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        未破裂顱內動脈瘤病人血清miR-448-3p、KLF5表達水平及臨床意義

        2022-07-07 04:45:00薛誠馬駿
        臨床外科雜志 2022年6期
        關鍵詞:腦血管引物炎癥

        薛誠 馬駿

        顱內動脈瘤是一種對人類健康危害嚴重的腦血管疾病[1]。隨著老齡化的加劇及血管成像檢查的普及,未破裂顱內動脈瘤在越來越多的老年病人中被檢出[2]。炎性反應介導的血管破壞及重構是導致動脈瘤形成、進展及破裂的重要機制[3-4]。Krüpple樣因子5(krüppel-like factor 5,KLF5)在血管生成、細胞增殖、遷移及炎癥等血管重構過程中發(fā)揮重要作用[5-6]。miR-448-3p可通過下調KLF5介導的炎癥反應,進而抑制大鼠顱內動脈瘤的進展[7]。本研究檢測未破裂顱內動脈瘤病人血清miR-448-3p、KLF5表達水平,分析兩者與病人臨床特征及體內炎癥水平的關系。

        對象與方法

        一、對象

        2017年9月~2020年5月本院收治的未破裂顱內動脈瘤病人143例為觀察組。納入標準:(1)初次確診,經核磁共振血管成像或腦血管造影診斷為未破裂顱內動脈瘤;(2)病人知情并簽署知情同意書;(3)獲得本院倫理委員會批準。排除標準:合并其他腫瘤、傳染性疾病、感染性疾病及其他嚴重臟器疾病;有嚴重頭部外傷史、腦血管卒中病史者;臨床資料不完整。同期體檢健康者150例為對照組,均經核磁共振血管成像或腦血管造影確定無顱內動脈瘤。兩組一般資料比較,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

        表1 兩組一般資料比較

        二、方法

        1.材料:SYBR Green qRT-PCR試劑盒購自北京百奧萊博科技有限公司;人IL-6、TNF-α酶聯(lián)免疫(ELISA)試劑盒購自上海哈靈生物科技有限公司;ABI 7500型熒光定量PCR儀購于美國Applied Biosystems公司;ELX800型全自動酶標儀購于美國BIO-TEK公司。

        2.血液采集及指標檢測:未破裂顱內動脈瘤病人入院時、體檢者體檢時抽取靜脈血5 ml,4 ℃ 4 000 r/min離心10分鐘,留取上層血清,分裝、置于-80 ℃冰箱保存。血清miR-448-3p、KLF5 mRNA表達水平檢測:將血清樣品置于冰上融化,用TRIzol法提取總RNA。以RNA樣本為模板,反轉錄合成cDNA,反應條件:37 ℃ 16分鐘,84 ℃ 6秒。取cDNA樣本為模板,在熒光定量PCR儀上進行qRT-PCR反應,miR-448-3p、KLF5 mRNA表達結果以2-ΔΔCt相對定量法表示,反應條件:96 ℃ 2分鐘,96 ℃變性15秒,62 ℃退火30秒,70 ℃延伸10秒,共36個循環(huán)。miR-448-3p正向引物:5′-TTATTGCGATGTGTTCCTTATG-3′,逆向引物:5′-ATGCATGCCACGGGCATATACACT-3′;KLF5正向引物:5′-GCTCGCTAGCCTCGAAAGCTAAACGCAATGTCATTTTT-3′,逆向引物:5′-ATGCCTGCAGGTCGACTGTGTCTCACTGTGTATTACATGC-3′;U6正向引物:5′-CTCGCTTCGGCAGCACA-3′,逆向引物:5′-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3′;β-actin正向引物:5′-CTGGGCTACACTGAGCACC-3′,逆向引物:5′-AATGCTATCACCTCCCCTGTGT-3′。血清炎癥水平檢測:將血清樣品置于冰上融化,使用IL-6、TNF-α ELISA試劑盒分別進行檢測,具體操作按試劑盒說明書進行,在加終止液后的10分鐘之內,使用酶標儀(450 nm)測定吸光度(optical density,OD)值,根據IL-6、TNF-α標準液的OD值分別繪制標準曲線,根據血清樣品的OD值計算血清IL-6、TNF-α水平。

        三、統(tǒng)計學分析

        表2 血清miR-448-3p、KLF5 mRNA水平與臨床特征的關系

        結果

        1.兩組血清miR-448-3p、KLF5 mRNA表達水平比較:觀察組和對照組血清miR-448-3p分別為(0.78±0.15)vs (1.26±0.17),KLF5 mRNA方便為(2.17±0.24)和(1.35±0.18),兩組比較,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

        2.未破裂顱內動脈瘤病人血清miR-448-3p、KLF5 mRNA表達水平與臨床特征的關系見表2。結果表明,不同年齡、性別、瘤位置的未破裂顱內動脈瘤病人血清miR-448-3p、KLF5 mRNA水平差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05);與瘤數(shù)目=1個相比,瘤數(shù)目≥2個的未破裂顱內動脈瘤病人血清miR-448-3p水平顯著降低,KLF5 mRNA水平顯著升高,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);與瘤直徑<7 mm相比,瘤直徑≥7 mm的未破裂顱內動脈瘤病人血清miR-448-3p水平顯著降低,KLF5 mRNA水平升高,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

        3.對照組與觀察組血清炎癥水平比較:觀察組與對照組血清IL-6分別為(118.54±8.14)mmol/L 和(34.65±6.23)mmol/L,TNF-α分別為(610.12±34.15)mmol/L 和(136.32±16.38)mmol/L,兩組比較,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

        4.未破裂顱內動脈瘤病人血清miR-448-3p、KLF5 mRNA表達水平與炎癥水平的相關性:相關性分析顯示,未破裂顱內動脈瘤病人血清miR-448-3p與IL-6、TNF-α水平均呈負相關(r=-0.442、-0.471,P<0.05),血清KLF5 mRNA與IL-6、TNF-α水平均呈正相關(r=0.454、0.523,P<0.05)。

        5.未破裂顱內動脈瘤病人血清miR-448-3p水平與KLF5 mRNA水平的相關性:相關性分析結果顯示,未破裂顱內動脈瘤病人血清miR-448-3p水平與血清KLF5 mRNA水平呈負相關(r=-0.429,P<0.05)。

        6.血清miR-448-3p、KLF5 mRNA水平對未破裂顱內動脈瘤的診斷分析:ROC分析結果顯示,血清miR-448-3p表達水平的ROC曲線下面積為0.978(95%CI:0.965~0.990),截斷值為1.00,敏感度為93.7%,特異性為90.7%,約登指數(shù)為0.944;血清KLF5 mRNA表達水平的ROC曲線下面積為0.995(95%CI:0.991~1.000),截斷值為1.77,敏感度為95.8%,特異性為98.7%,約登指數(shù)為0.945。見圖1。

        圖1 ROC分析血清miR-448-3p、KLF5 mRNA水平對未破裂顱內動脈瘤的診斷價值

        討論

        顱內動脈瘤是指顱內動脈在先天性肌層缺陷、后天獲得性內彈力層變性、血流動力學負荷等因素作用下,顱內動脈管腔逐漸異常擴張、膨出,是一種常見的腦血管疾病,常發(fā)于顱底動脈分叉處[8]。顱內動脈血管平滑肌細胞形成的細胞外基質與內彈性層在產生、降解之間的不平衡,會導致腦血管炎癥,進而誘導顱內動脈瘤的形成、生長及破裂,因此認為腦血管炎癥是誘發(fā)顱內動脈瘤形成、生長、破裂的重要因素[9]。本研究亦顯示,觀察組未破裂顱內動脈瘤病人血清IL-6、TNF-α水平較對照組顯著升高,表明炎癥反應參與未破裂顱內動脈瘤發(fā)生,與上述研究結果基本一致,進一步說明炎癥反應是導致未破裂顱內動脈瘤發(fā)生的主要因素。

        未破裂顱內動脈瘤發(fā)生破裂會引起顱內出血,導致嚴重并發(fā)癥,具有較高的潛在致死、致殘風險。盡管僅有少部分病人會出現(xiàn)破裂,但探索影響未破裂顱內動脈瘤形成、生長及破裂的因素以便及時予以積極預防或治療,仍具有重要意義。miRNA是在生物體中調控發(fā)育、分化、衰老等生物學過程的重要分子,能調控血管炎癥,可能在動脈瘤形成及發(fā)展中起重要作用[10-11]。秦浩等[12]研究發(fā)現(xiàn),未破裂顱內動脈瘤病人血清miR-126表達升高,miR-125b表達降低,檢測miR-126、miR-125b表達水平有助于判斷未破裂顱內動脈瘤的數(shù)目和直徑。張建忠等[7]研究表明,miR-448-3p可以抑制顱內動脈瘤的進展。本研究顯示,觀察組未破裂顱內動脈瘤病人血清miR-448-3p水平較對照組顯著降低,其水平與病人的年齡、性別、瘤位置無顯著關系,但在不同瘤數(shù)目、瘤直徑病人中差異顯著,即血清miR-448-3p水平與瘤數(shù)目、瘤直徑關系密切,表明miR-448-3p參與未破裂顱內動脈瘤發(fā)生及生長。本研究顯示,未破裂顱內動脈瘤病人血清miR-448-3p水平與血清IL-6、TNF-α水平呈負相關,表明miR-448-3p在未破裂顱內動脈瘤中的表達與炎癥反應關系密切。

        KLF5是含有鋅指結構的、能調控DNA轉錄的轉錄因子,在炎癥因子刺激下,能激活炎癥反應信號通路,進一步加重炎癥反應,能在血管重塑過程中發(fā)揮重要作用。莊紅等[13]研究表明,沉默KLF5能通過抑制NF-κB通路,減少氧化應激條件下的心肌細胞炎癥因子分泌。張曼莉等[14]研究表明,KLF5能與NF-κB p50相互作用,對高糖誘導血管平滑肌細胞炎癥反應起促進作用。周靜等[6]研究表明,桑黃素能改善糖尿病血管的炎性病變,其機制與抑制KLF5表達有關。本研究顯示,觀察組未破裂顱內動脈瘤病人血清KLF5 mRNA水平較對照組顯著升高,其水平在不同瘤數(shù)目、瘤直徑病人中差異顯著,表明KLF5參與未破裂顱內動脈瘤的形成、生長。進一步相關性分析結果表明,未破裂顱內動脈瘤病人血清KLF5 mRNA水平與血清IL-6、TNF-α水平呈正相關,與血清miR-448-3p水平呈負相關,表明KLF5參與未破裂顱內動脈瘤病人體內的炎癥反應,且與miR-448-3p表達關系密切。ROC曲線評估結果顯示,血清miR-448-3p、KLF5 mRNA表達水平診斷未破裂顱內動脈瘤的ROC曲線下面積分別為0.978、0.995,敏感度分別為93.7%、95.8%,特異性分別為90.7%、98.7%,均具有一定診斷價值。

        綜上所述,未破裂顱內動脈瘤病人血清miR-448-3p水平升高,KLF5 mRNA水平降低,兩者關系密切,可能共同調控體內炎癥反應,影響未破裂顱內動脈瘤進展。

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