王文強(qiáng), 古春明, 賴科峰, 閆琦, 穆小萍

廣東省婦幼保健院檢驗(yàn)科(廣東廣州 510010)

近年來，過敏性疾病的診斷越來越受到重視，目前主要的診斷方式包括體內(nèi)過敏原皮膚點(diǎn)刺試驗(yàn)和體外血清過敏原特異性免疫球蛋白E(specific immunoglobulin E, sIgE)診斷方法。體外血清過敏原sIgE檢測由于干擾低、準(zhǔn)確度高、痛苦少等優(yōu)點(diǎn)[1]，現(xiàn)已成為臨床上過敏性疾病診斷的重要方法[2]。然而，我們在臨床實(shí)踐中發(fā)現(xiàn)，臨床醫(yī)生使用兩種不同方法檢測患者血清過敏原sIgE時(shí)偶爾會(huì)收到兩份實(shí)驗(yàn)室不一致的檢測報(bào)告，對不同數(shù)據(jù)報(bào)告的解釋較為困難。本研究通過對比分析Allergy Screen和EUROLINE Atopy過敏原sIgE檢測結(jié)果的一致性，旨在為兒童過敏性疾病選擇合適檢測方法與合理解讀檢測結(jié)果提供可靠的依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018年1—12月來我院就診的患兒180例，其中男86例，女94例，年齡3～15歲。

納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)年齡≤15周歲；(2)臨床診斷為過敏性疾病，包括過敏性鼻炎、支氣管哮喘、蕁麻疹、濕疹、皮炎及過敏性紫癜等；(3)明確所有入選病例1周內(nèi)沒有使用抗組胺類藥物、糖皮質(zhì)激素或免疫抑制劑。

本研究獲得本院倫理委員會(huì)審批(廣東省婦幼保健院醫(yī)倫第[202201009]號)。

1.2 方法

抽取全血5 mL，3 500 r/min離心6 min分離血清。

檢測試劑和儀器：Allergy Screen(敏篩過敏原特異性IgE抗體檢測試劑盒)(德國Mediwiss公司)，檢測血清吸入性過敏原塵螨(戶塵螨、粉塵螨)、屋塵、樹花粉組合(柏、榆、柳、櫟、樺、楓、胡桃、梧桐、楊)、混合草花粉(矮豚草、蒿、葎草、藜)、貓毛皮屑、狗毛皮屑、蟑螂、桑樹、霉菌組合(點(diǎn)青、分枝、煙曲、黑曲、交鏈)，食入性過敏原雞蛋白、牛奶、莧菜、蝦、蟹、貝、牛肉、腰果、芒果、菠蘿。運(yùn)用自帶的過敏原定量檢測系統(tǒng)，經(jīng)MEDIWISS Analytic免疫印跡數(shù)字成像系統(tǒng)，通過CCD照相，軟件評估條帶顏色深淺，經(jīng)過計(jì)算顯色條帶面積積分并與內(nèi)標(biāo)曲線對比進(jìn)行分級，分級與IgE的IU/mL濃度相對應(yīng)。結(jié)果評定標(biāo)準(zhǔn)：0級(<0.35 IU/mL)無，1級(0.35～<0.70 IU/mL)低，2級(0.70～<3.5 IU/mL)增加，3級(3.5～<17.5 IU/mL)顯著增加，4級(17.5～<50 IU/mL)高，5級(50～<100 IU/mL)較高，6級(≥100 IU/mL)極高。

EUROLINE Atopy(歐蒙吸入性和食入性過敏原特異性IgE抗體檢測試劑盒)(德國歐蒙醫(yī)學(xué)診斷有限公司)，檢測血清吸入性過敏原塵螨組合(屋塵螨、粉塵螨)、屋塵、樹花粉組合(柳樹、楊樹、榆樹)、普通豚草，艾蒿，葎草、貓毛、狗上皮、蟑螂、霉菌組合(點(diǎn)青霉、分枝孢霉、煙曲霉、交鏈霉)，食入性過敏原雞蛋白、牛奶、花生、黃豆、牛肉、羊肉、海魚組合(鱈魚、龍蝦、扇貝)、蝦、蟹。使用歐蒙全自動(dòng)免疫印跡儀(EUROBlotOne)進(jìn)行檢測，應(yīng)用EUROLineScan軟件進(jìn)行結(jié)果判讀。結(jié)果評定標(biāo)準(zhǔn)：0級(<0.35 KU/L)不過敏，1級(>0.35 KU/L)可疑或輕度過敏，2級(≥0.7 KU/L)中度過敏，3級(≥3.5 KU/L)重度過敏，4級(≥17.5 KU/L)，5級(≥50 KU/L)，6級(≥100 KU/L)特重度過敏。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 由于Allergy Screen和EUROLINE Atopy兩種檢測方法過敏原sIgE不盡相同，本研究只選擇相同項(xiàng)目進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果采用SPSS 26.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料采用例(百分率)[n(%)]表示，組間比較采用2檢驗(yàn)，采用Cohen′sKappa分析對兩種方法進(jìn)行一致性檢驗(yàn)，Kappa分級標(biāo)準(zhǔn)依照文獻(xiàn)[3]。其中K<0，表示兩者一致性極差；0～0.2，表示兩者一致性較差；0.21～0.40，表示兩者一致性一般；0.41～0.60，表示兩者一致性中等；0.61～0.80，表示兩者一致性較高；0.81～1.00，表示兩者一致性強(qiáng)，以P<0.05為Kappa值有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。采用等級資料Spearman相關(guān)性分析對Allergy Screen和EUROLINE Atopy兩種檢測方法結(jié)果進(jìn)行等級一致性評價(jià)。0.2≤Spearman<0.4，說明關(guān)系一般，0.4≤Spearman<0.7，說明關(guān)系緊密，Spearman>0.7，說明關(guān)系非常緊密，以P<0.05為Spearman值有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Allergy Screen和EUROLINE Atopy過敏原sIgE陽性率比較 吸入性過敏原中，無論是Allergy Screen還是EUROLINE Atopy法檢測，塵螨陽性率最高，分別為29.4%和33.4%。而食入性過敏原中，Allergy Screen和EUROLINE Atopy兩種檢測方法均是牛奶陽性率最高，分別為38.9%和34.4%，Allergy Screen法檢測樹花粉、混合草、貓毛、狗毛、牛奶、蟹陽性率高于EUROLINE Atopy法。EUROLINE Atopy法檢測塵螨、屋塵、霉菌、雞蛋、牛肉、貝類、蝦陽性率高于Allergy Screen法。見表1～2。

表1 Allergy Screen和EUROLINE Atopy吸入性過敏原sIgE陽性率比較 例(%)

表2 Allergy Screen和EUROLINE Atopy食入性過敏原sIgE陽性率比較 例(%)

2.2 Allergy Screen和EUROLINE Atopy過敏原sIgE一致性分析 Allergy Screen和EUROLINE Atopy兩種檢測方法塵螨、牛奶、蟹3種過敏原一致性強(qiáng)，Kappa值分別為0.846、0.845、0.813?；旌喜?、屋塵、蟑螂、霉菌、雞蛋、蝦等6種過敏原一致性較高，Kappa值分別為0.719、0.722、0.662、0.652、0.780、0.710。樹花粉、牛肉一致性中等。Kappa值分別為0.483、0.486。貓毛、貝類一致性一般，Kappa值分別為0.392、0.389。狗毛一致性較差，Kappa值為0.142。見表3。

表3 Allergy Screen和EUROLINE Atopy過敏原sIgE抗體的Kappa一致性分析

Allergy Screen和EUROLINE Atopy兩種檢測方法各個(gè)項(xiàng)目過敏原等級資料Spearman相關(guān)性顯示，混合草、塵螨、屋塵、牛奶、雞蛋、蝦、蟹等7項(xiàng)相關(guān)性非常緊密，Spearman值分別為0.735、0.878、0.707、0.835、0.821、0.704、0.826。蟑螂、霉菌組合、牛肉等3項(xiàng)相關(guān)性緊密，Spearman值分別為0.670、0.689、0.445。樹花粉、貓毛、狗毛、貝類等4項(xiàng)相關(guān)性一般，Spearman值分別為0.389、0.324、0.237、0.311。見表4。

表4 Allergy Screen和EUROLINE Atopy過敏原sIgE抗體的Spearman相關(guān)性分析

3 討論

過敏性疾病是一種超敏變態(tài)反應(yīng)性疾病[4-5]。目前，全球30%～40%的人口受到一種或多種過敏性疾病影響，如特異性皮炎、哮喘、過敏性鼻炎和食物性過敏等[6]。研究表明，反復(fù)接觸某一過敏原才會(huì)引起對該過敏原的特異性反應(yīng)[7]。吸入性過敏反應(yīng)主要由季節(jié)性過敏原(樹、草的花粉等)引起，也可由常年性過敏原(屋塵螨、霉菌孢子、寵物的皮毛等)引起，食入性過敏反應(yīng)主要由堅(jiān)果類(花生、葵花籽等)引起，也可由牛奶、雞蛋、海魚、蝦、蟹類及牛羊肉類等引起[8]。

過敏原檢測是評估過敏性疾病的重要手段[9]。目前，變應(yīng)性疾病的檢測分為體內(nèi)檢測和體外檢測。體內(nèi)檢測主要包括皮膚點(diǎn)刺試驗(yàn)、過敏原皮內(nèi)試驗(yàn)、皮膚斑貼試驗(yàn)和過敏原激發(fā)試驗(yàn)等。它的原理是過敏原直接刺激機(jī)體發(fā)生過敏反應(yīng)，具有敏感度高等優(yōu)點(diǎn)，尤其食物激發(fā)試驗(yàn)和皮膚點(diǎn)刺試驗(yàn)可作為金標(biāo)準(zhǔn)。但同時(shí)具備使患者痛苦、危險(xiǎn)、假陽性高、操作繁瑣等缺點(diǎn)。而體外檢測血清sIgE抗體，具備方法簡便快捷，準(zhǔn)確度高，假陽性低，安全可靠，不受藥物影響等優(yōu)點(diǎn)[10]，現(xiàn)已成為過敏原檢測主要手段。

目前，血清過敏原sIgE檢測的主要方法有熒光酶聯(lián)免疫法、磁微?；瘜W(xué)發(fā)光酶免疫分析法、免疫印跡法、固相免疫過敏芯片技術(shù)等[11]。但是各種方法檢測過敏原的種類不盡相同，敏感度和特異度均存在一定差異。熒光酶聯(lián)免疫法和磁微?；瘜W(xué)發(fā)光酶免疫分析法需要特殊設(shè)備和試劑，成本較高，而且Sinson等[12]研究發(fā)現(xiàn)，17%的患者在應(yīng)用ImmunoCAP檢測過敏原sIgE時(shí)由于CCD干擾而造成假陽性。因此，價(jià)格相對較低，檢測過敏原種類較多的免疫印跡法廣泛應(yīng)用于臨床過敏原的篩查。孫院芳[13]研究證實(shí)免疫印跡法篩查過敏原陽性率明顯高于皮膚點(diǎn)刺法。然而，目前國內(nèi)商用的免疫印跡法過敏原試劑較多，缺少相應(yīng)的對比評測，本研究對Allergy Screen和EUROLINE Atopy兩種印跡方法過敏原sIgE結(jié)果進(jìn)行對比分析。

Allergy Screen印跡法采用生物素-親和素放大技術(shù)，對硝酸纖維膜上的微量IgE進(jìn)行放大，進(jìn)而檢測血清20多種變應(yīng)原sIgE。EUROLINE Atopy則是患者樣本中IgE類特異性抗體直接與膜條上包被的20種不同的過敏原結(jié)合。與Allergy Screen印跡法相比，EUROLINE Atopy印跡法膜條引入了交叉反應(yīng)性糖類決定簇(cross-reactive carbohydrate determinants，CCD)。對于CCD陽性標(biāo)本，使用專用抗CCD抗體吸附劑處理樣本血清，再檢測變應(yīng)原特異性IgE抗體，可以有效避免由CCD和生物素因素引起的假陽性。另外，本研究中EUROLINE Atopy印跡法相對于Allergy Screen印跡法采用全自動(dòng)檢測和結(jié)果判讀，有效避免了人為誤差的干擾。

本研究中吸入性過敏原結(jié)果顯示，貓毛和狗毛無論是Kappa一致性還是Spearman等級相關(guān)性均較差，可能是由于兩種試劑包被的過敏原不同，Allergy Screen試劑包被的是貓毛皮屑和狗毛皮屑提取物，而EUROLINE Atopy試劑包被的是貓毛和狗上皮提取物，具體原因需要進(jìn)一步驗(yàn)證。本研究中樹組合和混合草一致性和相關(guān)性一般，主要是由于Allergy Screen試劑包被樹花粉的種類包括柏樹、榆樹、柳樹、樺樹、楓樹、胡桃、梧桐樹、楊樹和櫟樹等9種類。而EUROLINE Atopy試劑包被樹花粉的種類只有柳樹、榆樹、楊樹等3類，這也許是Allergy Screen陽性率高于EUROLINE Atopy的原因。

本研究中食入性過敏原結(jié)果顯示，貝類一致性和相關(guān)性一般，可能由于Allergy Screen試劑只有包被貝類，而EUROLINE Atopy試劑包被鱈魚、龍蝦和扇貝等3種過敏原，結(jié)果顯示EUROLINE Atopy貝類4.4%陽性率高于Allergy Screen貝類1.1%陽性率。另外，本研究發(fā)現(xiàn)牛肉一致性和相關(guān)性也一般，可能是由于過敏原的來源不一致，也可能是結(jié)構(gòu)和免疫原性差異導(dǎo)致不同的IgE結(jié)合反應(yīng)。再者，不同的生產(chǎn)提取工藝，保存運(yùn)輸條件以及人為操作因素均可能造成結(jié)果差異[14]。

本研究仍然具有一定的局限性。首先，由于本研究所使用的Allergy Screen檢測方法需要手工操作，而且該方法膜條不含有CCD，不能排除人為因素或者CCD等造成的假陽性。其次，本研究缺乏過敏原sIgE血清學(xué)診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，可能會(huì)導(dǎo)致結(jié)果存在一定的偏差。另外，標(biāo)本納入比較局限，樣本數(shù)較少，且研究群體是廣州地區(qū)兒童，具有很大的地域局限性，部分項(xiàng)目流行病學(xué)率比較低。當(dāng)然，研究還需要進(jìn)行多次重復(fù)試驗(yàn)，納入對象也應(yīng)該增加相應(yīng)的臨床問卷，增加檢驗(yàn)結(jié)果與臨床信息的評估。

但總的來說，本研究顯示兩種檢測方法均可用于一般過敏原sIgE的篩查，臨床應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況，結(jié)合各自優(yōu)點(diǎn)綜合評估來選用合適的方法。

利益相關(guān)聲明：所有作者均聲明不存在利益沖突。

作者貢獻(xiàn)說明：穆小萍、王文強(qiáng)設(shè)計(jì)指導(dǎo)了該項(xiàng)研究；王文強(qiáng)對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析及論文撰寫；古春明、賴科峰、閆琦進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)操作及數(shù)據(jù)收集；所有作者均已閱讀并同意最終文本。