李艷榮，杜義龍，趙勝男，王子怡，周維維,3，潘海峰*

1承德醫(yī)學院中藥研究所；2河北省中藥研究與開發(fā)重點實驗室；3承德市食品藥品檢驗檢測中心，承德 067000

燈盞花又名燈盞細辛，為菊科植物短葶飛蓬Erigeronbreviscapus(Vant.)Hand.-Mazz.的干燥全草，春秋兩季采收，收載于2020年版《中國藥典》一部，具有活血通絡止痛，祛風散寒之功效[1]?，F(xiàn)代藥理研究表明，燈盞花具有神經(jīng)保護、心腦血管保護、抗氧化、抗癌、等藥理作用[2]。癌癥、心腦血管等疾病與機體內(nèi)過多的活性氧如超氧陰離子自由基、羥基自由基和脂質(zhì)自由基等導致的氧化損傷密切相關[3]。適當服用抗氧化劑可以清除體內(nèi)過多的自由基，有利于人類的身體健康和疾病的預防控制[4,5]。文獻[6,7]表明燈盞花有很好的抗氧化活性。燈盞花化學成分復雜，化學成分與活性量效關系尚不十分清楚。中藥化學指紋圖譜因其能夠表征中藥所含的物質(zhì)成分，符合中醫(yī)藥理論的整體性和模糊性，已廣泛用于中藥質(zhì)量評價[8]。但因其僅反映中藥的化學信息，未能與中藥療效間建立關系而使應用越來越受到限制。2020年國家藥監(jiān)局藥審中心發(fā)布了《中藥生物效應檢測研究技術指導(試行)》，倡導建立與活性相關的質(zhì)量控制方法以保證中藥在臨床應用中的安全性和有效性。中藥“譜效關系”研究能使中藥活性成分整體特征表達與多指標、多靶點的作用緊密聯(lián)系，可合理確定藥效物質(zhì)基礎[9]，也符合中藥的作用特點。

中藥標準湯劑是經(jīng)標準化工藝制備而成的單味中藥飲片水煎劑，用于標化臨床用藥，保障用藥的準確性和計量的一致性[10]，作為衡量中藥配方顆粒是否與臨床湯劑基本一致的標準參照物。標準湯劑的提出，為實現(xiàn)基于中藥水煎液的劑型的質(zhì)量一致性、建立有效的質(zhì)量評價方法提供了物質(zhì)基準。本文以燈盞花標準湯劑為研究對象，以體外清除DPPH和ABTS自由基活性實驗驗證其抗氧化作用，同時建立其HPLC指紋圖譜并測定總黃酮含量；采用雙變量相關性分析篩選出顯著相關的抗氧化成分，對篩選的成分進行聚類分析(CA)和主成分分析(PCA)，進一步利用正交偏最小二乘-判別分析(OPLS-DA)找出差異成分；對其抗氧化作用進行質(zhì)量評價，以其為燈盞花及其制劑的質(zhì)量控制提供依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器

Agilent 1200型高效液相色譜儀(在線脫氣機、四元泵、自動進樣器和DAD檢測器，美國安捷倫公司)；AG245電子分析天平(十萬分之一，梅特勒-托利多)；電子分析天平(千分之一，JA5003，天津天馬衡基儀器有限公司)HC-2062高速離心機(科大創(chuàng)新股份有限公司)；紫外-可見分光光度計(島津UV-2600 probe)；上海亞榮旋轉蒸發(fā)儀(RE-52AA)；Thermo Fisher Scientific酶標儀(美國)。

1.2 試藥

DPPH(批號：464RB-GE，上海化成工業(yè)發(fā)展有限公司)；ABTS(批號：M0403A，澤浩公司)；陽性對照維生素C(Vc，批號：J1024A，澤浩公司)；過硫酸鉀(K2S2O8，天津歐博凱化工有限公司)；對照品咖啡酸(批號：110885-200102)購自中國食品藥品檢定院，綠原酸(批號161217)、洋薊素(批號17041106)、異綠原酸A(批號17061201)、燈盞花乙素(批號18032206)、異綠原酸B(批號17121201)、燈盞花甲素(批號18032802)、異綠原酸C(批號170824)均購自成都普菲德生物技術有限公司，以上對照品均供含量測定用。乙腈、甲酸為色譜純，其他試劑為分析純，水為娃哈哈純凈水。

收集燈盞花藥材共16批，詳見表1。由河北民族師范學院董建新教授鑒定均為菊科植物短亭飛蓬Erigeronbreviscapus(Vant.)Hand.-Mazz.的干燥全草。

表1 16批燈盞花藥材產(chǎn)地信息

2 方法與結果

2.1 燈盞花標準湯劑的制備[10]

取燈盞花藥材100 g，加12倍蒸餾水浸泡30 min，一煎煮武火沸后文火煎煮30 min，趁熱過濾，二煎加10倍蒸餾水武火煮沸后文火煎煮20 min，趁熱過濾，合并兩次濾液，60 ℃水浴濃縮至500 mL，制得生藥濃度為0.2 g/mL的燈盞花標準湯劑。

2.2 燈盞花標準湯劑體外抗氧化活性的測定

2.2.1 陽性對照維生素C溶液的制備

取維生素C約50 mg，精密稱定，置10 mL量瓶，用蒸餾水溶解并定容，作為儲備液。取上述儲備液適量用蒸餾水稀釋成系列濃度的待測液，備用。

2.2.2 DPPH溶液的制備

精密稱定DPPH約12 mg置100 mL量瓶，用70%乙醇溶解并定容，備用。

2.2.3 ABTS溶液的制備

精密稱定ABTS 40 mg和K2S2O818 mg分別置10 mL量瓶，用蒸餾水制得ABTS和K2S2O8初始溶液。分別精密吸取2.5 mL的ABTS和K2S2O8初始溶液置100 mL容量，蒸餾水定容得ABTS溶液，避光12～16 h備用。

2.2.4 供試品溶液的制備

按“2.1”項下方法制備16批燈盞花標準湯劑，過濾取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.2.5 清除DPPH自由基能力的測定

取“2.2.4”項下供試品溶液，用蒸餾水制成系列濃度的溶液作為待測液。以維生素C為陽性對照，分別精密吸取50 μL的陽性對照和各批標準湯劑的待測液于96孔板，取系列各孔ABTS溶液加入量為100 μL，避光反應6 min，734 nm處吸光度，其他及計算方法同“2.2.5”項下。計算對照維生素C和各待測液的ABTS清除率。

2.2.7 數(shù)據(jù)處理

計算半清除率IC50時，各提取液對自由基的清除率與濃度不呈線性關系，故本實驗利用SPSS 19.0軟件中Probit方法進行回歸分析，擬合得相應的方程Probit(p)= Intercept + Bx，再通過卡方檢驗后得到IC50值(Probit=0.50時提取液的濃度)。

2.3 燈盞花標準湯劑中總黃酮的含量測定

2.3.1 蘆丁對照品溶液的制備

取蘆丁對照品約10 mg，精密稱定用適量乙醇溶解，加蒸餾水稀釋并定容，得濃度為0.2 mg/mL的對照品溶液。

2.3.2 供試品溶液的制備

分別取“2.2.4”項16批燈盞花標準湯劑200 μL，加入蒸餾水1 800 μL，搖勻即得供試品溶液。

我們使用了定焦鏡頭配合大光圈（f/1.8和f/2.8），確保前景或背景是模糊的。要想讓二者在構圖中同時發(fā)揮作用，可以采用一反常規(guī)的做法，不把焦點對準人物讓背景模糊，而是對準背景讓人物模糊。

2.3.3 檢測波長的選擇

取顯色后的蘆丁對照品溶液和供試品溶液(S001)使用紫外-可見分光光度計于400～650 nm波長進行掃描，光譜圖見圖1，結果顯示對照品溶液和供試品溶液顯色后在505 nm均有最大吸收，故選擇檢測波長為505 nm。

圖1 對照品蘆丁和燈盞花標準湯劑顯色后的光譜圖

2.3.4 線性關系考察

參照2020年版《中國藥典》一部中總黃酮的含量測定方法(亞硝酸鈉-硝酸鋁-氫氧化鈉比色法)顯色[11]。精密量取蘆丁對照品溶液0、1、2、3、4、5、6 mL分別置25 mL量瓶(記作1～7號瓶)，各加水至6 mL，加5%NaNO2溶液1 mL搖勻，放置6 min；加10% Al(NO3)3溶液1 mL搖勻，放置6 min；加NaOH試液10 mL，加水至刻度搖勻，放置15 min。以1號瓶為空白，測定505 nm下各吸光度A為縱坐標(Y)，濃度(C，mg/mL)為橫坐標繪制標準曲線，回歸方程為：Y=12.8X-0.002 9，r=0.999 4，線性范圍為0.007 85～0.047 09 mg/mL。

2.3.5 精密度試驗

精密量取蘆丁對照品溶液3 mL置25 mL量瓶，按“2.3.4”項下的方法，自“加水至6 mL”起依法顯色并測定吸光度，連續(xù)測定6次，記錄吸光度A，計算吸光度的RSD為0.59%，表明儀器精密度良好。

2.3.6 重復性試驗

精密吸取“2.2.4”項下燈盞花標準湯劑(S001)，按“2.3.2”項下方法制備供試品溶液，平行制備6份，精密量取1 mL供試品溶液置25 mL量瓶，按“2.3.4”項下的方法，顯色并測定吸光度，按標準曲線法計算樣品中總黃酮的含量，總黃酮含量的RSD為1.14%，表明方法重復性良好。

2.3.7 穩(wěn)定性試驗

精密吸取“2.3.4”項下燈盞花標準湯劑(S001)，按“2.3.2”項下方法制備供試品溶液，精密量取1 mL供試品溶液置25 mL量瓶，按“2.3.2”項下的方法顯色，分別于顯色后0、5、10、15、25、30 min測定吸光度，計算吸光度的RSD為1.97%，表明供試品溶液顯色30 min內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.3.8 加樣回收率試驗

取已知總黃酮含量的燈盞花標準湯劑(S001)100 μL，加入蘆丁對照品適量，按“2.3.2”項下方法制備供試品溶液，平行制備6份，分別精密量取1 mL供試品溶液置25 mL量瓶，按“2.3.2”項下的方法顯色并測定吸光度并計算加樣回收率。結果見表2。

表2 蘆丁的加樣回收率結果

2.3.9 燈盞花標準湯劑總黃酮的測定

取“2.3.2”項下各批供試品溶液1 mL按“2.3.4”項下方法顯色，測定其吸光度，帶入“2.3.4”項下回歸方程，計算各批標準湯劑總黃酮的含量。結果16批樣品總黃酮的含量分別為：8.30、7.77、6.79、5.35、8.53、8.59、5.35、5.70、7.52、11.3、2.85、7.36、7.93、8.02、7.48、9.62 mg/mL。

2.4 總黃酮含量與抗氧化之間的雙變量相關性分析

采用SPSS 19.0中的Person雙變量相關性分析計算16批樣品抗氧化活性(IC50，mg/mL)與總黃酮含量(mg/mL)的相關系數(shù)，結果DPPH IC50和ABTS IC50與總黃酮的相關系數(shù)分別為-0.718和-0.841，表明燈盞花標準湯劑總黃酮的含量和抗氧化活性(IC50)之間在0.01水平(雙側)顯著相關(P<0.01)，且為負相關。結果表明燈盞花標準湯劑對DPPH和ABTS自由基有一定的清除能力，且清除ABTS自由基的能力更強；總黃酮含量高的樣品抗氧化能力強。

2.5 燈盞花標準湯劑指紋圖譜的建立

2.5.1 供試品溶液的制備

精密吸取“2.2.4”項下各燈盞花標準湯劑1 mL置10 mL量瓶用蒸餾水定容；精密吸取上述溶液1 mL置離心管，精密加入1 mL 20%的乙腈混勻，12 000 r/min離心10 min，上清液過0.45 μm微孔濾膜作為供試品溶液。

2.5.2 對照品溶液的制備

分別取各對照品適量，精密稱定，用甲醇溶解分別制成含綠原酸、咖啡酸、洋薊素、燈盞花乙素、異綠原酸B、燈盞花甲素、異綠原酸A和異綠原酸C分別為877、204、713、1053、683、645、627、913 μg/mL的貯備液。分別精密吸取各儲備液分別制成含綠原酸、咖啡酸、洋薊素、燈盞花乙素、異綠原酸B、燈盞花甲素、異綠原酸A和異綠原酸C分別為21.93、3.40、3.56、78.98、6.83、6.45、15.68、22.83 μg/mL的混合對照品溶液。

2.5.3 色譜條件

Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；以乙腈為流動相A，以0.1%甲酸水為流動相B，按表3中的規(guī)定進行梯度洗脫；檢測波長為：(0～9 min，252 nm；9～60 min，330 nm)；流速為0.8 mL/min；柱溫為30 ℃；進樣量為10 μL。

表3 流動相的梯度洗脫程序

2.5.4 方法學考察

精密度試驗：取S001號標準湯劑按“2.5.1”項下方法制備供試品溶液，采用“2.2”項下色譜方法連續(xù)進樣6針。以綠原酸為參比峰，各共有峰相對保留時間和相對峰面積的RSD均小于1.6%，方法精密度良好。

重復性試驗：取S001號標準湯劑按“2.5.1”項下方法平行制備6份，按“2.4”項下色譜方法進樣。以綠原酸為參比峰，各共有峰相對保留時間和相對峰面積的RSD均小于1.8%，方法重復性良好。

穩(wěn)定性試驗：取S001號標準湯劑按照“2.5.1”項下方法制備供試品溶液，分別于0、2、4、8、12、24 h進樣。以綠原酸為參比峰，各共有峰相對保留時間和相對峰面積的RSD均小于2.0%，供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.5.5 HPLC指紋圖譜的建立與共有峰的確認

將16批燈盞花湯劑按“2.5.1”項下方法制備供試品溶液進行HPLC測定，分別記錄各批的色譜圖，將各批AIA格式的色譜圖導入《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng) 2012版》評價軟件，以S001為參照圖譜，采用“中位數(shù)法”生成對照圖譜，共生成21個共有峰，經(jīng)對照品比對6、9、10、13、14、15、18、19分別是綠原酸、咖啡酸、洋薊素、燈盞花乙素、異綠原酸B、燈盞花甲素、異綠原酸A和異綠原酸C。16批樣品的疊加圖、對照指紋圖譜和混合對照品溶液的色譜圖見圖2、圖3和圖4。

圖2 16批燈盞花標準湯劑的疊加色譜圖

圖3 燈盞花標準湯劑對照指紋圖譜

圖4 混合對照品溶液色圖譜

2.5.6 相似度評價

采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng) 2012A版》評價軟件進行評價。結果16批燈盞花標準湯劑的相似度分別為：0.993、0.962、0.955、0.965、0.966、0.992、0.961、0.968、0.993、0.993、0.964、0.975、0.982、0.855、0.991、0.770，相似度有一定差異。

2.6 統(tǒng)計分析

2.6.1 雙變量相關性分析法篩選燈盞花標準湯劑體外抗氧化活性物質(zhì)

16批燈盞花標準湯劑DPPH和ABTS的IC50值結果見表4。以共有峰峰面積為自變量，以DPPH和ABTS的IC50值為抗氧化活性指標作為因變量，采用SPSS19.0進行皮爾森(Pearson)雙變量相關性分析，篩選出與清除DPPH自由基顯著相關(P<0.05)的共有峰10個(記作“DPPH組”)：峰3、4、6(綠原酸)、7、11、13(燈盞花乙素)、14(異綠原酸B)、15(燈盞花甲素)、17和19(異綠原酸C)；與清除ABTS自由基顯著相關的色譜峰13個(記作“ABTS組”)：與清除ABTS自由基顯著相關的色譜峰13個：峰3、4、6、7、8、11、13、14、15、16、17、18(異綠原酸A)和19。結果見表5。

表4 不同批次的燈盞花標準湯劑的抗氧化活性

表5 燈盞花標準湯劑共有峰與抗氧化作用指標的相關性分析結果

2.6.2 聚類分析(CA)

利用SPSS 19.0統(tǒng)計學軟件分別將篩選出的“DPPH組”色譜峰和總黃酮含量數(shù)據(jù)、“ABTS組”色譜峰和總黃酮含量數(shù)據(jù)為變量，采用聚類方法為最遠鄰元素，度量標準為區(qū)間平方Euclidean距離，對燈盞花標準湯劑樣品進行聚類分析。聚類結果基本一致，樹狀圖分別見圖5和圖6。當類間距大于10時分為兩類，即野生的S014和S016分為一類，其余14批種植的分為一類。推測可能與燈盞花的生長環(huán)境(光照、海拔、經(jīng)緯度)、采收期等因素有關。

圖5 DPPH組聚類樹狀圖

圖6 ABTS組聚類樹狀圖

2.6.3 主成分分析(PCA)及樣品綜合得分的計算

利用SPSS 19.0統(tǒng)計學軟件分別將篩選出的“DPPH組”色譜峰面積和總黃酮含量、“ABTS組”色譜峰面積和總黃酮含量為變量進行主成分分析，并進行KMO檢驗及Bartlett球形檢驗。其中“DPPH組”“ABTS組”的KMO度量值分別為0.625、0.583，Bartlett球形檢驗結果P值均小于0.001，提示各變量之間存在顯著的相關性，可進行主成分分析。按照特征值>1的原則分別提取主成分，“DPPH組”提取3個主成分，初始特征值累積貢獻率為92.457%，第一個主成分特征值為7.920，貢獻率為71.99%；第二主成分特征值為1.235，貢獻率為11.23%；第三主成分特征值為1.015，貢獻率為9.227%。“ABTS組”提取3個主成分，初始特征值累積貢獻率為91.896%，第一個主成分特征值為9.807，貢獻率為70.05%；第二主成分特征值為1.847，貢獻率為13.19%；第三主成分特征值為1.212，貢獻率為8.657%。根據(jù)公式Fi=Zx×A計算各主成分得分，其中A為特征向量矩陣，Zx為標準化數(shù)據(jù)矩陣。結合各成分的貢獻率，建立評分模型：FDPPH=0.7199F1+0.1123F2+0.09927F3，F(xiàn)ABTS=0.7005F1+0.1319F2+0.08657F3。各主成分得分、綜合得分及排序見表6。由表6，兩組的評分結果相似，野生的2批藥材排分比較靠前且清除DPPH自由基和ABTS自由基的能力較強。將上述分析變量分別導入SPSS 19.0軟件，進行主成分分析。主成分二維得分圖分別見圖7和圖8。樣品均被分成兩組，野生的S014和S016分成一組，其余14批分成一組，主成分分析與聚類分析結果基本一致。

圖7 DPPH組主成分得分圖

圖8 ABTS組主成分得分圖

表6 燈盞花標準湯劑主成分得分及排序

2.6.4 正交偏最小二乘判別分析(OPLS-DA)

為了更好地觀察樣品間的組間差異，在主成分分析的基礎上進一步進行有監(jiān)督的OPLS-DA分析，將“DPPH組”色譜峰面積和總黃酮含量數(shù)據(jù)、“ABTS組”色譜峰面積和總黃酮含量數(shù)據(jù)為變量導入SIMCA14.1軟件，獲得相應的模型。由模型驗證參數(shù)可知，“DPPH組”和“ABTS組”模型的穩(wěn)定性好、交叉驗證預測力較高(DPPH組：R2X=0.921，R2Y=0.666，Q2=0.457；ABTS組：R2X=0.914，R2Y=0.660，Q2=0.459)。“DPPH組”和“ABTS組”的OPLS-DA得分圖見圖9和圖10。采用OPLS-DA變量重要性投影值(VIP)篩選出差異性質(zhì)量標志物。95%置信區(qū)間內(nèi)，VIP>1的成分在分類中起重要作用[12,13]，“DPPH組”和“ABTS組”變量重要性投影值(VIP)結果見圖11和圖12。“DPPH組”中峰11、15、14和峰13是VIP>1說明這幾個色譜峰是燈盞花標準湯劑清除DPPH自由基的差異性標志物；“ABTS組”中峰11、15、14和峰19 VIP>1說明這幾個色譜峰是燈盞花標準湯劑除ABTS自由基的差異性標志物。

圖9 DPPH組OPLS-DA得分圖

圖10 ABTS組OPLS-DA得分圖

圖1 DPPH組變量重要性投影值(VIP)

圖12 ABTS組變量重要性投影值(VIP)

3 討論

DPPH和ABTS自由基經(jīng)常作為衡量活性成分體外抗氧化活性的指標，DPPH法通過與具有孤對電子的物質(zhì)結合來測定藥材的抗氧化能力，ABTS法通過與親水性和親脂性物質(zhì)結合來測定抗氧化能力[14]。燈盞花的主要活性成分包括黃酮類化合物[15]，本文測定了16批燈盞花標準湯劑的總黃酮含量為2.85～11.28 mg/mL，以清除DPPH和ABTS自由基為抗氧化指標評價了其體外抗氧化活性，DPPH的IC50值為1.00～3.39 mg/mL，對ABTS的IC50值為0.254～2.16 mg/mL，表明燈盞花標準湯劑清除ABTS自由基的能力強于清除DPPH自由基。采用Pearson雙變量相關性分析，表明2種體外抗氧化活性(IC50值)與總黃酮的含量顯著負相關(P<0.01)，相關系數(shù)分別為-0.714和-0.841，即IC50值越小、總黃酮含量越高提取液的抗氧化能力越強。故總黃酮的含量是影響燈盞花抗氧化強弱的指標之一，可作為評價燈盞花抗氧化強弱的指標。

在指紋圖譜建立過程中，實驗考察了Agilent ZORBAX-SB C18、Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18、Agilent Extend C18色譜柱，根據(jù)色譜峰個數(shù)、分離程度等比較得出Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18效果較好；考察了不同流速(0.8、1、1.2 mL/min)，結果0.8 mL/min分離效果比較好；考察了不同梯度的0.1%甲酸水-甲醇、0.1%甲酸水-乙腈兩元系統(tǒng)、0.1%甲酸水-乙腈-四氫呋喃三元系統(tǒng)，得出0.1%甲酸水-乙腈-四氫呋喃的分離效果更好，且基線較為平穩(wěn)；篩選200～400 nm檢測波長，結果不同時間段變化波長得到的色譜峰多且基線平穩(wěn)，最終確定0～9 min是252 nm，9～60 min是330 nm。

近幾年文獻對燈盞花藥材指紋圖譜的研究多采用HPLC法，對指紋圖譜進行了相似度評價和共有峰的確定[16-20]；文獻[16-18]對指紋圖譜采用CA和PCA進行了化學模式識別，對藥材進行了分類，但未對差異性原因進行深入分析。本文前期燈盞花藥材指紋圖譜[18]的基礎上建立了燈盞花標準湯劑的指紋圖譜，相似度為0.770～0.993，得到21個共有峰，用對照品指認出8個已知成分。本文采用雙變量相關性分析篩選出峰3、4、6(綠原酸)，峰7、11、13(燈盞花乙素)，峰14(異綠原酸B)，峰15(燈盞花甲素)，峰17、19(異綠原酸C)10個色譜峰與清除DPPH自由基能力顯著負相關(即共有峰峰面積越大IC50值越小)，Person相關系數(shù)分別為：-0.552、-0.733、-0.626、-0.665、-0.537、-0.518、-0.767、-0.754、-0.541和-0.748，表明所對應化學物質(zhì)是清除DPPH自由基的主要活性成分。峰3、4、6、7、8、11、13、14、15、16、17、18(異綠原酸A)和19共13個色譜峰與清除ABTS自由基顯著負相關，Person相關系數(shù)為：-0.594、-0.861、-0.761、-0.829、-0.645、-0.583、-0.676、-0.721、-0.740、0.574、-0.652、-0.720和-0.518，對應物質(zhì)是清除ABTS自由基的主要活性成分。兩種抗氧化方法測定的抗氧化活性(IC50值)均與已知成分綠原酸、燈盞花乙素、異綠原酸B、燈盞花甲素和綠原酸C顯著相關，提示這5種成分是燈盞花抗氧化的主要活性物質(zhì)。

試驗以篩選出的DPPH顯著相關的10個共有峰和總黃酮含量為變量，ABTS顯著相關的13個共有峰和總黃酮含量為變量分別進行CA和PCA分析，均將樣品分成兩類，即野生的S014和S016為一類，其余14批種植的為一類。推測可能與燈盞花的生長環(huán)境(光照、海拔、經(jīng)緯度等)、采收期等因素有關。同時，以這些成分為變量建立了燈盞花標準湯劑的評分模型，16批標準湯劑的得分排序與體外抗氧化活性強弱排序基本一致。筆者在CA和PCA的基礎上進一步進行OPLS-DA分析，找出了與清除DPPH自由基相關的4個主要差異成分：峰11、15(燈盞花甲素)、14(異綠原酸B)和峰13(燈盞花乙素)；與清除ABTS自由基相關的4個主要差異成分：峰11、15、14和峰8(燈盞花乙素)。研究結果提示在控制燈盞花質(zhì)量時，應在控制含量較高的燈盞花乙素(即野黃芩苷)[1]的基礎上，應適當增加其他藥效活性較強的質(zhì)控指標。

綜上，本研究將化學指紋圖譜與生物活性評價相結合，通過譜效相關性研究，初步探討了燈盞花標準湯劑的抗氧化活性成分，所建立的方法操作簡便，結果可靠，可為進一步研究燈盞花的藥理作用及質(zhì)量評價提供依據(jù)。后續(xù)可以加大樣本量，采用液質(zhì)聯(lián)用技術對標準湯劑未知成分的共有峰進行指認、藥理活性及綜合多種藥理活性的譜效關系研究，為燈盞花的質(zhì)量研究提供依據(jù)。