(dāng)超聲溫度達(dá)到40 ℃，苯乙醇苷的得率達(dá)到峰值，為13.87 mg/g；當(dāng)超聲溫度大于40 ℃時(shí)，苯乙醇苷得率逐漸下降。分析原因?yàn)殡S著溫度的不斷升高，乙醇溶液的粘性降低，分子的熱運(yùn)動(dòng)速度逐漸加快[22]，苯乙醇苷的得率也隨之增加；而苯乙醇苷成分熱穩(wěn)定較低，高溫易導(dǎo)致部分熱敏性苯乙醇苷類化合物降解[29]。王麗楠等[30]考察了不同初加工溫度對(duì)肉蓯蓉中苯乙醇苷的影響，研究發(fā)現(xiàn)隨著溫度的升高，苯乙醇苷含量有所下降，這一結(jié)果與本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果相同，故后續(xù)響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)溫度范圍為35～45 ℃。

圖2 超聲溫度對(duì)苯乙醇苷得率的影響Fig.2 Effect of ultrasonic temperature on the yield of PhGs

2.2.2 料液比對(duì)苯乙醇苷得率的影響 如圖3 所示，料液比達(dá)到1:40 g/mL 之前，苯乙醇苷的得率不斷增加；當(dāng)料液比達(dá)到1:40 g/mL，苯乙醇苷的得率達(dá)到峰值13.745 mg/g 當(dāng)料液比大于1:40 g/mL，苯乙醇苷得率逐漸下降。本文實(shí)驗(yàn)結(jié)果與劉麗莎[31]的研究結(jié)果一致，提取過(guò)程中干燥的物料吸水，料液比過(guò)低吸水不完全，影響提取效率，但料液比過(guò)高時(shí)，提取效果并不明顯，甚至造成了溶劑的浪費(fèi)，隨著料液比的增加，苯乙醇苷的得率不斷增大；但隨著料液比的不斷增加，溶劑用量不斷增加，超聲波與肉蓯蓉粉末的相互作用減弱[32]，因此，后續(xù)響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)料液比范圍是1:30～1:50 g/mL。

圖3 料液比對(duì)苯乙醇苷得率的影響Fig.3 Effect of solid-liquid ratio on the yield of PhGs

2.2.3 乙醇濃度對(duì)苯乙醇苷得率的影響 如圖4 所示，在乙醇濃度達(dá)到50%之前，苯乙醇苷的得率不斷增加；當(dāng)乙醇濃度達(dá)到50%，苯乙醇苷的得率達(dá)到峰值，為13.64 mg/g；當(dāng)乙醇濃度大于50%時(shí)，苯乙醇苷的得率逐漸下降。劉伯言[25]利用超聲波輔助提取肉蓯蓉苯乙醇苷，其優(yōu)化結(jié)果顯示在乙醇濃度為52%時(shí)得率最高，此結(jié)果與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果相符。這是因?yàn)椴煌瑵舛鹊囊掖季哂胁煌臉O性[33]，濃度過(guò)低會(huì)導(dǎo)致苯乙醇苷類化合物提取不充分，過(guò)高則會(huì)溶解出更多物質(zhì)，影響得率。綜合考慮，50%的乙醇濃度得率最佳，故后續(xù)響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)乙醇濃度范圍為40%～60%。

圖4 乙醇濃度對(duì)苯乙醇苷得率的影響Fig.4 Effect of ethanol concentration onthe yield of PhGs

2.2.4 超聲時(shí)間對(duì)苯乙醇苷得率的影響 如圖5 所示，30 min 之前隨著時(shí)間的增加得率明顯提高，30～40 min 時(shí)得率略有升高，但40 min 之后得率又稍有下降。這是因?yàn)槌晻r(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致溫度升高，對(duì)苯乙醇苷的結(jié)構(gòu)造成一定程度地破壞而影響了提取效率。30～40 min 時(shí)得率雖稍有提高但差距不大，綜合考慮，后續(xù)響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)不再選取此因素。

圖5 超聲時(shí)間對(duì)苯乙醇苷得率的影響Fig.5 Effect of ultrasonic time on the yield of PhGs

2.3 響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)

2.3.1 Box-Behnken 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果 選擇乙醇溶液作為超聲提取溶劑，根據(jù)單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果，研究三個(gè)變量之間的交互作用，變量的選擇為：超聲溫度、料液比、乙醇濃度，響應(yīng)值為苯乙醇苷得率。Box-Behnken 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果Table 2 Response surface design and results

2.3.2 回歸方程方差分析及方差分析 根據(jù)上述結(jié)果，采用Design-Expert 13.0 軟件建立的二次回歸多元方程如下：Y=14.45+0.1376A+0.1038B+0.2150C+0.1225AB?0.2250AC+0.2100BC?0.7398A2?0.4598 B2?1.05C2，可以看出方程的每個(gè)二次項(xiàng)的系數(shù)都為負(fù)數(shù)，所以該方程存在最大值。

由表3 可知，該模型極顯著（F值為71.50，P＜0.0001），模型的失擬項(xiàng)不顯著（F=2.80，P=0.1727）。各項(xiàng)顯著性因素統(tǒng)計(jì)分析表明，其顯著性大小順序?yàn)椋篊＞A＞B，即乙醇濃度＞超聲溫度＞料液比，C、AC、A2、B2、C2對(duì)肉蓯蓉苯乙醇苷得率影響極顯著（P＜0.01），A、B、BC 對(duì)肉蓯蓉苯乙醇苷得率影響顯著（P＜0.05）。模型的決定系數(shù)R2=0.9892，說(shuō)明模型可以預(yù)測(cè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果。校正系數(shù)R2adj為0.9754，變異系數(shù)C.V.=0.9144%，結(jié)果表明模型具有可復(fù)制性。綜上所述，實(shí)驗(yàn)擬合的數(shù)學(xué)模型預(yù)測(cè)性良好。

表3 響應(yīng)面模型方差分析Table 3 Variance analysis of response surface model

2.3.3 響應(yīng)面分析 響應(yīng)面圖曲面陡峭，等高線圖呈明顯的橢圓形，說(shuō)明兩因素交互作用顯著。相反，當(dāng)響應(yīng)面曲面平緩，等高線圖呈現(xiàn)圓形，則表示兩者交互作用不顯著。

由圖6 可知，在C 因素（乙醇濃度）方向的響應(yīng)面的曲線比較陡峭，B 因素（料液比）方向比較平緩，因此，B 因素（料液比）對(duì)苯乙醇苷得率的影響要低C 因素（乙醇濃度）。響應(yīng)面圖陡峭，等高線圖呈明顯的橢圓且弧度較大，表示兩因素的交互作用顯著。

圖6 乙醇濃度和料液比對(duì)苯乙醇苷得率的影響Fig.6 Effect of ethanol concentration and solid-liquid ratio on extraction yield of PhGs

由圖7 可知：A 因素（溫度）方向的響應(yīng)面的曲線相比C 因素（乙醇濃度）的響應(yīng)面曲線較為平緩，因此C 因素（乙醇濃度）對(duì)苯乙醇苷得率的影響比A 因素（溫度）的影響更大。響應(yīng)面圖陡峭，等高線圖呈明顯的橢圓，表示兩因素的交互作用顯著。

圖7 乙醇濃度和溫度對(duì)苯乙醇苷得率的影響Fig.7 Effect of ethanol concentration and temperature on extraction yield of PhGs

由圖8 可知：A 因素（溫度）方向的響應(yīng)面的曲線相比B 因素（料液比）的響應(yīng)面曲線較為陡峭，因此A 因素（溫度）對(duì)苯乙醇苷得率的影響比的影響更大。響應(yīng)面圖相對(duì)平緩，等高線圖偏圓形，表示兩因素的交互作用不顯著。

圖8 料液比和溫度對(duì)苯乙醇苷得率的影響Fig.8 Effect of solid-liquid ratio and temperature on extraction yield of PhGs

依據(jù)以上三個(gè)自變量因素對(duì)苯乙醇苷得率的影響的分析，可以再次得出影響效果的大?。阂掖紳舛龋境暅囟龋玖弦罕取?/p>

2.3.4 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn) 根據(jù)響應(yīng)面的分析結(jié)果顯示，通過(guò)回歸方程式求解，使苯乙醇苷的提取量達(dá)到最大值時(shí)預(yù)測(cè)得到最佳條件為：超聲溫度40.437 ℃，料液比1:41.691 g/mL、乙醇濃度51.081%，在此條件下苯乙醇苷得率為14.345 mg/g?？紤]實(shí)驗(yàn)操作的可行性，將提取條件修改為：超聲溫度40 ℃，料液比1:41.7 g/mL、乙醇濃度51%。在此條件之下進(jìn)行三次驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，得到苯乙醇苷平均得率為（14.36±0.12）mg/g，表明該模型可用于肉蓯蓉苯乙醇苷提取工藝的預(yù)測(cè)。

2.4 提取物中苯乙醇苷的組成及含量

按照1.2.4 方法進(jìn)行操作，以峰面積（A）為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣溶液中毛蕊花糖苷（松果菊苷）（mg/mL）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果見(jiàn)表4。采用HPLC 對(duì)最優(yōu)條件下提取物中苯乙醇苷類化合物進(jìn)行了定性定量分析（圖9），結(jié)果顯示提取物中苯乙醇苷類主要由松果菊苷和毛蕊花糖苷構(gòu)成，含量為（12.96±0.33）mg/g和（1.19±0.09）mg/g。

表4 HPLC 法測(cè)定松果菊苷、毛蕊花糖苷方法學(xué)參數(shù)Table 4 Methodological parameters of echinoside and acteoside determined by HPLC

圖9 標(biāo)準(zhǔn)品及管花肉蓯蓉中苯乙醇苷類化合物的HPLC 色譜圖Fig.9 HPLC chromatogram of phenylethanoside compounds in standards and Cistanche tubulosa

Liu 等[34]通過(guò)超聲輔助的方式對(duì)阿拉善荒漠肉蓯蓉中苯乙醇苷進(jìn)行提取，提取物中松果菊苷和毛蕊花糖苷的含量分別為1.79%和1.43%。蔡鴻等[35]對(duì)68 批肉蓯蓉進(jìn)行測(cè)定，得到12 個(gè)新疆管花肉蓯蓉的平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)：松果菊苷3.32%，毛蕊花糖苷0.91%。本文中測(cè)定松果菊苷和毛蕊花糖苷平均含量為（12.96±0.33）mg/g 和（1.19±0.09）mg/g，測(cè)定結(jié)果與Liu 等[34]對(duì)荒漠肉蓯蓉中苯乙醇苷含量研究相比，兩種肉蓯蓉中松果菊苷含量差距不大，但荒漠肉蓯蓉中毛蕊花糖苷含量明顯高于本文測(cè)定結(jié)果。

2.5 苯乙醇苷提取物抗氧化性

2.5.1 羥基自由基清除能力 由圖10 可知，隨著苯乙醇苷提取物質(zhì)量濃度的不斷增加，苯乙醇苷提取物對(duì)羥基自由基的清除能力也隨之增強(qiáng)。當(dāng)苯乙醇苷提取物的質(zhì)量濃度為35 mg/mL 時(shí)，其羥基自由基清除率達(dá)到44.67%；隨后其清除率趨于平緩，當(dāng)濃度達(dá)到45 mg/mL 時(shí)，清除率為45.04%。在相同濃度下，苯乙醇苷提取物對(duì)羥基自由基清除能力遠(yuǎn)小于抗壞血酸，二者IC50值分別為60.196 和0.824 mg/mL。

圖10 苯乙醇苷提取物的羥基自由基清除能力Fig.10 The hydroxyl radical scavenging activity of PhGs extract

2.5.2 DPPH 自由基清除能力 由圖11 可知，隨著苯乙醇苷提取物濃度的不斷增加，其DPPH 自由基的清除能力也隨之增強(qiáng)。當(dāng)苯乙醇苷提取物的濃度為5 mg/mL 時(shí)，DPPH 自由基清除率達(dá)到73.69%；隨后其清除能力趨于平緩，當(dāng)濃度達(dá)到10 mg/mL時(shí)，清除率為73.83%。在相同濃度下，苯乙醇苷提取物DPPH 自由基清除能力略小于VC，二者IC50值分別為0.875 和0.035 mg/mL。本研究結(jié)果與宮曉慶[36]結(jié)果相似，研究表明肉蓯蓉苯乙醇苷提取物對(duì)于DPPH 自由基有較好的清除能力。

圖11 苯乙醇苷提取物的DPPH 自由基清除能力Fig.11 The DPPH free radical scavenging activity of PhGs extract

3 結(jié)論

本文采用響應(yīng)面法優(yōu)化了新疆管花肉蓯蓉中苯乙醇苷類化合物的超聲輔助提取工藝為：溫度40 ℃，料液比1:41.7 g/mL，乙醇濃度51%。該條件下苯乙醇苷的得率為（14.36±0.12）mg/g。肉蓯蓉中苯乙醇苷類化合物主要包含松果菊苷和毛蕊花糖苷，其含量分別為（12.96±0.33）mg/g 和（1.19±0.09）mg/g。肉蓯蓉苯乙醇苷提取物對(duì)羥基自由基和DPPH自由基具有較強(qiáng)的清除能力，其IC50值分別為60.196 mg/mL 和0.875 mg/mL。本文利用超聲輔助提取可以從管花肉蓯蓉中有效提取苯乙醇苷類成分，且研究證明管花肉蓯蓉苯乙醇苷提取物具有較好的體外抗氧化活性，為新疆肉蓯蓉苯乙醇苷類化合物的高效提取和應(yīng)用提供了理論依據(jù)。