張家瑞，剡文亮，宋 潔，康玉昌，白 玲，李 巖*，魏 勇*

(1.新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)畜牧獸醫(yī)工作總站，烏魯木齊 830063；2.新疆天潤(rùn)乳業(yè)股份有限公司，烏魯木齊 830063)

在奶牛養(yǎng)殖業(yè)逐步實(shí)現(xiàn)規(guī)模化和現(xiàn)代化的今天，犢牛腹瀉這種可由自身免疫能力、飼養(yǎng)環(huán)境、氣候變化、日糧營(yíng)養(yǎng)攝入以及病原性因子等諸多因素引起犢牛生長(zhǎng)發(fā)育不良甚至死亡的疾病，一直都在對(duì)養(yǎng)牛業(yè)造成高昂的經(jīng)濟(jì)損失。一般當(dāng)人們發(fā)現(xiàn)出現(xiàn)腹瀉、嘔吐等臨床癥狀的犢牛時(shí)，大多都會(huì)受到以往經(jīng)驗(yàn)的影響，首先考慮腹瀉可能是感染大腸桿菌這類常見病原所致，卻往往忽視導(dǎo)致犢牛發(fā)生腹瀉的因素可能是多種感染性因素和非感染性因素相互作用所致，所以結(jié)合犢牛飼養(yǎng)背景來做綜合判定才更具科學(xué)性。近年來，各地學(xué)者對(duì)當(dāng)?shù)氐臓倥８篂a發(fā)病情況和病因的調(diào)查研究層出不窮，黎玉瓊[1]對(duì)寧夏地區(qū)的犢牛腹瀉進(jìn)行病原學(xué)調(diào)查；王晨豫[2]報(bào)道了新疆地區(qū)某規(guī)?；膛?chǎng)犢牛BVDV流行情況。然而，針對(duì)犢牛腹瀉的綜合性調(diào)查卻比較少。本試驗(yàn)通過整理該牛場(chǎng)2020—2021年?duì)倥８篂a臨床病例記錄及其背景調(diào)查，同時(shí)采用細(xì)菌培養(yǎng)鑒定法對(duì)該牛場(chǎng)犢牛腹瀉發(fā)病情況及主要風(fēng)險(xiǎn)因素進(jìn)行初步統(tǒng)計(jì)分析，以為該牧場(chǎng)的后續(xù)治療和防控提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 犢牛腹瀉臨床病例來源

該奶牛場(chǎng)于2019年開始使用由阿菲金(中國(guó))農(nóng)業(yè)科技有限公司開發(fā)的“阿菲金牧場(chǎng)生產(chǎn)管理軟件”(下文簡(jiǎn)稱為系統(tǒng))管理牛群，有較全面記錄所有腹瀉犢牛的診療和治療記錄的功能，可隨時(shí)調(diào)出完整的腹瀉犢牛診療及治療記錄。試驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析所用的2020—2021年的犢牛腹瀉臨床病例及飼喂背景均是從該系統(tǒng)調(diào)出。

表1 奶牛場(chǎng)哺乳犢牛初乳、常乳飼喂程序

1.2 主要試驗(yàn)材料及設(shè)備

葡萄球菌—鏈球菌—革蘭氏陰性三聯(lián)顯色培養(yǎng)基購(gòu)自北京美正生物科技有限公司；麥康凱瓊脂購(gòu)自青島高科技工業(yè)園海博生物技術(shù)有限公司；伊紅美藍(lán)瓊脂購(gòu)自北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司；電熱恒溫培養(yǎng)箱購(gòu)自上海鴻都電子科技有限公司；超凈工作臺(tái)購(gòu)自蘇州蘇潔凈化設(shè)備有限公司；手動(dòng)移液槍購(gòu)自艾本德(上海)國(guó)際貿(mào)易有限公司。

1.3 細(xì)菌分離鑒定

從系統(tǒng)犢牛腹瀉臨床病例中隨機(jī)挑選出現(xiàn)排泄水樣稀便的犢牛，無菌采集直腸拭子，在超凈工作臺(tái)內(nèi)用無菌生理鹽水稀釋混勻后，吸取100 μL渾濁液滴加涂布至葡萄球菌—鏈球菌—革蘭氏陰性三聯(lián)顯色培養(yǎng)基中，置于37 ℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)18～24 h，參照顯色培養(yǎng)基說明書提供的革蘭氏陰性顯色培養(yǎng)基生物學(xué)指標(biāo)表中的質(zhì)控菌株特征反應(yīng)進(jìn)行判定。無菌挑取顯色培養(yǎng)基中的單個(gè)菌落劃線于麥康凱瓊脂和伊紅美藍(lán)瓊脂，置于37 ℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)18～24 h后，革蘭氏染色，100倍油鏡下觀察細(xì)菌形態(tài)。

2 結(jié)果與分析

2.1 2020—2021年奶牛場(chǎng)犢牛腹瀉發(fā)病情況

表2結(jié)果顯示，該奶牛場(chǎng)近2年的犢牛腹瀉發(fā)病率分別為19.80%(80/404)和10.74%(48/447)，其中2021年各季節(jié)的犢牛腹瀉發(fā)病頭數(shù)較2020年各季節(jié)的發(fā)病頭數(shù)及同年各季節(jié)之間的發(fā)病情況均明顯減少。2020年和2021年的夏季犢牛腹瀉頭數(shù)均少于同年其他季節(jié)的發(fā)病數(shù)，該奶牛場(chǎng)犢牛腹瀉發(fā)病情況從2021年春季出現(xiàn)明顯好轉(zhuǎn)，至2021年冬季該奶牛場(chǎng)犢牛腹瀉發(fā)病情況均維持在較為良好的水平。

表2 2020—2021年奶牛場(chǎng)犢牛腹瀉發(fā)病情況

2.2 不同飼養(yǎng)階段的犢牛腹瀉發(fā)病情況

表3結(jié)果顯示，對(duì)該牛場(chǎng)處于不同飼養(yǎng)階段的犢牛的腹瀉發(fā)病情況進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)該牛場(chǎng)近兩年的處于不同飼養(yǎng)階段的犢牛腹瀉發(fā)病情況均差異性顯著(P<0.05)，其中處于常乳哺乳期的犢牛和處于“常乳+開口料”的犢牛的腹瀉發(fā)病情況均明顯高于初乳哺乳期、“常乳+犢牛料”和斷奶期的犢牛。

表3 2020年～2021年不同飼養(yǎng)階段的犢牛腹瀉發(fā)病情況

2.2 細(xì)菌分離鑒定試驗(yàn)結(jié)果

從部分犢牛水樣糞便樣本中接種在萄球菌—鏈球菌—革蘭氏陰性三聯(lián)顯色培養(yǎng)基上“GN”區(qū)域培養(yǎng)出的菌落顏色為紅色，符合顯色培養(yǎng)基說明書中大腸桿菌的特征反應(yīng)；麥康凱瓊脂和伊紅美藍(lán)瓊脂上分別培養(yǎng)出粉紅色和帶有金屬光澤的單個(gè)菌落；鏡檢觀察到革蘭氏陰性短桿菌詳見圖1。

3 討 論

在奶牛養(yǎng)殖業(yè)蓬勃發(fā)展的今天，犢牛腹瀉這一疾病依然是阻礙養(yǎng)牛業(yè)良好發(fā)展的絆腳石之一。由于犢牛腹瀉具有多種感染性和非感染性因素相互作用誘發(fā)疾病的特點(diǎn)，往往使人們忽略其中的很多重要影響因子，只有結(jié)合犢牛飼養(yǎng)背景來做綜合判定才能更有效地進(jìn)行治療和預(yù)防。

3.1 該牛場(chǎng)犢牛腹瀉的情況有所好轉(zhuǎn)但仍需改善

試驗(yàn)通過整理該牛場(chǎng)2020—2021年?duì)倥８篂a臨床病例記錄及其背景調(diào)查，同時(shí)采用細(xì)菌培養(yǎng)鑒定法對(duì)該牛場(chǎng)犢牛腹瀉發(fā)病情況及主要風(fēng)險(xiǎn)因素進(jìn)行初步統(tǒng)計(jì)分析。該奶牛場(chǎng)近兩年的犢牛腹瀉發(fā)病率分別為19.80%(80/404)和10.74%(48/447)，說明該奶牛場(chǎng)近兩年的犢牛腹瀉發(fā)病情況有所好轉(zhuǎn)。閆琛博[3]在對(duì)河南省12個(gè)地區(qū)部分規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)部分1—6月齡犢牛腹瀉流行情況調(diào)查是的檢出率為22.54%；胡玉榮[4]對(duì)固原市3個(gè)規(guī)?；?chǎng)和2個(gè)診療所地的部分0—60日齡犢牛進(jìn)行病原血檢測(cè)發(fā)現(xiàn)主要病原平均檢出率為31.25%，雖然該牛場(chǎng)近兩年的發(fā)病率稍低于上述研究結(jié)果，但該牛場(chǎng)的犢牛腹瀉防控程度和我國(guó)多數(shù)地區(qū)犢牛腹瀉的防控情況依然處于同一水平，需具體分析復(fù)雜的發(fā)病原因，才能使得犢牛腹瀉情況得到更有效的控制。

3.2 不良的外界環(huán)境可能誘發(fā)犢牛腹瀉

導(dǎo)致犢牛腹瀉的原因可能是由多種感染性因素和非感染性因素相互作用所致，其中的非感染性因素往往是被忽略的誘發(fā)犢牛腹瀉的重要發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)因素之一，如天氣驟變、寒冷、陰雨潮濕都會(huì)使?fàn)倥Ｖ苯邮艿酱碳?，?dǎo)致犢牛產(chǎn)生冷應(yīng)激，對(duì)犢牛自身抵抗力產(chǎn)生嚴(yán)重影響，降低了犢牛接觸感染性病原后抵御感染的能力，從而增大了犢牛腹瀉的發(fā)病幾率。雖然天氣變化不可人為操作，但可以在犢牛飼養(yǎng)環(huán)境方面因地制宜地制定出防控方案。干燥、清潔的圈舍可以減少犢牛在換季時(shí)的腹瀉發(fā)病率。尤其是在冬季，保持定期的環(huán)境衛(wèi)生消毒就變得尤為重要，為犢牛提供一個(gè)干燥、清潔的圈舍或犢牛島，能有效減少各種不良環(huán)境因素對(duì)犢牛帶來刺激，從而減小犢牛腹瀉的發(fā)病幾率[5]。

3.3 巴氏消毒常乳有利于改善犢牛腹瀉發(fā)病情況

人們?cè)?0個(gè)世紀(jì)就開始將巴氏殺菌應(yīng)用于對(duì)牛奶進(jìn)行加熱滅菌。在理想狀況下，巴氏殺菌可以有效殺滅牛奶中99%的細(xì)菌，從而降低了飼喂給犢牛的常乳中的細(xì)菌數(shù)量。在大部分規(guī)?；?chǎng)，患有乳房炎的奶牛產(chǎn)出的牛奶和含抗生素的牛奶一般會(huì)被認(rèn)為是廢棄奶。使用這些廢棄奶飼喂?fàn)倥?huì)大大降低犢牛的飼喂成本，可以幫助牧場(chǎng)降低由廢棄奶不能銷售所帶來的損失。但飼喂給犢牛的廢棄奶里的細(xì)菌數(shù)量非常大，如果直接飼喂?fàn)倥?huì)造成犢牛腹瀉，影響犢牛后期的生長(zhǎng)指標(biāo)，例如日增重等。合理的使用巴殺消毒可以降低大腸桿菌、無乳鏈球菌和支原體等致病菌的潛在傳播風(fēng)險(xiǎn)，進(jìn)而降低犢牛腹瀉發(fā)病率和犢牛腹瀉引發(fā)的死亡率[6]。根據(jù)調(diào)查發(fā)現(xiàn)該奶牛場(chǎng)于2020年11月將老式常乳巴殺罐更換為最新式的連續(xù)式巴殺機(jī)，該奶牛場(chǎng)犢牛腹瀉發(fā)病情況也是從2021年春季出現(xiàn)明顯好轉(zhuǎn)，至2021年冬季該奶牛場(chǎng)犢牛腹瀉發(fā)病情況均維持在較為良好的水平。故可以初步推測(cè)消毒效果良好的常乳巴殺消毒可能是控制犢牛腹瀉發(fā)病的有效措施之一。Jamaluddin等人[7]的結(jié)果始終顯示，飼喂廢棄奶對(duì)犢牛的日增重和其他犢牛健康指標(biāo)沒有明顯的負(fù)面影響，喂食巴氏消毒常乳的犢牛的腹瀉發(fā)病率低于喂食非巴氏消毒牛奶的犢牛，并且喂食巴氏消毒常乳的犢牛發(fā)病較晚、持續(xù)時(shí)間較短、臨床癥狀較輕。

盡管巴殺可以消滅常乳里大部分的有害菌，但巴殺消毒不能提高低質(zhì)或者變質(zhì)牛奶的質(zhì)量，清楚地了解巴殺消毒設(shè)備的運(yùn)行狀況以及巴殺后牛奶質(zhì)量，是確保哺乳犢牛飼養(yǎng)安全的關(guān)鍵程序之一。巴殺消毒機(jī)應(yīng)在每次使用后按照操作指南的指導(dǎo)進(jìn)行徹底清洗。使用堿性消毒劑清洗可以提高清洗過程中清洗劑的酸度值，能夠有效提高殺菌效果。沖洗整個(gè)系統(tǒng)一般推薦使用酸性消毒劑。清洗劑的清洗流程結(jié)束后，應(yīng)使用一定溫度的飲用水進(jìn)行最后全面清洗。確保容器封閉良好，防止蒼蠅進(jìn)入巴殺消毒機(jī)。制定并執(zhí)行巴殺消毒機(jī)消毒效果評(píng)價(jià)制度，定期對(duì)巴殺消毒后的牛奶營(yíng)養(yǎng)含量和微生物殘留種類和數(shù)量進(jìn)行檢測(cè)。做到嚴(yán)格檢測(cè)、及時(shí)反饋、查漏補(bǔ)缺。務(wù)必確保在犢牛飼養(yǎng)每一環(huán)節(jié)做到最好。

3.4 犢牛腹瀉發(fā)病主要風(fēng)險(xiǎn)因素不同

試驗(yàn)對(duì)該牛場(chǎng)處于不同飼養(yǎng)階段的犢牛的腹瀉發(fā)病情況進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)該牛場(chǎng)2年的處于不同飼養(yǎng)階段的犢牛腹瀉發(fā)病情況差異性顯著(P<0.05)，其中處于常乳哺乳期的犢牛和處于“常乳+開口料”的犢牛的腹瀉發(fā)病情況均明顯高于初乳哺乳期、“常乳+犢牛料”和斷奶期的犢牛。分析原因可能是給出生不久的犢牛喂食初乳后不僅可以給犢牛提供大量的母源抗體從而加強(qiáng)了對(duì)犢牛腸壁的保護(hù)，犢牛的免疫力得到有效增強(qiáng)，很大程度地阻礙環(huán)境致病菌的侵染。而隨著進(jìn)入常乳期后因?yàn)槌Ｈ橹兴晌镔|(zhì)僅是初乳的50%，犢牛所必須的蛋白質(zhì)、乳脂肪、維生素以及礦物質(zhì)雖也能從常乳中獲取，但犢牛母源抗體含量的下降可能導(dǎo)致這段時(shí)期犢牛免疫力的下降，誘發(fā)犢牛腹瀉的風(fēng)險(xiǎn)增大，發(fā)病情況自然明顯嚴(yán)重于其他飼養(yǎng)階段。所以及時(shí)調(diào)整常乳飼喂量和相對(duì)應(yīng)的預(yù)防措施至關(guān)重要?！俺Ｈ?開口料”的犢牛的腹瀉發(fā)病情況的嚴(yán)重程度僅次于常乳期，分析原因可能是犢牛處于的哺乳期是生長(zhǎng)發(fā)育的黃金期，每日需要攝入大量的常乳來提供生長(zhǎng)發(fā)育所需的營(yíng)養(yǎng)和能量，但如果這時(shí)候的常乳的單次量過多或者兩次間隔時(shí)間差距過短，犢牛小腸中的常乳還沒消化完全就又被喂食了新的乳汁，就會(huì)引起犢牛消化系統(tǒng)紊亂或誤入瘤胃，使?fàn)倥０l(fā)生腹瀉[6]。犢牛的哺乳期飼喂應(yīng)當(dāng)盡可能的精細(xì)化，已知市面上已有犢牛精確飼喂技術(shù)和先進(jìn)裝置可以更加個(gè)性化制定犢牛的飼養(yǎng)方式，使?fàn)倥５纳a(chǎn)性能更加，從而獲得更大的經(jīng)濟(jì)效益。

3.5 感染性是主要風(fēng)險(xiǎn)因素之一

試驗(yàn)從部分犢牛水樣糞便樣本中初步分離鑒定出大腸桿菌。有研究發(fā)現(xiàn)大腸桿菌可以在偏酸性的環(huán)境下進(jìn)行增殖，犢牛過量攝入牛奶在小腸末端長(zhǎng)時(shí)間停留進(jìn)行發(fā)酵，導(dǎo)致腸道內(nèi)出現(xiàn)偏酸性環(huán)境，適宜增殖條件是的為大腸桿菌可以大量定植，大腸桿菌會(huì)在增殖時(shí)誘導(dǎo)產(chǎn)生熱穩(wěn)定性毒素，導(dǎo)致腸道分泌大量氯化物，水會(huì)由于腸腔細(xì)胞滲透壓的影響下進(jìn)入小腸，導(dǎo)致犢牛發(fā)生腹瀉[7]。所以該牛場(chǎng)存在環(huán)境致病菌侵染等情況可能也是誘發(fā)犢牛腹瀉的主要風(fēng)險(xiǎn)因素之一。