韓昌權(quán)， 王恩花， 高 明， 張 琳， 李良群， 楊禮壽，鄧廷飛， 葛麗娟， 張富林， 嚴(yán)艷芳， 楊小生， 潘 雄

（1.貴州農(nóng)業(yè)職業(yè)學(xué)院，貴州清鎮(zhèn) 551400；2.省部共建藥用植物功效與利用國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室（貴州醫(yī)科大學(xué)），貴州貴陽 550014；3.貴州省中國科學(xué)院天然產(chǎn)物化學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，貴州貴陽 550014）

貴州黑山羊是我國三大優(yōu)良地方山羊之一，因具有耐粗飼、 食性廣和肉質(zhì)好等特點(diǎn)被列入地方優(yōu)良品種保護(hù)名錄（Liao 等，2018； 許茹琳等，2014）。 貴州喀斯特地貌平地較少，且隨著貴州黑山羊飼養(yǎng)數(shù)量的逐年增加，飼料原料供不應(yīng)求，導(dǎo)致飼料成本不斷增加；此外，隨著我國養(yǎng)殖業(yè)集約化程度不斷提高，為了降低動物患病的風(fēng)險(xiǎn)，飼料生產(chǎn)中抗生素的使用越來越頻繁， 由于抗生素濫用危害人類的健康， 抗生素的殘留問題已經(jīng)成為公共衛(wèi)生問題（申恒然，2020）。 因此，降低飼料成本及尋找抗生素替代物是當(dāng)務(wù)之急。 黃芪（AMB）是一種重要的傳統(tǒng)中草藥， 常用于提高人體免疫力。現(xiàn)代藥理研究表明，AMB 富含多糖、皂苷和黃酮類生物活性物質(zhì)， 具有增強(qiáng)免疫力、 保護(hù)心血管、抗腫瘤、抗氧化、抗炎等多種生物活性（Zhong等，2012；Liu 等，2007；Pistelli，2002）。目前的研究主要集中在黃芪藥材對人 （Castillo 等，1993）、大鼠（Hong 等，1994）、雞（Wang 等，2010）和豬（Yin等，2009）的生理功能上。然而，對黃芪提取后產(chǎn)生的黃芪藥渣（AMBR）卻鮮有研究。 目前，黃芪藥渣的傳統(tǒng)處理方式為填埋或堆積，這不僅浪費(fèi)資源，而且對環(huán)境也造成破壞。據(jù)報(bào)道，AMBR 可能是一種潛在的天然免疫調(diào)節(jié)劑，具有增強(qiáng)免疫，促進(jìn)動物生長的作用（Abedin 等，2019；Mo 等，2016）。 因此，本試驗(yàn)以貴州黑山羊?yàn)檠芯繉ο?，研究日糧中添加不同比例的AMBR 對貴州黑山羊生長性能、免疫功能和肉品質(zhì)的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 貴州黑山羊16 只，雄性，3 月齡，平均體重（15.0±1.0 kg），購自貴州紫青農(nóng)牧業(yè)發(fā)展有限公司。 AMBR 由中國貴州漢方藥業(yè)有限公司提供，AMBR 殘留的主要活性成分含量見表1。

表1 黃芪藥渣中主要活性成分的含量%

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 將貴州黑山羊隨機(jī)分為4 組：對照組（常規(guī)日糧，CT 組）和常規(guī)日糧中分別添加5%、10%、15% AMBR（G1、G2、G3 組），每組4 個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)1 只。試驗(yàn)在貴州紫青農(nóng)牧業(yè)發(fā)展有限公司養(yǎng)殖地進(jìn)行。 飼料配比及營養(yǎng)水平見表2。整個(gè)試驗(yàn)期為100 d，包括10 d 預(yù)試期和90 d正試期。 預(yù)試期僅喂養(yǎng)基礎(chǔ)日糧，正試期按照表2設(shè)計(jì)進(jìn)行喂養(yǎng)。試驗(yàn)羊單欄飼養(yǎng)，定期打掃羊舍衛(wèi)生，飼養(yǎng)管理?xiàng)l件相同。每日08：00 及17：00 各投料1 次，自由采食，自由飲水。 次日飼喂前清理槽料并稱量剩余飼料，計(jì)算采食量。

表2 試驗(yàn)日糧的組成和營養(yǎng)水平（以干物質(zhì)為基礎(chǔ)）%

1.3 測定指標(biāo)及方法

1.3.1 AMB 及AMBR 活性成分分析 樣品60 ℃下烘干，粉碎后過1 mm 篩網(wǎng)。 參照王煥英（2019）方法測定總黃酮，參照張曉蕾（2018）方法測定多糖和皂苷的含量。

1.3.2 生長性能 試驗(yàn)正式期開始準(zhǔn)確稱取每組羊的空腹體重，試驗(yàn)結(jié)束后準(zhǔn)確稱取每組羊空腹體重。

1.3.3 屠宰性能 胴體重量是屠宰后去掉頭部、蹄內(nèi)臟和羊皮后所得的重量。 屠宰率（DP）的計(jì)算公式為：

1.3.4 免疫球蛋白 分別在正式試驗(yàn)第0 天和第90 天上午06：00 從各組黑山羊頸靜脈采血（5 mL）， 血 清 免 疫 球 蛋 白 （IgG、IgM、IgA） 參 照Hernández-Castellanod 等（2011）方法進(jìn)行測定。

1.3.5 胴體特性 使用便攜式酸度計(jì)測定屠宰后背最長肌0 h 和24 h 的pH， 滴水損失參照張變英（2018）方法測定。

1.3.6 營養(yǎng)成分 按照常規(guī)營養(yǎng)分析方法測定羊肉的水分、灰分、脂肪和蛋白質(zhì)。

1.3.7 揮發(fā)性物質(zhì)測定 稱取背最長肌肉約4.0 g，置于25 mL 固相微萃取儀采樣瓶中， 插入裝有2 cm-50/30 μm DVB/CAR/PDMSStableFlex 纖 維 頭 的手動進(jìn)樣器，在65 ℃的平板加熱條件下頂空萃取60 min 后，移出萃取頭并立即插入氣相色譜儀進(jìn)樣口（溫度250 ℃）中，熱解析進(jìn)樣。對總離子流圖中的各峰經(jīng)質(zhì)譜計(jì)算機(jī)數(shù)據(jù)系統(tǒng)檢索及核對Nist17 和Wiley275 標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜圖，確定揮發(fā)性化學(xué)成分，用峰面積歸一化法測定揮發(fā)性物質(zhì)含量。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析 采用SPSS 19.0 對測量數(shù)據(jù)的差異進(jìn)行單因素方差分析（ANOVA）。 主成分分析（PCA）采用Simca-P 軟件進(jìn)行。

2 結(jié)果

2.1 生長性能 由表3 可知，各試驗(yàn)組的初始體重?zé)o明顯差異，但添加AMBR 后，G3 組與CT、G1組相比， 最終體重、 胴體重和屠宰率顯著性增加（P＜0.05）， 最終體重分別增加了24.86%和21.05%，胴體重分別增加了36.55%和26.95%，屠宰率分別增加了9.32%和4.83%； 此外，G1 組和G2 組貴州黑山羊的最終體重、胴體重和屠宰率均高于CT 組， 但無顯著差異（P＞0.05），G2 和G3之間的最終體重、 胴體重和屠宰率也沒有顯著差異（P＞0.05）；日糧中添加不同比例的AMBR 均能降低料重比，但僅G3 組（15% AMBR）與CT 組存在顯著性差異（P＜0.05），其他組間無顯著性差異（P＞0.05），其中G3 組與CT 組相比，料重比降低了28.69%。

表3 不同AMBR 比例對貴州黑山羊屠宰性能的影響

2.2 免疫球蛋白 （IgG、IgM 和IgA） 由表4 可知，驗(yàn)開始前，各組別貴州黑山血清中IgG、IgM 和IgA 含量無明顯差異， 但正式試驗(yàn)90 d 后，G2 和G3 組的IgG、IgM 和IgA 水平均高于CT 組 （P＞0.01），G2 組與CT 組相比，IgG、IgM 和IgA 分別提高了185.77%、31.16%、46.05%，G3 組與CT 組相比，IgG、IgM 和 IgA 分 別 提 高 了 264.79% 、25.03%、28.74%。

表4 不同AMBR 比例對貴州黑山羊免疫球蛋白的影響 μg/mL

2.3 胴體特性及營養(yǎng)組成 由表5 可知， 不同AMBR 比例對貴州黑山羊胴體特性 （滴水損失、pH0h、pH24h）和營養(yǎng)成分（水分、蛋白質(zhì)、脂肪、灰分）沒有顯著影響（P＞0.05）。

表5 不同比例AMBR 對貴州黑山羊肉胴體特性和營養(yǎng)成分的影響

2.4 揮發(fā)性風(fēng)味物質(zhì) 共鑒定出28 種揮發(fā)性成分， 包括3 種烴類、8 種醛、7 種醇、6 種酮和4 種其他物質(zhì)，結(jié)果見表6，各物質(zhì)的百分含量無明顯差異（P＞0.05），進(jìn)一步采用PCA 分析，結(jié)果如圖1 所示，在PCA 圖中，這四個(gè)組的揮發(fā)性化合物很大程度上相互重疊。

圖1 肌肉樣品揮發(fā)性成分PCA 分析

表6 不同比例AMBR 對貴州黑山羊肌肉揮發(fā)性成分的影響%

3 討論

3.1 生長性能 生長性能是反映動物生長狀況，決定養(yǎng)殖效益的重要指標(biāo)。近年來，許多中草藥因具有廣泛的生理作用被用于改善動物的生長性能（Zhao 等，2016），例如，研究報(bào)道，添加適量的中草藥可以提高豬、 雞和其他家禽的生長性能（Abedin 等，2019；Wang 等，2011；Kong 等，2007）。其原因可能是中草藥活性成分具有改善動物的腸道健康、增強(qiáng)抗氧化功能和免疫力的作用（胡金杰等，2016）。 本試驗(yàn)對黃芪藥渣殘留的活性成分分析發(fā)現(xiàn)， 黃芪藥渣中多糖殘留量為原藥材的40%，總黃酮為50%，皂苷為47%。 飼養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)果表明，常規(guī)日糧中添加15% AMBR 顯著改善了貴州黑山羊的生長性能，這與鮑玉林（2019）、萬瑪吉（2020）等的研究結(jié)果一致，但他們的研究采用的黃芪多糖作為添加物， 需要對黃芪進(jìn)行提取后利用，而本試驗(yàn)是直接采用黃芪渣進(jìn)行添加，這能夠大大降低飼養(yǎng)成本。

3.2 免疫功能 免疫球蛋白是一種重要的免疫效應(yīng)分子， 其中IgG、IgM、IgA 是動物血清中重要的免疫球蛋白，具有抗菌、抗病毒、激活補(bǔ)體等生物學(xué)功能， 其含量水平可以反映動物免疫功能的強(qiáng)弱（郭元晟，2016）。 IgG 和IgA 發(fā)揮抗菌、抗病毒和其他免疫活性的作用， 是黏膜和體液免疫的主要效應(yīng)者（Song 等，2020）。 IgM 在殺菌、補(bǔ)體激活、免疫調(diào)節(jié)和凝集中起關(guān)鍵作用，也參與一些自身免疫性疾病和超敏反應(yīng)的病理過程（Zhong 等，2012）。 Zhong 等（2012）研究發(fā)現(xiàn)，日糧中添加黃芪根能增強(qiáng)羔羊IgM 的產(chǎn)生（P＜0.001），鮑玉林等（2019）研究發(fā)現(xiàn)，日糧中添加0.1%黃芪多糖能增強(qiáng)舍飼藏羊中IgG、IgM、IgA 的產(chǎn)生。 本研究添加10%或15%的黃芪藥渣能增強(qiáng)貴州黑山羊中IgG、IgM、IgA 的產(chǎn)生，這與以上結(jié)果類似。 多糖、皂苷和黃酮是黃芪的主要活性成分， 而且本研究發(fā)現(xiàn)黃芪藥渣還殘留大量活性成分，其中，多糖可以作為潛在的免疫調(diào)節(jié)劑， 在飲食中添加多糖可以增強(qiáng)動物的免疫功能 （Tan 等，2017；Yuan 等，2007）。 在本研究中，G2 組和G3 組IgA、IgG 和IgM 的升高可能與殘留的活性成分有關(guān)。

3.3 肉品質(zhì) pH 是最具代表性的肉特性參數(shù)，因?yàn)槠淇捎绊戭伾?、剪切力、烹飪重量損失、保水性和風(fēng)味，此外，滴水損失也是影響肉品質(zhì)的主要指標(biāo)（Costa 等，2012 年；Webb 等，2005）。 新鮮屠宰肉的pH 在6.0 ～7.0， 一般在屠宰后由于乳酸的積累而下降，24 h 后降低到6 以下（Corazzin等，2019）。 本試驗(yàn)測定了屠宰后各試驗(yàn)組在0 h和24 h 的pH， 結(jié)果表明，CT、G1、G2 及G3 組的pH 隨屠宰時(shí)間的延長而持續(xù)下降， 且各試驗(yàn)組24 h 內(nèi)pH 變化符合鮮肉pH 標(biāo)準(zhǔn)，并且各組間無顯著差異。 一般認(rèn)為，蛋白質(zhì)含量越高，肉的營養(yǎng)價(jià)值越好， 粗灰分含量與礦物質(zhì)含量呈正相關(guān)（Dalziel 等，2015）。 結(jié)果表明，補(bǔ)充AMBR 對貴州黑山羊的滴水損失、pH、水分、蛋白質(zhì)、脂肪和灰分均沒有顯著影響，即添加AMBR 不會對貴州黑山羊的營養(yǎng)產(chǎn)生負(fù)面影響。

揮發(fā)性物質(zhì)是肉類風(fēng)味評價(jià)的關(guān)鍵因素，受動物日糧、 品種、 環(huán)境等條件的影響（Vasta 等，2007）。羅玉龍等（2017）通過比較3 個(gè)不同部位羊肉的揮發(fā)性風(fēng)味成分， 篩選影響風(fēng)味的物質(zhì)為醛類和醇類，主要風(fēng)味化合物為己醛、壬醛、1-辛烯-3-醇和2，3-辛二酮。 本試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)醛類和醇類占揮發(fā)性物質(zhì)的主要含量，其中壬醛含量占總揮發(fā)性物質(zhì)的20%以上，1-辛烯-3-醇占6%以上，這以羅玉龍等（2015）的研究基本吻合。揮發(fā)性物質(zhì)的含量是決定香氣濃郁一個(gè)關(guān)鍵因素，這說明醛類和醇類對貴州黑山羊肉的香氣具有較大影響。烴類物質(zhì)主要由脂肪酸烷氧自由基的均裂產(chǎn)生，但由于其香味閾值較高（羅玉龍等，2017），且在本研究中發(fā)現(xiàn)烴類物質(zhì)含量占比較小，說明其對貴州黑山羊肉的直接風(fēng)味影響不大。 在本研究中，四組山羊的揮發(fā)性成分含量沒有顯著性差異， 且四組之間的PCA圖較大程度重疊， 說明添加AMBR 對貴州黑山羊的揮發(fā)性物質(zhì)沒有負(fù)面影響。

4 結(jié)論

在常規(guī)日糧中添加適量的AMBR 能提高貴州黑山羊的生長性能及免疫功能， 且對肉品質(zhì)無不良影響。因此，在貴州黑山羊日糧中添加AMBR是降低貴州黑山羊飼養(yǎng)成本或替代抗生素飼料的潛在途徑，并可緩解草藥渣對環(huán)境的污染威脅。